Universidad de Chile Facultad de Medicina Escuela de Postgrado

PERFIL DE LOS ÁCIDOS GRASOS DE LA MEMBRANA DE ERITROCITOS COMO REFLEJO DEL PERFIL DE LOS ÁCIDOS GRASOS DE LOS FOSFOLÍPIDOS HEPÁTICOS EN HÍGADO GRASO NO ALCOHÓLICO

ALEJANDRA NOELIA ELIZONDO MUÑOZ

TESIS PARA OPTAR AL GRADO DE MAGISTER EN CIENCIAS MÉDICAS MENCIÓN NUTRICIÓN

Prof. Dr. Ramón Rodrigo S. Director de Tesis

Prof. Dra. Julia Araya A. Director de Tesis

2005

UNIVERSIDAD DE CHILE FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE POSTGRADO

INFORME DE APROBACION TESIS DE MAGISTER

Se informa a la Comisión de Grados Académicos de la Facultad de Medicina, que la Tesis de Magister presentada por la candidata

ALEJANDRA NOELIA ELIZONDO MUÑOZ ha sido aprobada por la Comisión Informante de Tesis como requisito para optar al Grado de Magister en Ciencias Médicas con mención en Nutrición en el Examen de Defensa de Tesis rendido el día 29 de noviembre de 2005

Prof. Dra. Julia Araya A.

Prof. Dr. Ramón Rodrigo S.

Director de Tesis

Director de Tesis

Departamento de Nutrición Facultad de Medicina, Universidad de Chile

Programa de Farmacología, ICBM Facultad de Medicina, Universidad de Chile

COMISION INFORMANTE DE TESIS

Prof. Dra. Lilia Masson S.

Prof. Dra. M. Angélica Carrasco F.

Prof. Dr. Victor Charlin G. Presidente Comisión 1

DEDICATORIA

“Tener siempre horas diarias para trabajar y para jugar, hacer que cada día sea tan útil como placentero, y apreciar el valor del tiempo aprovechándolo bien. Entonces la juventud tendrá su encanto, la vejez traerá pocos arrepentimientos y la vida será un hermoso triunfo.” Louisa May Alcote

Para mi familia, amigos y a todos quienes estuvieron a mi lado apoyándome y haciendo de este trabajo una gran experiencia, gracias.

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AGRADECIMIENTOS

Agradezco todo el apoyo, conocimientos y dedicación que me entregaron mis directores de tesis: Dra. Julia Araya y Dr. Ramón Rodrigo. Además, agradezco la colaboración y buena disposición de Diego Soto.

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ÍNDICE DE CONTENIDOS

ÍNDICE DE TABLAS ............................................................................................................ 5 ÍNDICE DE FIGURAS .......................................................................................................... 5 RESUMEN ............................................................................................................................. 6 I. INTRODUCCIÓN:......................................................................................................... 8 1. ETIOPATOGENIA: ................................................................................................... 9 1.1 Papel del metabolismo hepático de los lípidos: ................................................. 9 1.2 Papel del estrés oxidativo hepático:................................................................ 12 1.3 Perfil de los ácidos grasos de las membranas celulares: ................................. 14 II. HIPÓTESIS DE TRABAJO: ........................................................................................ 16 III. OBJETIVOS: ............................................................................................................ 16 1. OBJETIVOS GENERALES: ................................................................................... 16 2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: .................................................................................. 17 2.1 En Hígado: ....................................................................................................... 17 2.2 En Plasma: ....................................................................................................... 17 2.3 En Eritrocitos: .................................................................................................. 17 IV. METODOLOGÍA: ................................................................................................... 18 1. PACIENTES: ........................................................................................................... 18 2. DISEÑO: .................................................................................................................. 18 3. PROCEDIMIENTOS: .............................................................................................. 19 3.1 Extracción de los lípidos hepáticos totales: ..................................................... 19 3.2 Separación de los fosfolípidos de los lípidos totales del hígado: .................... 19 3.3 Separación de las membranas de los eritrocitos y extracción de sus lípidos:. 20 3.4 Preparación de los ésteres metílicos de los ácidos grasos de: ......................... 21 3.5 Análisis de los esteres metílicos de los ácidos grasos: .................................... 21 3.6 Análisis de lipoproteínas plasmáticas:............................................................ 22 3.7 Determinación de estrés oxidativo: ................................................................. 22 4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO: .................................................................................... 24 V. RESULTADOS: ........................................................................................................... 25 1. Características clínicas y bioquímicas de las pacientes con HGNA y controles:..... 25 2. Perfil de los ácidos grasos de los lípidos hepáticos totales: ..................................... 25 3. Composición de los ácidos grasos de los fosfolípidos hepáticos: ............................ 25 4. Composición de los ácidos grasos de la membrana de eritrocitos: .......................... 26 5. Perfil de AGPI hepáticos y relación producto/precursor de la serie n-3 y n-6: ........ 27 6. Parámetros relacionados con estrés oxidativo hepático: .......................................... 27 VI. DISCUSIÓN: ............................................................................................................ 40 VII. CONCLUSIONES:................................................................................................... 44 VIII. REFERENCIAS: ...................................................................................................... 47 IX. ANEXOS: ................................................................................................................. 53 1. CONSENTIMIENTO INFORMADO……………………………………………….53 2. Aprobación Comité de Ética………………………………………………………..56

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ÍNDICE DE TABLAS

Tabla Nº1: Características bioquímicas de los pacientes con HGNA y controles…………….29 Tabla Nº2: Perfil de los ácidos grasos de los lípidos totales hepáticos………………………..30 Tabla Nº3: Perfil de los ácidos grasos de los fosfolípidos hepáticos………………………….31 Tabla Nº4: Perfil de los ácidos grasos de los fosfolípidos de membranas de eritrocitos……...32

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1: Cromatograma de los ésteres metílicos de membranas de eritrocitos (A) y de los fosfolípidos de hígado de mujeres controles (B)……………………………..…..........33 Figura 2: Cromatograma de los ésteres metílicos de membranas de eritrocitos (C) y de los fosfolípidos de hígado (D) de pacientes obesas con hígado graso no alcohólico (HGNA)……………………………………………………………………………….34 Figura 3: Cromatograma de los ésteres metílicos de membranas de eritrocitos de pacientes obesas con HGNA, tres meses post-cirugía bariátrica……………………...35 Figura 4: Actividad de enzimas antioxidantes y contenido de glutatión reducido (GSH) en hígado de controles y de pacientes obesas con HGNA……………………………….36 Figura 5: Capacidad antioxidante total del plasma (A), contenido de malondialdehido (B) y contenido de F2-Isoprostanos (C) en controles y pacientes obesas con HGNA….........37 Figura 6: Patrón de ácidos grasos poli-insaturados (AGPI)…………………………….……..38 . Figura 7: Patrón de ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga (AGPICL)……………....39 Figura 8: Biosíntesis de los ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga en mamíferos………………………………………………………………………...........45 Figura 9: Factores que conducen a esteatosis no alcohólica y su progresión a esteatohepatitis .………………………………………………………………….........46

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RESUMEN

Objetivos: Comparar el perfil de los ácidos grasos de los fosfolípidos hepáticos con los de la membrana del eritrocito. Evaluar el efecto del estrés oxidativo sobre la homeostasis de los ácidos grasos poli-insaturados de cadena larga (AGPICL) en eritrocitos y fosfolípidos hepáticos. Implementar un procedimiento no invasivo para estimar en forma indirecta los efectos del estrés oxidativo sobre el perfil de los ácidos grasos de los fosfolípidos hepáticos y evaluar los cambios en el perfil de estos ácidos grasos en la baja de peso post cirugía bariátrica en pacientes obesas con hígado graso no alcohólico (HGNA).

Material y Métodos: Se estudiaron 12 pacientes obesas con hígado graso no alcohólico y 8 controles no obesas, sin antecedentes de consumo de alcohol ni de tabaco. Se determinaron parámetros relacionados con resistencia a la insulina (HOMA), daño hepático (transaminasas), estatus antioxidante (capacidad antioxidante del plasma, contenido de glutatión reducido en el hígado, enzimas antioxidantes (catalasa, superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa)), lipoperoxidación (F2isoprostanos en plasma y malondialdehido en hígado) y composición de los ácidos grasos de los fosfolípidos hepáticos y de la membrana del eritrocito. A los 3 meses post-cirugía bariátrica se midieron nuevamente F2isoprostanos y composición de ácidos grasos de la membrana de eritrocitos en 7 de las pacientes con HGNA.

Resultados: Las pacientes con HGNA fueron significativamente insulino-resistentes comparadas con el grupo control, evidenciado por una elevación del parámetro HOMA (9,6±3 vs 2.0±0.2). El perfil lipídico y las transaminasas fueron similares entre estos dos grupos. Las pacientes obesas con HGNA presentaron en los fosfolípidos hepáticos, en comparación con el grupo control, un menor contenido (p