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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 176 307 kInt. Cl. : A61K 31/195

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A61K 31/04

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95900759.2 kFecha de presentaci´on: 17.11.1994 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 730 448 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 11.09.1996

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54 T´ıtulo: Uso de sustrato y/o donante de sintasa de ´ oxido n´ıtrico, o un inhibidor de ´ oxido n´ıtrico para

la fabricaci´ on de medicamentos destinados al tratamiento de trastornos de la contractilidad uterina.

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73 Titular/es:

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72 Inventor/es: Garfield, Robert E.;

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74 Agente: Lehmann Novo, Mar´ıa Isabel

30 Prioridad: 16.11.1993 US 152496

SCHERING AKTIENGESELLSCHAFT Mullerstrasse 170/178 13353 Berlin, DE Robert Garfield y Chandra Yallampalli

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.12.2002

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

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01.12.2002

Aviso:

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Yallampalli, Chandra; Chwalisz, Kristof y Bukowski, Radoslaw

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION Uso de sustrato y/o donante de sintasa de o´xido n´ıtrico, o un inhibidor de o´xido n´ıtrico para la fabricaci´ on de medicamentos destinados al tratamiento de trastornos de la contractilidad uterina. Antecedentes de la invenci´ on Esta invenci´on se refiere a medicamentos para el tratamiento de trastornos de la contractilidad uterina, tales como parto antes de t´ermino, dismenorrea y otros problemas menstruales (v.g., hemorragia uterina disfuncional y parto prolongado) con un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico (v. g., L-arginina), un donante de o´xido n´ıtrico o ambos, solos o en combinaci´on adicional con un agente que inhibe la contractilidad uterina (v.g., un inhibidor de prostaglandina, progestina, un antagonista de oxitocina o β-agonista). Adicionalmente, esta invenci´on se refiere a un m´etodo para la estimulaci´ on de la contractilidad uterina en caso de trastornos tales como menstruaci´on inadecuada, para inducir el aborto o para estimulaci´on del parto, o para controlar la hemorragia post-parto, con inhibidores de o´xido n´ıtrico tales como L-NAME (´ester met´ılico de NG-nitroL-arginina), solos o en combinaci´ on con un antagonista de progesterona, mim´etico, oxitocina y/o prostaglandina. Los trastornos de la contractilidad uterina son problemas de salud importantes. La dismenorrea, contracciones uterinas dolorosas o calambres durante el periodo menstrual, afecta a casi todas las mujeres con actividad gonadal. An´ alogamente, el parto antes de t´ermino se produce en una proporci´ on significativa (aproximadamente 10 %) de mujeres embarazadas y es la causa principal de mortalidad y morbilidad fetal. La etiolog´ıa de los trastornos de la contractilidad uterina y el parto prematuro son en gran parte desconocidos y no se conoce una terapia eficaz para inhibir la contractilidad uterina y prevenir los s´ıntomas asociados con estas enfermedades. Por otra parte, millones de mujeres se someten a terapia para estimular las contracciones uterinas durante la pre˜ nez con fines de aborto, distocia, o como ayuda para favorecer la contractilidad a t´ermino, y agentes tales como antiprogestinas, oxitocina y an´ alogos de prostaglandina se utilizan para estos prop´ ositos, pero su eficacia no siempre es segura y su mecanismo de acci´on es tambi´en desconocido. Recientemente, se ha demostrado que el ´oxido n´ıtrico es el factor relajante de origen endotelial (EDRF) del endotelio de los vasos sangu´ıneos. Se considera que el o´xido n´ıtrico es un mediador principal en el control de la reactividad vascular. El o´xido n´ıtrico se sintetiza a partir del sustrato, L-arginina, por la sintasa de o´xido n´ıtrico localizada en las c´elulas endoteliales. El ´oxido n´ıtrico puede generarse tambi´en por aplicaci´ on de diversos donantes de o´xido n´ıtrico tales como nitroprusiato de sodio, nitroglicerina, trinitrato de glicerilo, SIN-1, mononitrato de isosorbida, dinitrato de isosorbida, etc. El tratamiento de cobayas no pre˜ nadas con LNAME da como resultado una contractilidad uterina incrementada. As´ı, la inhibici´ on de la contractilidad uterina estimulada por la sintasa de ´oxido n´ıtrico indica que la liberaci´ on t´ onica de 2

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´oxido n´ıtrico mantiene el u ´tero en un estado de reposo. An´ alogamente, el tratamiento de cobayas pre˜ nadas con L-NAME induc´ıa el parto antes de t´ermino. Por otra parte, el tratamiento in vitro con L-arginina de tiras uterinas de rata en cobayas pre˜ nadas inhib´ıa las contracciones. Estos estudios demuestran que la producci´ on de o´xido n´ıtrico por el u ´ tero inhibe la contractilidad, y un bloqueo de esta s´ıntesis da como resultado una contractilidad muscular incrementada tanto en los animales pre˜ nados como en los no pre˜ nados. As´ı pues, los sustratos o donantes de o´xido n´ıtrico son terap´euticamente u ´tiles para prevenir la contractilidad uterina, y los inhibidores del o´xido n´ıtrico son eficaces para estimular las contracciones uterinas. Dado que los inhibidores de prostaglandina, antagonistas de oxitocina, β-agonistas, y progestinas (progesterona) se utilizan (o pueden utilizarse) para inhibir las contracciones uterinas, los sustratos o donantes de o´xido n´ıtrico ser´ an particularmente u ´ tiles en combinaci´ on con estos agentes para prevenir las contracciones uterinas. An´ alogamente, dado que los antagonistas de progesterona, prostaglandinas, mim´eticos de prostaciclina, citoquinas, y oxitocina se utilizan (o pueden utilizarse) para estimular la contractilidad uterina, aqu´ellos ser´an particularmente u ´tiles en combinaci´ on con inhibidores de o´xido n´ıtrico para aumentar la contractilidad uterina. El documento EP 0 441 119 A2 expone el uso de L-arginina en el tratamiento de la hipertensi´ on y otros trastornos vasculares. Dicho documento sugiere que el mecanismo por el cual L-arginina es eficaz para este prop´osito es debido a que la misma puede ser el precursor fisiol´ogico del “factor de desprendimiento m´ as potente de origen endotelial, o´xido n´ıtrico”. El uso de L-arginina en combinaci´ on con otros agentes farmac´euticamente activos no se expone en esta publicaci´on. La solicitud de patente anterior de los autores de la presente invenci´on (Ref: SCH 1237) se refiere al tratamiento de la pre-eclampsia y el parto antes de t´ermino con una combinaci´ on de un agente progestacional y un sustrato y/o donante de sintasa de o´xido n´ıtrico, pero no considera los usos de sustratos y/o donante de ´oxido n´ıtrico solos para el tratamiento de los trastornos de la contractilidad uterina, ni considera la inhibici´ on del o´xido n´ıtrico para el uso de estimulaci´ on de las contracciones uterinas en el caso de distocia, aborto, y la estimulaci´on del parto. Objetos de la invenci´ on Es un objeto de la invenci´ on proporcionar medicamentos para el tratamiento de los trastornos de la contractilidad uterina con un sustrato y/o un donante de o´xido n´ıtrico. Es otro objeto proporcionar dichos medicamentos en combinaci´on con inhibidores de prostaglandina, mim´eticos de prostaciclina, progestinas, antagonistas de oxitocina, y β-agonista. Es un objeto adicional de esta invenci´ on proporcionar medicamentos para la estimulaci´ on de la contractilidad uterina que tienen por finalidad la inducci´ on de menstruaci´ on y aborto, o aumento del parto a t´ermino por utilizaci´on de inhibidores de ´oxido n´ıtrico tales como L-NAME. Un objeto adicional es proporcionar medica-

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mentos para la estimulaci´on de la contractilidad uterina (inducci´ on de aborto, inducci´ on de parto, hemorragia post-parto) utilizando un inhibidor de ´oxido n´ıtrico en combinaci´on con un antagonista de progesterona, oxitocina y/o prostaglandina. Un objeto adicional es la provisi´ on de composiciones farmac´euticas u ´ tiles en la pr´ actica de los m´etodos de esta invenci´ on. Despu´es de un estudio ulterior de la memoria descriptiva y las reivindicaciones del ap´endice, objetos y ventajas adicionales de esta invenci´ on resultar´ an evidentes par los expertos en la t´ecnica. Sumario de la invenci´ on Esta invenci´on se refiere a la fabricaci´ on de medicamentos para uso en un m´etodo de regulaci´ on de la contractilidad dependiente del o´xido n´ıtrico del u ´tero de un mam´ıfero hembra. En un aspecto, el m´etodo comprende administrar a una hembra afectada de dismenorrea, hemorragia uterina disfuncional, parto antes de t´ermino o hemorragia post-parto para inhibir la contractilidad uterina, un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico y/o un donante de o´xido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´on con uno o m´ as de un inhibidor de prostaglandina, un mim´etico de prostaciclina, una progestina, un antagonista de oxitocina, o un β-agonista, en una cantidad eficaz para inhibir la contractilidad uterina y mejorar de este modo los s´ıntomas de la condici´on a tratar. En otro aspecto, el m´etodo comprende administrar a una hembra afectada de menstruaci´ on inadecuada o en una hembra pre˜ nada para inducir un aborto o estimular el parto, un inhibidor de ´oxido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´on con uno o m´ as de un antagonista de progesterona, una oxitocina o un an´ alogo de oxitocina o una prostaglandina, en una cantidad eficaz para estimular la contractilidad uterina y conseguir con ello una menstruaci´ on normal para inducir un aborto o estimular el parto, respectivamente. En un aspecto adicional, esta invenci´ on se refiere al uso de (a) un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico y/o un donante de o´xido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´on con uno o m´as de un inhibidor de prostaglandina, un mim´etico de prostaciclina, una progestina, un antagonista de oxitocina o un β-agonista, en una cantidad eficaz para inhibir la contractilidad uterina, o (b) un inhibidor de o´xido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´on con uno o m´ as de un antagonista de progesterona, una oxitocina o un an´ alogo de oxitocina o una prostaglandina, en una cantidad eficaz para estimular la contractilidad uterina, para fabricaci´ on de un medicamento para la regulaci´ on de la contractilidad dependiente de o´xido n´ıtrico del u ´tero de un mam´ıfero hembra. Una realizaci´ on consiste en el uso de (a) un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico y/o un donante de ´oxido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´ on con uno o m´ as de un inhibidor de prostaglandina, un mim´etico de prostaciclina, una progestina, un antagonista de oxitocina o un β-agonista, para la fabricaci´ on de un medicamento para

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el tratamiento de dismenorrea, hemorragia uterina disfuncional, hemorragia post-parto o para el tratamiento y/o la profilaxis del parto antes de t´ermino pero no (a) solo y no (a) en combinaci´ on con una progestina sola para el tratamiento del parto antes de t´ermino. Una segunda realizaci´on es el uso de (b) un inhibidor de o´xido n´ıtrico solo u, opcionalmente, en combinaci´ on con uno o m´ as de un antagonista de progesterona, una oxitocina o un an´ alogo de oxitocina o una prostaglandina, para la fabricaci´ on de un medicamento para tratamiento de la menstruaci´ on inadecuada o para inducir un aborto o estimular el parto en una hembra pre˜ nada. Todav´ıa adicionalmente, la invenci´on se refiere a una composici´ on farmac´eutica que comprende un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico y/o un donante de o´xido n´ıtrico en combinaci´on con uno o m´as de un inhibidor de prostaglandina, un mim´etico de prostaciclina, una progestina, un antagonista de oxitocina o un β-agonista, pero no en combinaci´on con una progestina sola, y a una composici´ on farmac´eutica que comprende un inhibidor de o´xido n´ıtrico en combinaci´on con uno o m´as de un antagonista de progesterona, una oxitocina o un an´ alogo de oxitocina o una prostaglandina. Descripci´ on detallada El m´etodo de esta invenci´on es u ´til para tratar al menos un problema de dismenorrea u otro problema menstrual (v.g., hemorragia uterina disfuncional) en una hembra no pre˜ nada por administraci´on a una hembra gonadal no pre˜ nada que manifiesta los s´ıntomas de un problema de este tipo de uno o ambos de un sustrato de sintasa de ´oxido n´ıtrico y un donante de o´xido n´ıtrico, solo o en combinaci´ on adicional con uno m´ as de un inhibidor de prostaglandina (v.g., aspirina, indometacina), un mim´etico de prostaciclina (v.g., iloprost, cicaprost) una progestina, un antagonista de oxitocina y un β -agonista, en cantidades eficaces para mejorar los s´ıntomas de dicho problema, siendo la cantidad administrada del agente progestacional bioequivalente a 50-300 mg de progesterona inyectada y siendo la cantidad del sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico, donante de o´xido n´ıtrico o ambos eficaz para, respectivamente, aumentar el nivel en sangre de L-arginina circulante en una hembra pre˜ nada a la que se administra la composici´on hasta al menos aproximadamente 10-50 milimoles por encima de los niveles normalmente circulantes 50-100 milimolares o aumentar los niveles del donante de o´xido n´ıtrico hasta aproximadamente 1 a 100 nmolar (nanomolar). El m´etodo de esta invenci´on es tambi´en u ´ til para tratar abortos y partos antes de t´ermino habituales en una hembra pre˜ nada por administraci´on a una hembra pre˜ nada que manifiesta los s´ıntomas de aqu´ellos, de cantidades de al menos uno de un sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico y un donante de o´xido n´ıtrico eficaz para inhibir el parto antes de t´ermino, solo o en combinaci´on adicional con uno o m´ as de un inhibidor de prostaglandina, una progestina, un antagonista de oxitocina, un mim´etico de prostaciclina y un β-agonista, siendo la cantidad administrada del agente progestacional bioequivalente a 50-300 mg de progesterona inyectada y siendo la cantidad 3

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del sustrato de sintasa de o´xido n´ıtrico, donante de o´xido n´ıtrico o ambos eficaz para, respectivamente, aumentar el nivel en sangre de L-arginina circulante en una hembra pre˜ nada a la que se administra la composici´on hasta al menos aproximadamente 10-50 µmoles por encima de los niveles normalmente circulantes de 50-100 µmoles, o aumentar los niveles del donante de o´xido n´ıtrico hasta aproximadamente 1 a 100 nmolar. El m´etodo de esta invenci´on es tambi´en u ´ til para tratar la menstruaci´ on inadecuada en una paciente no pre˜ nada, y para inducir el aborto o el parto en pacientes pre˜ nadas as´ı como para tratar la hemorragia post-parto con un inhibidor de o´xido n´ıtrico solo, o en combinaci´ on con uno o m´ as de un antagonista de progesterona, oxitocina y/o prostaglandinas. Los m´etodos de esta invenci´on tratan uno o m´as de los trastornos de la contractilidad uterina, tales como dismenorrea y otros problemas menstruales (hemorragia uterina disfuncional) en una hembra no pre˜ nada o el parto antes de t´ermino y el parto prolongado en una paciente pre˜ nada, preferiblemente humana, que est´a manifestando los s´ıntomas de aqu´ellos, o que es un candidato de alto riesgo para hacerlo as´ı, v.g., tal como se determina por el progreso de una condici´ on presente o previa. Dado que estas condiciones anormales del estado no pre˜ nado o estado de pre˜ nez son producidas por o agravadas por la s´ıntesis subnormal de ´oxido n´ıtrico, tanto los sustratos de sintasa de ´oxido n´ıtrico, v.g., L-arginina, como los donantes de ´oxido n´ıtrico, v.g., nitroprusiato de sodio, nitroglicerina, trinitrato de glicerilo, SIN-1, mononitrato de isosorbida y dinitrato de isosorbida, son u ´ tiles para mejorar los s´ıntomas de aqu´ellos y, en un aspecto del m´etodo de esta invenci´on, se emplea una combinaci´ on de ambos. Puede conseguirse un efecto sin´ergico cuando el sustrato y/o donante de o´xido n´ıtrico se utiliza en combinaciones con uno o m´as de un inhibidor de prostaglandina, una progestina, un antagonista de oxitocina, y un β-agonista. As´ı, un aspecto del m´etodo de esta invenci´on y el aspecto de composici´on farmac´eutica de esta invenci´on emplea (a) uno o ambos de un donante de o´xido n´ıtrico y un sustrato de o´xido n´ıtrico y, adem´ as de ellos, opcionalmente (b) uno o m´ as de un inhibidor de prostaglandina (v.g., aspirina, indometacina, o ibuprofeno), una progestina, (progesterona, caproato de hidroxiprogesterona, norgestrel, acetato de medroxiprogesterona, gestodeno, etc), un antagonista de oxitocina, y un β-agonista (v.g., fenoterol, ritodr´ın, salbutinol, terbutalina, etc). Ejemplos de intervalos de dosificaci´on de sustratos de NO y donantes de NO t´ıpicos (por v´ıa oral) son:

L-arginina Nitroprusiato de sodio 5

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Nitroglicerina Mononitrato de isosorbida Dinitrato de isosorbida

Dosis total 500 mg-10 g p.o. intervalo 5002000 µg/kg/d´ıa 0,5-10 mg 10-100 mg 10-100 mg

A continuaci´ on se dan intervalos t´ıpicos de dosificaci´on oral de agentes activos de la progestina y los otros agentes activos opcionales administrados simult´aneamente con el sustrato o donante de ´oxido n´ıtrico: Progentinas: Una dosis diaria bioequivalente a 50-300 mg de progesterona/d´ıa, v.g., una suspensi´ on inyectable de acetato de medroxiprogesterona para proporcionar una dosis semanal de la misma de 100-1000 mg o tabletas o grageas que proporcionen una dosis oral de aqu´ellas de 5-10 mg/d´ıa; una soluci´ on inyectable de caproato de hidroxiprogesterona que proporciona una dosis semanal de 250-500 mg; tabletas, c´ apsulas o grageas de acetato de nortindrona que proporcionan una dosis diaria de 5-20 mg. Mim´eticos de prostaciclina Cicaprost: 1-100 µg/kg/d´ıa p.o. Iloprost: 1-100 µg/kg/d´ıa p.o. Antagonista de oxitocina R : 1-1000 µg/min, i.v. Atosiban Inhibidores de prostaglandina Aspirina: 10-100 mg/kg/d´ıa, p.o. El segundo m´etodo de esta invenci´on emplea el tratamiento de la menstruaci´on inadecuada en una hembra no pre˜ nada, terminaci´ on de la pren ˜ ez (como tratamiento abortivo), y estimulaci´ on del parto durante el nacimiento normal de una criatura en una hembra pre˜ nada, preferiblemente humana, que est´ a manifestando s´ıntomas de aqu´ellos o que es un candidato de alto riesgo para hacerlo as´ı, v.g., como se determina por el progreso de una condici´ on presente o previa. Dado que estos s´ıntomas son producidos por niveles elevados de ´oxido n´ıtrico, los inhibidores de o´xido n´ıtrico, v.g., L-NAME, L-NIO, L-NA, etc son u ´ tiles para mejorar los s´ıntomas de aqu´ellos, y en un aspecto de esta invenci´on, se emplea una combinaci´ on de ellos. Adicionalmente, puede conseguirse un efecto sin´ergico cuando se utiliza un inhibidor de o´xido n´ıtrico en combinaci´on con uno o m´ as de una antiprogestina (v. g., RU486 [mifepristona], onapristona), oxitocina (v. g., Syntocinon), y prostaglandinas (v.g. sulprostona, PEG2, etc). Por esta raz´on, el segundo aspecto de m´etodo de esta invenci´on y el aspecto de composici´on farmac´eutica de esta invenci´on emplea (a) un inhibidor de o´xido n´ıtrico solo y, opcionalmente (b) adem´as de aqu´el, uno o m´ as de un antagonista de progesterona, una citoquina, un agonista de oxitocina, y una prostaglandina. El intervalo de dosificaci´ on de los inhibidores

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de o´xido n´ıtrico t´ıpicos, v.g., L-NAME, N-NA y N-NIO (por v´ıa oral), es 0,1 a 10 g/d´ıa. A continuaci´ on se dan los intervalos t´ıpicos de dosis oral de las antiprogestinas y otros agentes activos opcionales utilizados simult´aneamente con los inhibidores de o´xido n´ıtrico: Antiprogestinas RU486 10-600 mg/d´ıa Onapristona 10-600 mg/d´ıa Prostaglandinas Sulprostona Gemeprost Misoprostol PGE2 PGF2a

100-2000 µg/d´ıa, i.m. o i.v. 0,5-5 mg/d´ıa por v´ıa intravaginal 50-5000 µg/d´ıa por v´ıa oral 0,1-5 µg/min, i.v. 100-1000 µg, gel intravaginal 0,1-200 µg/min, i.v.

Oxitocina Syntocinon β-Mim´eticos

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0,5-20 mUI/min, i.v. 25

Fenoterol R ) (Partusisten Ritodrin R ) (Pre-par

0,5-3,0 µg/min. i.v.; 20-200 mg/d´ıa por v´ıa oral 30

20-200 mg/d´ıa, oral

Sales de magnesio a) 1,0 a 20,0 milimoles de magnesio como una soluci´on acuosa de 10 a 20 % de: MgSO4 , MgSO·7H2 O, Mg - L - aspartato·HCl·3H2O, Mg-ascorbato, sal de Mg de ´acido levul´ınico; la administraci´ on es i.m. o i.v. b) 1,0 a 20,0 milimoles de magnesio en forma de una tableta, tableta recubierta, c´ apsula, polvo soluble o tableta masticable: MgHPO4 ·3H2 O, Mg-citrato·3H2 O, MgCO3 , MgD,L-hidrogenoaspartato-HCl·3H2O, Mg-Lhidrogenoaspartato, Mg-L-hidrogenoglutamato, Mg-ascorbato, MgO. Los agentes farmacol´ogicamente activos empleados en esta invenci´on pueden administrarse en mezcla con excipientes convencionales, es decir, veh´ıculos farmac´euticamente aceptables l´ıquidos, semil´ıquidos o s´ olidos org´ anicos o inorg´ anicos adecuados, v.g., para administraci´ on parenteral o enteral, y que no reaccionan desfavorablemente con el compuesto activo en mezcla con el mismo. Veh´ıculos farmac´euticamente aceptables adecuados incluyen, pero sin car´ acter limitante, agua, soluciones salinas, alcoholes, aceites vegetales, polietilenglicoles, gelatina, lactosa, amilosa, estearato de magnesio, talco, a´cido sil´ıcico, parafina viscosa, aceite esencial, monoglic´eridos y diglic´eridos de a´cidos grasos, ´esteres de ´acidos grasos de pentaeritritol, hidroxi-metilcelulosa, polivinilpirrolidona, etc. Las preparaciones farmac´euticas pueden esterilizarse y, en caso deseado, mezclarse con agentes auxiliares, v.g., lubricantes,

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conservantes, estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, sales para influir en la presi´on osm´otica, tampones, colorantes, saborizantes, y/o sustancias arom´ aticas y an´ alogas, que no reaccionan desfavorablemente con los compuestos activos. Para aplicaci´on parenteral, son particularmente adecuadas soluciones, preferiblemente soluciones aceitosas o acuosas, as´ı como suspensiones, emulsiones, o implantes, con inclusi´on de supositorios. Las ampollas son dosificaciones unitarias convenientes. En un aspecto preferido, la composici´ on de esta invenci´on est´a adaptada para ingesti´ on. Para aplicaci´ on enteral, son particularmente adecuadas formas de dosificaci´ on unitaria, v.g., tabletas, grageas o c´apsulas que tengan talco y/o un veh´ıculo o ligante de carbohidrato o an´ alogo, siendo el veh´ıculo preferiblemente lactosa y/o almid´ on de ma´ız y/o almid´ on de patata; s´ olidos constituidos por part´ıculas, v.g., gr´ anulos; y l´ıquidos y semil´ıquidos, v.g., jarabes y elixires o an´ alogos, en los cuales el compuesto activo est´a protegido con recubrimientos degradables diferencialmente, v.g., por mieroencapsulaci´on, recubrimientos m´ ultiples, etc. Adecuados para administraci´on oral son, inter alia, tabletas, grageas, c´ apsulas, p´ıldoras, gr´anulos, suspensiones y soluciones. Cada dosis unitaria, v.g., cada cucharada de mesa de l´ıquido o cada tableta, o gragea, contiene, por ejemplo, 55000 mg de cada agente activo. Las soluciones para administraci´ on parenteral contienen, por ejemplo, 0,01-1 % de cada agente activo en una soluci´ on acuosa o alcoh´olica. El sustrato y/o donante de o´xido n´ıtrico puede administrarse como una mezcla con el agente progestacional y otro agente activo opcional o como una forma de dosificaci´ on unitaria separada, sea simult´aneamente con aqu´el o en momentos diferentes durante el d´ıa uno de otro. La combinaci´ on de agentes activos se administra preferiblemente al menos una vez al d´ıa (a no ser que se administre en una forma de dosificaci´on que suministre los agentes activos continuamente) y de modo m´as preferible varias veces al d´ıa, v.g., en 2 a 6 dosis divididas. La dosis t´ıpica es aproximadamente 0,5 a 1000 mg de cada agente activo, aunque algunos agentes menos activos, v.g., L-arginina, requieren dosis orales mucho mayores, v.g., 500 a 10.000 mg, y otros, v.g., nitroprusiato de sodio, requieren dosis menores, v.g., 500-2.000 µg/kg/d´ıa. Las dosis para nitroglicerina son t´ıpicamente: por v´ıa oral 2, 5 mg dos veces al d´ıa; por v´ıa sublingual, 0,8 mg de 1 a 4 veces al d´ıa; y por v´ıa transd´ermica, 0,2-0,4 mg/h. Dado que las dosificaciones DL50 de la mayor´ıa de estos agentes activos son conocidas por la t´ecnica anterior, puede iniciarse un r´egimen de dosificaci´on m´as bajo y aumentarse la dosificaci´on hasta que se alcanza un efecto positivo o puede emplearse inicialmente un r´egimen de dosificaci´on m´as alto, v.g., en una situaci´ on de crisis, y regularse las dosificaciones en sentido decreciente cuando se alcanza el alivio de los s´ıntomas. En los humanos, tanto L-arginina como progesterona (o bioequivalente de otra progestina) deber´ıan administrarse en una relaci´ on que pro5

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duzca niveles en plasma sangu´ıneo de aproximadamente 1-5 mMol/ml y 300-1.000 ng/ml (0,93 µMol/l), respectivamente. El donante de NO, v.g., nitroprusiato de sodio, deber´ıa administrarse con la progesterona (o bioequivalente de otra progestina) en una relaci´ on que produzca niveles en plasma sangu´ıneo de aproximadamente 1-10 µMol/l y 300-100 ng/ml (0,9 µMol/l), respectivamente. Breve descripci´ on de los dibujos Diversos otros objetos, caracter´ısticas y ventajas concomitantes de la presente invenci´on se apreciar´ an m´ as plenamente a medida que la misma llegue a comprenderse mejor cuando se considera en asociaci´on con los dibujos adjuntos, en los cuales: la Figura 1 es el resultado del registro de la actividad uterina (´area bajo la curva [AUC] de la presi´on uterina, mmHg/mm2 por unidad de tiempo) una hora antes y a continuaci´ on del tratamiento con L-NAME (7, 12,5 y 25 mg, s.c.) al cabo de dos y tres horas en cobayas no pre˜ nadas (n = 3/grupo);

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la Figura 2 muestra los efectos de L-NAME a 25 mg/d´ıa/animal para inducir el nacimiento en cobayas antes de t´ermino (d´ıa 50-57 de pre˜ nez); 30

la Figura 3 muestra el efecto sin´ergico de L-NAME (25 mg/d´ıa/animal, d´ıa 40-47 de pren ˜ ez) con mifepristona (RU 486; 10 mg/animal s.c. d´ıa) en la inducci´ on del aborto en cobayas a mitad de gestaci´on (d´ıa 40-47 de pre˜ nez); la Figura 4 muestra el efecto de L-arginina y LNAME sobre tiras uterinas espont´aneamente contr´actiles de u ´ tero de rata, obtenidas el d´ıa 18 de pre˜ nez; la Figura 5 muestra los efectos de relajaci´on dependientes de la dosis de L-arginina (0,1 nM a 10 nM) sobre tiras uterinas espont´ aneamente contr´actiles de ratas en fases diferentes de gestaci´on, durante el parto y el postparto; y la Figura 6 muestra los efectos de respuesta a la dosis de L-arginina (0,6 nM a 10 nM) sobre la contractilidad espont´anea de tiras uterinas de ratas adultas ovariectomizadas no pre˜ nadas.

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Discusi´ on de los dibujos Los gr´ aficos de barras de la Figura 1 muestran que el tratamiento de cobayas no pre˜ nadas con L-NAME (7, 12,5 y 25 mmg s.c.) aumentaba la contractilidad y presi´ on uterinas de un modo dependiente de la dosis y del tiempo. La presi´on uterina despu´es del tratamiento durante 2 y 3 horas con L-NAME era aproximadamente doble (aprox. 10 mmHg/mm) que el registro de control antes del tratamiento (aprox. 10 mmg Hg). Los datos muestran un efecto dependiente del tiempo y de la dosis de L-NAME para aumentar la actividad uterina en la Figura 1. A partir 6

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de un nivel basal de actividad uterina de aproximadamente 10 mg Hgmm2 , la actividad uterina se duplicaba aproximadamente despu´es de tratamiento con L-NAME al cabo de 2 y 3 horas tanto con 7 como con 12,5 mg, y se triplicaba despu´es de 25 mg. En experimentos con cobayas pre˜ nadas, la infusi´ on s.c. de L-NAME (25 mg/d´ıa) comenzando el d´ıa 50 de pre˜ nez dio como resultado el parto antes de t´ermino (Figura 2). La Figura 3 muestra un efecto sin´ergico de LNAME en combinaci´on con RU 486 en la inducci´on del aborto en cobayas a mitad de gestaci´ on. En esta fase de pre˜ nez, tanto 25 mg/d´ıa/animal de L-NAME como 10 mg RU 486 (controles) no inducen el aborto por s´ı solos. Una combinaci´ on de ambos compuestos induc´ıa el aborto de manera muy eficaz dentro de dos d´ıas en todos los animales. Los registros en gr´afico de cinta de la Figura 4 muestran que la aplicaci´on de L-arginina (1-3 nM) (A, B, E), nitroprusiato de sodio (5 nM) (C), ´oxido n´ıtrico (0,1 nM) (D) a ba˜ nos de m´ usculos produc´ıa relajaciones sustanciales. Los efectos de L-arginina eran invertidos por L-NAME (3 nM) (B) y azul de metileno (0,1 nM) (E). Estos son registros t´ıpicos de 8-16 tiras procedentes de 6 animales en cada grupo. Cada carrera ascendente a partir de la l´ınea base representa una contracci´on. El registro en gr´afico de cinta de la Figura 4 muestra que la aplicaci´on de nitroprusiato de sodio (SNP) causaba una relajaci´ on sostenida en las tiras uterinas espont´ aneamente contr´actiles despu´es de un per´ıodo de retardo y que los tejidos en el estado relajado eran sensibles al cloruro de potasio. Se obtuvieron registros similares de 12 tiras uterinas procedentes de 4 animales. El registro en gr´afico de cinta en la Figura 4D muestra la relajaci´ on producida por el o´xido n´ıtrico gaseoso aut´entico (0,1 nM). Se obtuvieron registros similares de 8 tiras procedentes de 4 animales. Los registros en gr´afico de cinta de la Figura 4 muestran que la L-arginina (1 nM) produc´ıa relajaci´ on de los tejidos espont´ aneamente contr´actiles, y estos efectos eran repetibles en la misma tira (como en Fig. 4A) y que el efecto de relajaci´on de L-arginina (1 nM) era anulado por el azul de metileno (0,1 nM) cuando se a˜ nad´ıa antes de la aplicaci´on de L-arginina (B). La aplicaci´on de L-arginina (3 nM) al ba˜ no muscular causaba relajaci´on inmediata (10-15 min de duraci´ on) de la contractilidad (A). El efecto de L-arginina (3 nM) era antagonizado por LNAME (3 nM) cuando se a˜ nad´ıa durante una relajaci´ on inducida por L-arginina (B). Estos son registros t´ıpicos, y cada una de las carreras ascendentes a partir de la l´ınea base representa una contracci´on. Se observaron respuestas similares en 12 tiras uterinas procedentes de 6 animales. El nitroprusiato de sodio (SNP), un donante de ´oxido n´ıtrico, causaba relajaci´on del u ´tero de rata pre˜ nada espont´ aneamente contr´actil el d´ıa 18 de gestaci´on. La aplicaci´on de nitroprusiato de sodio causaba una relajaci´ on sostenida en tiras uterinas espont´aneamente contr´actiles despu´es de un periodo de retardo (C). Los tejidos en el estado relajado despu´es del nitroprusiato eran sensibles

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al cloruro de potasio (KCl) (D). El efecto del azul de metileno sobre la relajaci´on inducida por L-arginina de las tiras uterinas de ratas pre˜ nadas el d´ıa 18 de gestaci´on se muestra en (E). La L-arginina (1 nM) produc´ıa relajaci´on de los tejidos espont´ aneamente contr´actiles, y el efecto de relajaci´on de L-arginina (1 nM) era anulado por el azul de metileno (0,1 nM) cuando se a˜ nad´ıa antes de la aplicaci´on de L-arginina (E). En los experimentos cuyos resultados se muestran por el gr´ afico de la Figura 5, los tejidos se obtuvieron los d´ıas 17-22 (d-17, d-18, d-19 y d22) de gestaci´on, el d´ıa 22 antes de la expulsi´ on y durante la expulsi´ on espont´ anea (d22 DEL, 1-3 cr´ıas expulsadas), o 1 (d1pp) y 2 (d2pp) d´ıas despu´es del parto. La duraci´ on de la inhibici´ on completa de las contracciones uterinas espont´aneas es dependiente de la dosis. Los efectos de Larginina a partir de concentraciones de 1 nM se reducen significativamente (P < 0,01) durante la expulsi´ on espont´ anea a t´ermino y el post-parto, en comparaci´on con todos los momentos restantes. Cada punto de datos representa el valor medio ± el error est´andar del valor medio (S.E.M.). El n´ umero total de tiras estudiado en cada periodo de tiempo era 8-16, procedentes de 4-6 animales por grupo. En experimentos cuyos resultados se muestran por el gr´ afico de la Figura 6, ratas ovariectomizadas no pre˜ nadas recibieron inyecci´ on s.c. de 1 µg de estradiol -17β (OVX + E), 2 mg de progesterona (OVX + P), estradiol y progesterona (OVX + E + P) en aceite de s´esamo o aceite solo (OVX + aceite) durante 3 d´ıas antes de las medidas de la contractilidad. Los valores son la media aritm´etica ± S.E.M. para 4 tiras de cada animal procedentes de 4 ratas por grupo. Los datos se analizan por medidas repetidas ANOVA en cuatro grupos. P