QUANTA LiteTM gp210

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Para Diagnóstico In Vitro Complejidad de CLIA: Alto

Aplicación El kit gp210 QUANTA LiteTM es un análisis de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) para la detección semicuantitativa del anticuerpo anti-gp210 de clase IgG en el suero humano. Esta prueba está pensada para ayudar en el diagnóstico de la Cirrosis Biliar Primaria (CBP).

Resumen y Descripción de la prueba La Cirrosis Biliar Primaria (CBP) es una enfermedad hepática crónica caracterizada por la destrucción de los pequeños conductos biliares intrahepáticos. La destrucción progresiva de los conductos provoca un aumento de la disfunción hepática y, con el tiempo, puede llevar a una insuficiencia hepática y a la necesidad de realizar un transplante de hígado.1,2 Se desconoce la etiología de la CBP aunque puede que un componente genético, así como otros factores, resulten importantes para el desarrollo de la enfermedad. 1,3,4

La CBP se produce normalmente entre las edades de 30 y 65 años y afecta con mayor frecuencia a las mujeres que a los hombres (relación estimada mujeres:hombres de 9:1).1,3 El grado de difusión de la CBP en parientes de primer nivel de los pacientes de CBP va del 1.3 al 6.4%.3,5,6 La CBP se produce en todas las etnias y está ampliamente distribuida en todo el mundo. Se han encontrado grandes variaciones en la extensión geográfica de la CBP, con estimaciones que van desde el 2 por 100.000 en Japón y Australia, hasta el 40 por 100.000 en los Estados Unidos.7,8 Los análisis serológicos suponen una ayuda importante para el reconocimiento y diagnóstico de la CBP ya que muchos anticuerpos asociados con la CBP aparecen antes de que se manifiesten los síntomas.9 Los anticuerpos antimitocondriales (AMA), detectados mediante análisis indirectos de inmunofluorescencia (AIF), son los marcadores serológicos habituales de la CBP. Los AMA se detectan entre el 90 y el 95 % de los pacientes de CBP. Aunque se puede interpretar fácilmente el patrón clásico de AIF, la interpretación puede resultar difícil sobre todo cuando también aparecen anticuerpos con otras características. El principal objetivo de la reactividad de los AMA son las proteínas de los complejos de oxoácido 2 dehidrogenasa situados en la membrana mitocondrial. Los análisis ELISA que se ocupan de estas proteínas son más sensibles que los AIF para la detección de los AMA.4,10,11 Sin embargo, al menos entre el 5 y el 10% de los pacientes de CBP presentan resultados negativos de AMA tanto en los análisis de AIF como de ELISA. La ausencia de AMA o de otros marcadores de CBP puede contribuir a retrasar el diagnóstico de la CBP y a la posibilidad de un mayor daño hepático. Alrededor del 50% del suero procedente de pacientes de CBP contiene anticuerpos antinucleares (ANA).12,13 Uno de los ANA asociados específicamente a la CBP es una mancha en el borde de la membrana del núcleo, característica de la proteína gp210 de la membrana nuclear.12,14 Esta proteína forma parte de un complejo de proteínas que crea poros en la membrana nuclear. Los anticuerpos anti-gp210 pueden detectarse en aproximadamente el 25% de los pacientes de CBP y entre el 10 y el 50% de los pacientes de CBP que dan negativo en AMA.12-16 Aunque los anticuerpos gp210 poseen una sensibilidad relativamente baja a la CBP, su especificidad parece ser superior al 99%. 12,15-17 Además, los anticuerpos gp210 pueden identificar a un subgrupo de pacientes que presentan una evolución más grave de la enfermedad.13,18-20 La presencia de anticuerpos gp210 puede reforzar el diagnóstico de CBP en los casos en que su presencia clínica puede no ser clara. La presencia de anticuerpos AMA y gp210 puede preceder al desarrollo de la sintomatología de la enfermedad.9,20,21 La capacidad para determinar con mayor precisión y rapidez la posibilidad de que los pacientes padezcan CBP, permite monitorizar e iniciar el tratamiento con mayor antelación, lo que puede ralentizar el avance de la enfermedad. Con frecuencia, la detección del patrón de borde nuclear asociado a los anticuerpos anti-gp210 resulta difícil para interpretarlo como resultado del tintado coincidente de AMA o ANA y también puede ser el resultado de las especificidades de la ausencia de gp210.12,22 La detección de anti-gp210 mediante transferencia de Western es tediosa, de gran exigencia técnica y está basada en una interpretación subjetiva de la intensidad de la banda.15 Los estudios moleculares han identificado un epitopo inmunodominante del gp210 en el terminal carboxilo de la cola citoplásmica de la proteína gp210 y esto ha permitido desarrollar los análisis ELISA para la detección de anticuerpos gp210.16,17,22,23.

Procedimiento de trabajo Un péptido purificado que corresponde a una porción de la proteína gp210 está adherido a las cavidades de una placa microperforada de poliestireno. Se añaden controles y muestras convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la incubación los anticuerpos anti gp210 al antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se elimina mediante lavado y se añade conjugado anti IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite que el conjugado se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se añade un sustrato cromogénico y tras incubación la actividad enzimática presente en el pocillo es proporcional a la intensidad de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado fotométricamente comparando la intensidad de color en las muestras con la de los controles.

Reactivos 1.

Microplaca ELISA de poliestireno con pocillos recubiertos con péptido antígeno gp210 purificado (121

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

1 x 8 pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con desecante Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de anticuerpos humanos anti gp210, prediluido, 1.2 ml Control ELISA gp210 Positivo Débil, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano con anticuerpos anti gp210, prediluido, 1.2 ml Control ELISA gp210 Positivo Fuerte, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano con anticuerpos anti gp210, prediluido, 1.2 ml Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y conservante, 50 ml Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución. Conjugado HS HRP IgG, con anti- IgG humana de cabra, 1 frasco - color morado conteniendo tampón, estabilizante de proteína y conservante, 10ml Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml

Advertencias 1. 2.

3.

4. 5. 6.

7. 8.

Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y conjugado, considerado en el estado de California como causante de cáncer. Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HbsAg, y HCV por métodos aprobados por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles gp210 ELISA positivo fuerte, gp210 ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como si fueran material potencialmente contagioso.24 Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de dichas azidas metálicas. El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos. El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos. La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con piel y ojos. Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit. Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su laboratorio acerca de la eliminación de residuos.

Precauciones 1. 2. 3. 4.

5.

6. 7. 8.

9.

Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro. La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultados inconsistentes. Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado. La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos, totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables. Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles. Se recomienda seguir estrictamente el protocolo. El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados. Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para este producto para evitar que esto ocurra. La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.

Condiciones de Almacenaje 1. 2.

Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente. Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes 2

3.

cerrándola herméticamente y almacenándola a 2-8ºC. La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.

Recolección de Muestras Este kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que contengan partículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas. Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento NCCLS H18-A3 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas, refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las muestras, congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben agitarse bien antes de utilizarse.

Procedimiento Materiales Suministrados 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Microplaca gp210 ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte 1.2 ml control prediluido ELISA negativo 1.2ml control prediluido gp210 ELISA Positivo Débil 1.2ml control prediluido gp210 ELISA Positivo Fuerte 50ml Diluyente de muestra HRP 25ml Solución de lavado concentrada 40X 10ml Conjugado HS IgG (cabra) anti IgG humana 10ml Cromógeno TMB 10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)

Material necesario no incluido Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl Puntas desechables para micropipeta Tubos para dilución de muestras, 4ml Agua destilada Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble longitud de onda)

Metodología Antes de empezar 1. 2.

3.

4.

Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar. Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml. de agua destilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de solución de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16 pocillos que vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2-8°C. Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO DILUIR los controles gp210 ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo. La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti gp210 usando unidades arbitrarias requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para cada muestra. Se recomienda que las muestras se hagan por duplicado.

Procedimiento de Ensayo 1.

2.

3.

4.

5. 6.

TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para minimizar la exposición a la humedad. Agregar 100µl de los controles prediluidos gp210 ELISA Positivo Débil, gp210 ELISA Positivo Fuerte, ELISA Negativo y las muestras prediluidas a los pocillos. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana. El tiempo de incubación empieza después de la adición de la última muestra. Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de muestras. Agregar 100µl de Conjugado HS IgG HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como en el paso 2. Lavado: Repetir el paso 3. Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. 3

7.

8.

Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para mezclar bien los pocillos. Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de referencia.

Control de Calidad 1.

2.

3.

4.

Los controles gp210 ELISA Positivo Débil, gp210 ELISA Positivo Fuerte y Control Negativo ELISA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos los reactivos y procedimientos funcionan correctamente. El usuario debe tener en cuenta que debido a que los controles gp210 ELISA Positivo Débil, gp210 ELISA Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, pueden no ser adecuados en procedimientos que conlleven la dilución de especímenes. Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe almacenarse a < -20°C. Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y repetirse. a. La absorbancia del control gp210 Positivo debe ser superior a la del control gp210 positivo débil y la de este debe ser superior a la del control negativo. b. El control gp210 positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras que la del control negativo no debe exceder de 0.2. c. La absorbancia del control gp210 positivo débil debe ser superior al doble del control negativo, u oscilar entre 0.25. d. Los controles ELISA negativo y gp210 positivo fuerte están pensados para monitorizar problemas de reactivo de magnitud substancial. El control gp210 positivo fuerte no puede asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo. e. El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical Laboratory Standards) C24-A2 para una guía adicional acerca de buenas prácticas de laboratorio.25

Cálculo de Resultados Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por la densidad óptica promedio del control gp210 positivo débil. DO Muestra Valor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil (unidades) DO ELISA Positivo Débil (unidades) La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente. Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán en el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (por ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se deseara una cuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de anticuerpo de la muestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.

Interpretación de los Resultados La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de pacientes. Las muestras se interpretan como negativas (negativa de anticuerpo IgG para gp210), dudosas o positivas (detectado anticuerpo IgG para gp210) de acuerdo con la tabla siguiente: Negativa Dudosa Positiva 1. 2.

3. 4.

5.

0.0 – 20.0 20.1 – 24.9 ≥ 25

unidades unidades unidades

Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos IgG para gp210 y sugiere la posibilidad de Cirrosis Biliar Primaria. No se puede valorar una muestra de prueba con niveles dudosos de IgG para gp210 para determinar la categoría de los anticuerpos. Si los resultados siguen siendo dudosos después de repetir la prueba, el resultado se debe presentar como dudoso y se debe tomar una muestra adicional. Un resultado negativo indica que no existen anticuerpos IgG para gp210 o que los niveles están por debajo del límite de detección del análisis. Las muestras de prueba que producen lecturas DO por encima del rango de lectura del lector de placa deben presentarse como superiores al DO de medición más elevada, dividido por el DO positivo inferior multiplicado por 25, o bien, se pueden diluir, volver a analizar y obtener un valor calculado. Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes resultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA LiteTM gp210 ELISA. Los valores obtenidos con 4

kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La magnitud de los niveles informados de IgG no puede correlacionarse con un punto final.”

Limitaciones del Procedimiento 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Un resultado negativo de gp210 no descarta la presencia de Cirrosis Biliar Primaria. Un resultado negativo de anticuerpo de gp210 no descarta la presencia de anticuerpos de gp210 ya que la concentración de anticuerpos puede ser inferior al límite de detección del análisis. Un resultado positivo de la prueba sólo indica la presencia de anticuerpos para gp210 y no indica necesariamente la presencia de Cirrosis Biliar Primaria. Para el diagnóstico de la Cirrosis Biliar Primaria es necesario recopilar la documentación de los datos de filiación del paciente, la presencia clínica y otras pruebas de diagnóstico. Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras pruebas serológicas. La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.

Valores Esperados El grado de difusión de la CBP va desde las estimaciones del 2 por 100,000 en Japón y Australia al 40 por 100,000 en Estados Unidos.7,8 Los estudios que utilizan AIF, transferencia de Western y diversos métodos ELISA sugieren que los anticuerpos anti-gp210 están presentes en aproximadamente el 26% de los pacientes con CBP.15 La especificidad para CBP se acerca al 100%.12

Rango Normal Anticuerpos de gp210 en individuos sanos asintomáticos Se realizaron pruebas de anticuerpos de gp210 a un grupo de 236 individuos sanos y asintomáticos utilizando el método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM. Los datos sobre edad y sexo estaban disponibles para 188 de las muestras de prueba, sólo existían datos sobre el sexo de 28 de las muestras de prueba y no existían datos para 20 de las muestras de prueba. El rango de edad de la prueba estaba entre los 17 y los 73 años y en ella participaban 55 hombres y 78 mujeres. La especificidad del análisis ha sido del 100% (236/236). El valor medio para esta población ha sido de 3.7 unidades. El valor intermedio 3.4 unidades. A excepción de una muestra de prueba con un valor de 16.5 unidades, las otras 235 muestras de prueba presentaron valores inferiores a 9.2 unidades.

Características específicas de rendimiento En la tabla 1 se muestra la frecuencia de la presencia de anticuerpos de gp210 detectada mediante el método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM sobre un total de 343 muestras de prueba de CBP y 5 de CBP/hepatitis autoinmune (HAI). El análisis almacenó los resultados obtenidos mediante el método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM en 3 grupos clínicos de referencia. La sensibilidad global del análisis ha sido del 26.1% (91/348). La especificidad del análisis ha sido del 100%. El valor positivo predecible fue del 100% y el valor negativo predecible fue del 62%. Los valores medio e intermedio de todas las muestras sin CBP o con CBP/HAI fueron 3.59 y 3.71 respectivamente. Tabla 1: Sensibilidad del método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM Grupo de pacientes n= pos dudo neg CBP 343 89 2 252 CBP/HAI 5 2 0 3 Total 348 91 2 255 Sensibilidad: 26.1% (91/348) Se realizaron pruebas con sueros procedentes de 183 pacientes con enfermedad hepática sin CBP, enfermedad autoinmune y otras afecciones utilizando el método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM para evaluar la especificidad del análisis. El método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM no interpretó como positivas ninguna de las muestras de prueba sin CBP o sin CBP/HAI, como se muestra en la Tabla 2. La especificidad global del análisis para gp210 de QUANTA LiteTM, que incluía controles de sueros sanos y con enfermedad sin CBP fue, por lo tanto, del 100% (419/419). Tabla 2: Especificidad del método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM Grupo de pacientes n= pos dudo neg VHB 35 0 0 35 VHC 42 0 0 42 LES 28 0 0 28 HAI1 9 0 0 9 HAI2 7 0 0 7 Artritis reumatoide 56 0 0 56 Colangitis esclerosante primaria 1 0 0 1 Escleroderma 5 0 0 5 Normal 236 0 0 236 Total 419 0 0 419 Especificidad (todas las muestras de prueba sin CBP o con CBP/HAI) Valor positivo predecible: 100% Valor negativo predecible: 62% 5

Precisión y Reproducibilidad Se evaluó el rendimiento intra-ensayo mediante el análisis de 10 muestras de prueba un total de 6 veces cada una. Tabla 3: Rendimiento intra-ensayo del método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM A B C D E F G H I J Mean unit 83.5 113.8 140.8 5.3 5.4 18.6 29.3 21.0 25.0 25.8 SD 2.0 0.9 3.5 0.6 0.6 0.9 0.7 1.2 0.9 1.2 CV % 2.4 0.8 2.5 11.2 11.8 4.8 2.5 5.5 3.0 4.8 El rendimiento inter-ensayo se evaluó realizando pruebas por duplicado, 5 muestras de prueba dos veces al día (una vez por la mañana y otra por la tarde) durante tres días. Tabla 4: Rendimiento intra-ensayo del método ELISA para gp210 de QUANTA LiteTM 1 2 3 4 5 Mean units 82.9 84.8 117.6 147.0 5.8 SD 2.1 3.0 3.9 6.1 1.0 CV % 2.5 3.5 3.3 4.1 12.1

6

Referencias 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

11. 12. 13. 14. 15. 16.

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18.

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