QUANTA LiteTM SLA

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Para Diagnóstico In Vitro Complejidad de CLIA: Alto

Aplicación QUANTA LiteTM SLA (antígeno soluble hepático) es un ensayo basado en la técnica de ELISA (EnzymeLinked Immunosorbent Assay) para la detección semicuantitativa de anticuerpos contra SLA de la clase IgG en suero humano. La presencia de anticuerpos contra SLA puede servir, en conjunción con hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio, como ayuda en el diagnóstico de condiciones con grandes niveles de anticuerpos contra SLA, incluida la hepatitis autoinmune (HAI).

Sumario y Explicación de la prueba La hepatitis autoinmune (HAI) es una enfermedad inflamatoria heterogénea crónica y progresiva del hígado cuya etiología es desconocida1-6. El diagnóstico suele ser complejo porque no existe una única prueba de diagnóstico y los síntomas que se presentan son variados1-6. El diagnóstico incluye la evaluación de hallazgos clínicos, de laboratorio e histológicos, así como la exclusión de otras causas de hepatitis crónica16 . El diagnóstico es especialmente complejo en los pacientes clasificados con hepatitis criptogénica, descritos como pacientes con hepatitis crónica indefinida sin anticuerpos contra marcadores virales ni el perfil convencional de marcadores autoinmunes1-2. El diagnóstico temprano de la HAI y el tratamiento inmunosupresor son esenciales para ayudar a prevenir el daño hepático severo. Desafortunadamente, la falta de certeza para determinar un diagnóstico puede acarrear demoras en el tratamiento y la progresión continua de la enfermedad7-8. Los pacientes con HAI se dividen, por lo general, en dos grupos según la presencia de autoanticuerpos específicos1-6,9,10. La HAI tipo 1 (también denominada hepatitis clásica, crónica activa, lupoide, de células plasmáticas o autoinmune crónica activa) es la más común. Se caracteriza por tener anticuerpos citoplasmáticos antinucleares, antimúsculo liso (dirigidos contra los componentes antiactina y no actina) y antineutrófilos perinucleares1,4,6. La HAI tipo 2 se caracteriza por tener anticuerpos antimicrosomales de hígado o riñón (LKM-1), dirigidos principalmente contra el citocromo P450 2D6 y el antígeno anticitosol hepático (LC-1)4,6,11. Los pacientes con HAI-1 dan negativo en anticuerpos contra LKM-1 y LC1. En 1987 se identificaron anticuerpos contra el antígeno soluble hepático (SLA) citosólico en 23 pacientes con hepatitis crónica negativos para HbsAg, para ANA y para LKM-112. Además, se detectaron anticuerpos contra otra proteína citosólica hepática soluble, llamada antígeno hepático pancreático (LP), en algunos pacientes con HAI12. En la actualidad, se sabe que los anticuerpos contra SLA y LP reconocen al mismo antígeno como blanco13. El SLA es una proteína de unos 50 kda, con un 99% de homología con la proteína asociada al tARN supresora de UGA, que puede estar involucrada en el metabolismo de la selenocisteína1415 . Si bien la citoqueratina 8, la citoqueratina 18 y la glutatión S-transferasa se consideran los blancos más importantes de la reactividad del SLA, esto no está respaldado por estudios posteriores14,16-19. Si bien sólo alrededor del 12-30% de los pacientes con HAI posee anticuerpos contra SLA, la presencia de estos alcanza casi el 100% de especificidad respecto a la HAI8,10,14,19-20. Se estima que el 70-80% de los pacientes con HAI tiene ANA o SMA y un pequeño porcentaje posee anticuerpos contra LKM-1. Alrededor del 10-30% de los pacientes con características clínicas de HAI no muestra títulos significativos de anticuerpos contra ninguno de estos marcadores1,2,7,12. En la actualidad, la respuesta terapéutica al tratamiento antiinflamatorio puede no ser el único indicio de la presencia de HAI en estos pacientes1,2. Se detectaron anticuerpos contra SLA en el 14-20% de los pacientes con hepatitis criptogénica13,19,20. En consecuencia, la prueba de SLA puede contribuir a formular un diagnóstico de HAI y a disminuir la progresión de la enfermedad como consecuencia de la demora en el tratamiento. El reconocimiento exacto de la HAI es esencial, ya que los tratamientos para la HAI y la hepatitis viral difieren sobremanera. La inmunosupresión utilizada para la HAI puede ser perjudicial en los casos de infección viral y el tratamiento con interferón puede empeorar la HAI21. Se viene considerando la posibilidad de designar un tercer tipo de HAI, basado principalmente en la presencia de anticuerpos contra SLA, pero es probable que no sea necesaria4,6,9,19. Los pacientes positivos en anticuerpos contra SLA semejan a los pacientes con HAI-1 no positivos para SLA en lo que concierne a la mayoría de características clínicas, histológicas y de laboratorio9,10,19, pero los primeros tienen una asociación con los HLA DR3 y pueden ser propensos a recaídas tras interrumpir la administración de corticosteroides22. Las formas variantes de la HAI en donde los pacientes presentan características típicas de HAI y cirrosis biliar primaria (CBP) o colangitis esclerosante primaria (CEP) suelen denominarse síndromes de solapamiento. Estos síndromes, junto con la colangitis autoinmune (CAI) —un término propuesto para describir una condición con características histopatológicas de tipo CBP, pero que carecen de anticuerpos antimitocondriales (AMA)1-3,5— pueden causar problemas en el diagnóstico y manejo.

Procedimiento de trabajo El antígeno SLA humano recombinante, parcialmente purificado y de cadena completa se une a los pocillos de la placa de poliestireno en condiciones que preservan el antígeno en su estado original. Se añaden controles y muestras convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la incubación los anticuerpos anti SLA al antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se elimina mediante lavado y se añade conjugado anti IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite que el conjugado se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se añade un sustrato cromogénico y tras incubación la actividad enzimática presente en el pocillo es proporcional a la intensidad de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado fotométricamente comparando la intensidad de color en las muestras con la de los controles. 1

Reactivos 1.

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Microplaca ELISA de poliestireno con pocillos recubiertos antígeno SLA humano recombinante, parcialmente purificado (12-1 x 8 pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con desecante Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de anticuerpos SLA humano recombinante, prediluido, 1.2 ml Control ELISA SLA Positivo Débil, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano con anticuerpos a SLA humano recombinante, prediluido, 1.2 ml Control ELISA SLA Positivo Fuerte, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano con anticuerpos a SLA humano recombinante, prediluido, 1.2 ml Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y conservante, 50 ml Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución. Conjugado HRP IgG, con anti- IgG humana de cabra, 1 frasco - color azul conteniendo tampón, estabilizante de proteína y conservante, 10ml Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml

Advertencias 1. 2.

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7. 8.

Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y conjugado considerado en el estado de California como causante de cáncer. Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HbsAg, y HCV por métodos aprobados por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles SLA ELISA positivo fuerte, SLA ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como si fueran material potencialmente contagioso.23 Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de dichas azidas metálicas. El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos. El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos. La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con piel y ojos. Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit. Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su laboratorio acerca de la eliminación de residuos.

Precauciones 1. 2. 3. 4.

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6. 7. 8.

9.

Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro. La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultados inconsistentes. Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado. La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos, totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables. Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles. Se recomienda seguir estrictamente el protocolo. El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados. Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para este producto para evitar que esto ocurra. La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.

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Condiciones de Almacenaje 1. 2. 3.

Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente. Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes cerrándola herméticamente y almacenándola a 2-8ºC. La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.

Recolección de Muestras Este kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que contengan partículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas. Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento NCCLS H18-A2 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas, refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las muestras, congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben agitarse bien antes de utilizarse. Se deben evitar los ciclos múltiples de congelación y descongelación.

Procedimiento Materiales Suministrados 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Microplaca SLA ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte 1.2 ml control negativo ELISA prediluido 1.2ml control prediluido SLA ELISA Positivo Débil 1.2ml control prediluido SLA ELISA Positivo Fuerte 50ml Diluyente de muestra HRP 25ml Solución de lavado concentrada 40X 10ml Conjugado IgG (cabra) anti IgG humana 10ml Cromógeno TMB 10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)

Material necesario no incluido Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl Puntas desechables para micropipeta Tubos para dilución de muestras, 4ml Agua destilada Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble longitud de onda)

Metodología Antes de empezar 1. 2.

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Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar. Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml de agua destilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de solución de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16 pocillos que vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2-8°C. Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO DILUIR los controles SLA ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo. La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti SLA usando unidades arbitrarias requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para cada muestra. Se recomienda que las muestras se hagan por duplicado.

Procedimiento de Ensayo 1.

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4.

TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para minimizar la exposición a la humedad. Agregar 100µl de los controles prediluidos SLA ELISA Positivo Débil, SLA ELISA Positivo Fuerte, ELISA Negativo y las muestras prediluidas a los pocillos. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana . El tiempo de incubación empieza después de la adición de la última muestra. Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de muestras. Agregar 100µl de Conjugado IgG HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A 3

5. 6. 7.

8.

SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como en el paso 2. Lavado: Repetir el paso 3. Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura ambiente. Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para mezclar bien los pocillos. Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de referencia.

Control de Calidad 1.

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Los controles SLA ELISA Positivo Débil, SLA ELISA Positivo Fuerte y Control Negativo ELISA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y procedimientos funcionan correctamente. El usuario debe notar que debido a que los controles SLA ELISA Positivo Débil, SLA ELISA Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados con dilución de especímenes. Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe almacenarse a < -20°C. Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y repetirse. a. La absorbancia del control SLA Positivo debe ser superior a la del control SLA positivo débil y la de este debe ser superior a la del control negativo. b. El control SLA positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras que la del control negativo no debe exceder de 0.2. c. La absorbancia del control SLA positivo débil debe ser superior al doble del control negativo, u oscilar entre 0.25. d. Los controles ELISA negativo y SLA positivo fuerte están pensados para monitorizar problemas de reactivo de magnitud substancial. El control SLA positivo fuerte no puede asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo. e. El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical Laboratory Standards) C24-A para una guía adicional acerca de buenas prácticas de laboratorio.24

Cálculo de Resultados Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por la densidad óptica promedio del control SLA positivo débil. DO Muestra Valor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil (unidades) DO ELISA Positivo Débil (unidades) La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente. Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán en el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (por ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se deseara una cuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de anticuerpo de la muestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.

Interpretación de los Resultados La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de pacientes. La muestra puede clasificarse con un valor negativo, equívocos o positivo según la tabla siguiente. Unidades 25

Negativo Equívocos Positivo

Las muestras calificadas como equivocas deben ser analizadas de nuevo antes de informarlas. 1.

2.

3.

Un resultado positivo indica la presencia de la clase IgG SLA humano recombinante de condiciones con grandes niveles de anticuerpos contra SLA, incluida la hepatitis autoinmune (HAI). Las muestras con niveles equívocos de anticuerpos IgG SLA no pueden evaluarse para saber el estado de los anticuerpos. Si los resultados siguen siendo equívocos después de repetir el test, deberán considerarse equívocos y/o deberá tomarse otra muestra. Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti-SLA o niveles inferiores al punto de corte del ensayo. 4

4.

5.

Se entiende que los especímenes que presentan valores de lectura de DO superiores al rango de lectura del lector de la placa son mayores que la DO más alta mensurable, dividida por la DO positiva débil y multiplicada por 25, o bien se pueden volver a diluir para repetir el ensayo y obtener un valor calculado. El rango lineal aproximado del ensayo varía de 9 a 125 unidades. Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes resultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA LiteTM SLA ELISA. Los valores obtenidos con kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La magnitud de los niveles informados de IgG no puede correlacionarse con un punto final”.

Limitaciones del Procedimiento 1. 2. 3. 4. 5.

6. 7.

Un resultado negativo de SLA no descarta la presencia de hepatitis autoinmune. Un resultado negativo de anticuerpos contra SLA no descarta su presencia, dado que la concentración del anticuerpo puede ser inferior al límite de detección del ensayo. Un resultado positivo de la prueba solo indica la presencia de anticuerpos contra SLA humano recombinante y no necesariamente la existencia de hepatitis autoinmune. El diagnóstico de hepatitis autoinmune requiere la consulta de otra documentación del paciente: datos demográficos, presentación clínica y otras pruebas de diagnóstico. La bibliografía existente sugiere que los anticuerpos contra SLA no son característicos de la HAI-210. Si bien los tres especímenes de HAI-2 mostrados en el apartado siguiente sobre rendimiento específico fueron negativos, este número no es lo bastante grande para validar la falta de anticuerpos contra SLA en especímenes HAI-2 mediante el presente ensayo. Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras pruebas serológicas. La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.

Valores Esperados La incidencia media anual de la HAI se estimó en 1.9 casos/100,000 en la población caucásica de Europa occidental y Norteamérica, y en 0.08-0.015 casos/100,000 en Japón25,27. La prevalencia se estimó en 16.9/100,000 en la población noruega26. La enfermedad presenta mayor prevalencia en las mujeres; la proporción de mujeres respecto a hombres es de 4:1. El pico de incidencia se da entre los 15 y los 30 años, aunque aparece en todos los grupos de edades1-5.

Rango Normal Se realizaron pruebas para detectar anticuerpos contra SLA a un panel de 131 individuos asintomáticos saludables con QUANTA LiteTM SLA ELISA. El panel estaba formado por 91 hombres y 40 mujeres. No se detectaron diferencias en los valores medios de hombres y mujeres. En cuanto a la edad, comprendía sujetos desde cinco hasta 69 años (mediana: 33). La especificidad del ensayo fue del 100% (131/131) para el panel. El valor medio de esta población fue de 2.0 unidades. El mayor valor fue de 5.8 unidades.

Características del rendimiento específico Pacientes con HAI y enfermedad hepática Los especímenes de pacientes con HAI y con otras enfermedades hepáticas se sometieron a pruebas a ciego internas y en sitios externos con QUANTA LiteTM SLA ELISA. La edad de los pacientes iba de los 13 a los 82 años, y la proporción de hombres respecto a mujeres era de alrededor del 3.5. Los resultados obtenidos a partir de los diversos paneles se combinaron y se resumen a continuación. Grupo clínico n= SLA+ HAI-1 289 34 Solapamiento HAI-1/CBP (cirrosis biliar primaria) 20 11 HAI-2 3 0 Hepatitis criptogénica 9 4 Colangitis autoinmune 8 1 HAI-1/CEP 4 1 HAI inducida por drogas 2 0 Cirrosis biliar primaria 15 0 Colangitis esclerosante primaria (CEP) 7 0 CBP/CEP 19 0 Otras enfermedades hepáticas no virales 10 0 Virus de hepatitis B (B, C o D) 8 0 Virus de hepatitis C 37 0 Hepatitis C/D 1 0 Sensibilidad solo para HAI-1: Sensibilidad para HAI-1 y variantes de HAI-1 (solapamientos): Especificidad (enfermedad hepática que no sea HAI): Especificidad (saludables normales más enfermedad hepática que no sea HAI):

% SLA+ 11.8 55 0 44.4 12.5 25 0 0 0 0 0 0 0 0 34/289 = 11.8% 51/330 = 15.4% 73/73 = 100% 204/204 = 100%

Estudio de la reactividad cruzada Se probó la reactividad cruzada del suero de 70 pacientes con diversos anticuerpos contra enfermedades autoinmunes o infecciosas con QUANTA LiteTM SLA ELISA. Los grupos de suero analizados y la cantidad de cada uno fueron los siguientes: virus herpes humano 6 (10), rickettsia (6), citomegalovirus (10), membrana 5

basal glomerular (3), anticuerpo antinuclear (3), lupus eritematoso sistémico (3), mitocondria (3), célula gástrica parietal (3), LKM-1 (3) y citoqueratina 8 o 18 (26). Ninguna muestra se interpretó como positiva para anticuerpos contra SLA.

Precisión y Reproducibilidad El rendimiento dentro del ensayo de QUANTA LiteTM SLA ELISA se evaluó a partir de seis especímenes, que se sometieron a siete pruebas. Los resultados se resumen a continuación. Intra-assay Spec. A Spec. B Spec. C Spec.D Spec.E Spec F. Media (Unidades) 72.6 46.2 27.6 13.5 9.7 2.0 DE 1.4 1.9 1.4 0.4 0.2 0.1 CV% 1.9 4.1 5.2 2.8 2.2 7.2 La variación entre ensayos se evaluó, por duplicado, a partir de un panel de cinco especímenes y los controles del conjunto dos veces al día, durante tres días. A continuación se presenta un resumen de los resultados. Inter-assay Spec. A Spec.B Spec. C Spec.D Spec.E Media (Unidades) 78.5 48.5 29.0 13.6 9.5 DE 1.8 1.1 0.9 0.5 0.4 CV% 1.9 4.1 5.2 2.8 2.2

Referencias 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

9. 10. 11.

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