k

19

REGISTRO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

k ES 2 007 414 kN´umero de solicitud: 8702735 kInt. Cl. : A61K 35/78

11 N.◦ de publicaci´ on: 21

4

51

˜ ESPANA

A61K 35/70

k

12

PATENTE DE INVENCION

k

22 Fecha de presentaci´ on: 24.09.87

k

73 Titular/es: Kozo Niwa

4-4, Asahi-Machi, Tosa-Shimizu Kochi, JP

k

30 Prioridad: 25.09.86 JP 61-224791

k

72 Inventor/es: Niwa, Kozo; y

k

74 Agente: Roeb Ungeheuer, Carlos

45 Fecha de anuncio de la concesi´ on: 16.06.89

45 Fecha de publicaci´ on del folleto de patente:

16.06.89

k

Motoyama, Shimesu

k

k kResumen:

54 T´ıtulo: Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´ edicos. 57

Procedimiento de producci´on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, que consiste en eliminar selectivamente especies reactivas de ox´ıgeno en el cuerpo humano, para lo cual se disponen semillas, granos y/o g´ermenes de plantas conteniendo sustancias eliminadoras selectivamente de especies de ox´ıgeno reactivo de bajo peso molecular, que se calientan bajo condiciones moderadas tales como calentamiento continuo y gradual a temperatura suave y apropiada, dependiendo la misma del tipo de planta usado y entonces se prepara con microorganismos para liberar las sustancias antioxidantes de bajo peso molecular, a las que se a˜ nade aceite obtenido de plantas calentadas, pudiendo a˜nadirse adem´as, a los productos as´ı obtenidos, vitamina C, derivados de la misma o plantas conteniendo estas sustancias.

Venta de fasc´ ıculos: Registro de la Propiedad Industrial. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

A6

2 007 414 DESCRIPCION

5

10

15

20

25

30

35

El presente invento se relaciona con un procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes, que es notablemente eficaz para prevenirse de varias enfermedades mejor´ andolas y para mantener la salud y la belleza. Recientemente se han desarrollado m´etodos para prevenir y mejorar eficazmente varias enfermedades y se han puesto en pr´ actica, habi´endose prolongado la duraci´ on de vida media de los seres humanos. Sin embargo, las enfermedades de personas adultas, tales como arterioesclerosis, apoplejia cerebral, infraci´ on miocardial, c´ancer y diabetes; enfermedades de adultos, tales como reumartritis maligna, enfermedad de Behet, enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa; y enfermedades ianducidas por sustancias qu´ımicas, han atraido la atenci´ on como problemas principales desde el punto de vista de mantenimiento de la salud. Aunque tales enfermedades no ocurren por la misma causa, es conocido, como un mecanismo que da˜ na directamente el cuerpo humano, que excesivas especies de o´xigeno reactivo o lipoper´osidos (simplemente mencionados despu´es colectivamente como “especies reactivas de ox´ıgeno”) se producen en el cuerpo humano por varios tipos de irritaciones externas incluyendo polucionantes p´ ublicos y contribuyen al da˜ no de los tejidos, conduciendo a la presencia de enfermedades. El cuerpo humano contiene una enzima denominada super´ oxido de dismutasa (SOD) que barre este excesivo ox´ıgeno reactivo y protege los tejidos del cuerpo ante da˜ nos, de modo que las enzimas pueden actuar para mantener la salud barriendo cualquier exceso de especies de ´oxigeno reactivo y as´ı nos previenen de las enfermedades. Sin embargo, recientemente se ha demostrado que ocurren enfermedades en seres adultos, particularmente en aquellos de edad superior a 40 a˜ nos, porque la arriba descrita actividad del SOD se reduce gradualmente con la edad y que, si se produce un exceso de especies reativas de o´xigeno por irritaci´ on cr´onica o aguda por productos producidos qu´ımicamenhte, el cuerpo humano resulta carecer de SOD y as´ı sufre enfermedades tales como las descritas arriba. Por lo tanto, la conservaci´on de niveles de SOD ha atraido la atenci´ on en el campo m´edido. Por lo tanto, se intenta mejorar enfermedades inducidas por un incremento de especies de ox´ıgeno reactivo o por una disminuci´ on en la actividad del SOD o prevenir enfermedades por ingesti´ on de SOD. El m´etodo corriente disponible, por el que SOD se administra al cuerpo es solamente la inyecci´ on de SOD e inyecci´on de SOD encapsulado en liposoma, se reconoce en Jap´ on y en Francia, como m´etodo que tiene efectos notables en el tratamiento de enfermedades inveteradas, tales como la enfermedad de Behet, reumartritis maligna, enfermedad de Kawasaki, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn; y enfermedades de personas adultas, tales como apoplej´ıa cerebral, infarci´ on miocardial y diabetes, y en la prevenci´on de c´ancer y envejecimiento.

40

Sin embargo, de las varias formas de droga de SOD, s´ olo se reconoce cient´ıfica y m´edicamente el efecto de drogas inyectables mientras que todav´ıa no se ha probado el efecto de medicinas orales. Esto ocurre porque el SOD es desnaturalizado por los jugos g´astricos y no puede ser absorbido por en canal alimentario, tal como es, debido, a su alto peso molecular de 30.000 o superior.

45

Adem´as, el SOD tiene el inconveniente de limitaci´ on, porque act´ ua s´olo sobre super´oxido (O2 − ) de las cuatro especies de ox´ıgeno reactivo.

50

55

60

Aunque, como se ha descrito arriba, s´ olo una droga inyectable est´a corrientemente disponible y es eficaz, como una droga para ser eficaz en la arriba descrita enfermedad, es obvio que las medicinas orales ser´ıan m´ as convenientes, tanto para los m´edicos, como para los pacientes y ser´ıa simple y deseable, en particular, el uso para curar o prevenir a largo plazo la enfermedad o para el mantener la salud. En adici´on, con el fin de tomar productos de SOD, no como droga medicinal, sino como alimento de salude, se supone que los productos de SOD deber´ıan administrarse oralmente y se espera que deber´ıan desarrollarse productos de SOD con notable efecto barredor de especies de ox´ıgeno reactivo. La memoria expositiva de patente japonesa n´ umero 60-110269 describe un nutriente bot´ anico, obtenido mezclando el aceite de s´esamo y/o aceite de soja extraidos de s´esamo y/o habas de soja con el salvado, arroz, trigo “hatomugi”(cebada oriental), g´ermen de trigo y habas de soja y t´e verde calentados, a lo que se a˜ nade una peque˜ na cantidad de hongo “koji”(Aspergillus oryzae). La publicaci´ on arriba descrita hace constar que este nutriente bot´ anico contiene marcada actividad 2

2 007 414 semejante al SOD y es, eficaz para combatir las enfermedades arriba descritas.

5

Sin embargo, a´ un cuando este nutriente bot´ anico contiene actividad semejante al SOD, el SOD tiene un inconveniente, porque no puede ser absorbido a trav´es del tracto gastrointestinal por el canal alimentario, seg´ un se ha dicho arriba y a´ un cuando pudiera ser absorbido, el SOD solamente es eficaz para el super´oxido de las especies de ox´ıgeno reactivo, increment´andose adversamente el H2 O2 . En la pr´actica se ha reconocido, que el arriba descrito nutriente bot´ anico tiene una acci´ on extremadamente d´ebil para barrer las especies reactivas de ox´ıgeno y no es mucho mejor que un simple nutriente.

10

Es un objeto del presente invento poner a disposici´ on un procedimiento de producci´ on de un producto natural usado como una droga, que tiene notable acci´ on para barrer las especies reactivas de ox´ıgeno y un efecto notable sobre el tratamiento o la prevenci´on de varias enfermedades causadas por un exceso de especies reactivas de ox´ıgeno en el cuerpo humano. 15

Es otro objeto del presente invento poner a disposici´ on un m´etodo de producci´ on de un producto natural usado como un alimento sanitario, que es eficaz, para mantener la belleza y la salud.

20

Los objetos arriba descritos y otros, as´ı como ventajas y nuevas caracter´ısticas del presente invento, resultar´ an evidentes de la lectura de la descripci´ onh detallada, citada m´ as abajo y de las reivindicaciones anexas. Un procedimiento de producci´ on de una composici´ on antioxidante de productos naturales de acuerdo con el presente invento, se describe m´as abajo en detalle.

25

El presente invento pone a disposici´ on un procedimiento para producir los productos con actividad antioxidante, que se produce por preparaci´ on de semillas, granos y/o sus g´ermenes de plantas calentados a˜ nadi´endose microorganismos y con la adici´on de aceite obtenido de s´esamo y/o habas de sojaq calentadas. 30

El presente invento tambi´en se refiere a un procedimiento de producci´ on de una composici´ on con actividad antioxidante, que se produce preparando semillas, granos y/o g´ermenes de plantas calentados, a˜ nadi´endose microorganismos y con la adici´on de aceite obtenido de plantas tostadas y de vitamina C, derivados de vitamina C o´ plantas conteniendo tales sustancias.

35

Semillas y granos de plantas, particularmente g´ermenes de soja, s´esamo, “hatamugi”(un tipo de cebada oriental) y salvador de arroz, generalmente contienen sustancias de bajo peso molecular con actividad antioxidante, tales como flavonoides, polifenoles, tanino, tocoferol, caroteno y vitamina B2 .

40

45

50

Sin embargo, puesto que estas sustancias forman gran pol´ımero de sustancias inactivas en la forma de enlaces o subunidades repetidas de pol´ımeros enlazados a otros componentes o entre s´ı, dando por resultado alto peso molecular, las arriba descritas semillas, granos o g´ermenes de plantas muestran solamente una peque˜ na actividad antioxidante si se toman tal como son y as´ı no pueden ser eficaces en el tratamiento o en la prevenci´ on de enfermedades. Sin embargo, si estas semillas, granos o g´ermenes de plantas se tratan calentando con agitaci´ on cont´ınua y temperatura modeada apropiada, sustancias con actividad antioxidante se liberan de los pol´ımeros, para producir las sustancias originales, de bajo peso molecular, y despu´es se siberan para ser activados, para mostrar acci´ on antioxididante activa, danto por resultado un marcado incremento en su efecto de barrar las especies reactivas de ox´ıgeno, cuando se comparan con las semillas, granos o g´ermenes de plantas sin tratar. Por otra parte, si las semillas, granos, o g´ermenes de plantas se calientan a temperatura m´as alta, las sustancias con actividad antioxidante, contenidas en las mismas, se inactivan y su actividad se disminuye.

55

60

Por lo tanto, es necesario prestar atenci´ on particular a procedimientos de calentamiento, a la temperatura de calentamiento o al tiempo de calentamiento durante la operaci´ on de tostar. El t´ermino de “calentar”, usado en el presente invento, indica que el calor, requerido por la activaci´on, se obtiene calentando materiales sin degradar las mol´eculas constitutivas, especialmente en la superficie, y contribuyen a transferir uniformemente calor al centro de los materiales. La temperatura calentadora no puede definirse incondicionalmente, porque la misma depende del tipo 3

2 007 414 de planta usado y de otras condiciones de calentamiento, pero es preferentemente entre 50 y 150 grados C y en muchos casos va desde 50 a 100 grados C.

5

10

15

Es necesario, durante el calentamiento, calentar uniformemente las semillas, granos o g´ermenes de plantas, de modo que las diferencias en temperatura sean lo menores posibles entre las capas interiores y exteriores de sus part´ıculas. Para este objeto, pueden emplearse m´etodos de canlentamiento por rayos infra-rojos de gran alcance calentando continuamente mediante un incubador o calentando por un lecho fluidizado, pero el m´etodo calentador no ´esta limitado a ninguno de estos m´etodos. Ejemplos de m´etodos para calentar por rayos infra-rojos de gran alcance que se irradian cuando se calientan materiales en un recipiente cer´amico o un horno de tierra o piedra; arena, ladrillos, o cer´amica, pueden sustituirse por cer´ amica, piedra y barro. Semillas y granos de plantas, definidos en el presente invento incluyen arroz, trigo, cebada, ma´ız, hetamugi, habas de adzuki, guisantes y s´esamo, y las sxemillas y granos de plantas definidos no se limitan a los descritos hasta ahora, en tanto que tengan fuertes efectos de actividad antioxidante. Cualesquiera de los g´ermenes de las arriba descritas semillas de plantas pueden usarse como un germen, y entre ellos el salvador de arroz y g´ermenes de trigo son particularmente preferibles.

20

Cuando se usan en mezcla, semillas, granos y g´ermenes de plantas, la cantidad de los g´ermenes usados es preferentemente de 5% de peso o m´as, de la cantidad total de las semillas, granos y g´ermenes de plantas. Sin embargo se prefiere 10% o´ m´as. 25

Despu´es de calentar, estas semillas, granos o g´ermenes de plantas se preparan con microorganismos. Generalmente se requiere efectuar la preparaci´ on de los mismos durante alrededor de 2 a 3 d´ıas.

30

El t´ermino de “preparar”, usado aqu´ı, indica una preparaci´on en el sentido m´as amplio, significando que las sutancias org´ anicas se descomponen por microorganismos y no indica s´olo el caso, en que los metabolitos se convierten para formar un compuesto simple.

35

Por ejemplo, la preparaci´ on incluye la moderada degradaci´on utilizando “koji” (Asperjillus oryzae) o levadura y es preferible usarlos. En este procedimiento de preparaci´ on, una cantidad mayor de las arriba descritas sustancias antioxidantes, de bajo peso molecular se libera por la acci´on de una enzima, tal como la proteasa contenida en “koji”, de modo que sus actividades antioxidantes se incrementan. Adem´ as, en adici´on al hongo “koji”y de levadura, pueden usarse plantas que contengan microorganismos teniendo capacidad preparadora, tales como corteza de higuera, corteza de vid, pi˜ nas maduras o papaya.

40

En el presente invento el aceite bot´ anico, obtenido de plantas calentadas, se a˜ nade despu´es del calentamiento y del procedimiento de preparaci´ on. La adici´on del arriba citado aceite bot´ anico incrementa la cantidad de sustancias con actividad antioxindante, tales como tocoferol y potencia ulteriormente sus acciones.

45

Dependiendo de circunstancias se espera que porciones solubles en aceite bot´anico y porciones insolubles en el mismo pueden separarse, de modo que cada porci´on separada pueda usarse apropiadamente, dependiendo de las enfermedades. 50

Ejemplos de materiales para aceite bot´ anico incluyen semilla de s´esamo, haba de soja, semilla de algodonero, ma´ız, c´artamo, primavera vespertina, salvado de arroz, colza y aceituna que se usan comunmente para alimentos o drogas los materiales bot´anicos usados para extraer el aceite no se limitan a estas plantas arriba descritas. De estas plantas se prefiere la semilla de s´esamo.

55

El presente invento tambi´en se refiere a un procedimiento de producci´ on de una composici´ on con actividad antioxidante, producida a˜ nadiendo vitamina C, derivados de vitamina C, o plantas conteniendo estas sustancias, a los materiales producidos por el arriba descrito procedimiento (calentamiento + preparaci´on + la adici´ on de aceite obtenido de planta calentada.

60

La vitamina C, o sus derivados, que son sustancias con actividad fuertemente reductora, act´ uan para barrer las especies reactivas de ox´ıgeno y para prevenir la desintegraci´on de “koji”, etc. de modo que la composici´ on arriba descrita se estabiliza por ello y las acciones antioxidantes de sustancias, producidas 4

2 007 414 de ello, tales como tocoferol, polifenoles, flavonoides, tanino y vitamina B2 se refuerzan ulteriormente, dando por resultado un efecto sin´ergico, que permite un gran incremento de actividad antioxidante.

5

Ejemplos de derivados de vitamina C incluyen sales, de sodio o potasio de vitamina C, y ´esteres, tales como palmitato de vitamina C. Aunque varias plantas, tales como las hojas verdes inmaduras y raices de cebada y “daikon”(r´ abano), frutas de lim´ on y de “yuzu”(citr´ on), t´e verde y espinaca pueden usarse como plantas conteniendo vitamina C, o sus derivados, es natural que las plantas no queden limitadas s´olo a estas plantas.

10

Tales plantas pueden a˜ nadirse seg´ un son, despu´es de molerse, como zumos o como polvo de extracto despu´es de haberse secado, en tanto que contengan vitamina C, o sus derivados. Los respectivos ingredientes pueden ser a˜ nadidos en cualquier orden deseado. 15

Si fuera necesario, pueden a˜ nadirse apropiadamente drogas auxiliares e ingredientes auxiliares, que sean promotores de la salud, tales como varias vitaminas; ingredientes qu´ımicos tales como metales o yodo, que sean necesarios para el cuerpo humano; o ingredientes, que se utilicen para la preparaci´on de correctores, perfumes, tinturas, surfactantes, excipientes, etc. a la composici´on de los productos naturales obenida por el procedimiento de producci´ on del presente invento.

20

25

30

35

40

45

La composici´on obtenida por el procedimiento de producci´ on del presente invento se usa preferentemente, no s´olo como una droga para tratar o prevenir enfermedades de personas adultas tales como arterioesclerosis, apoplejia cerebral, infraci´ on miocardial, diabetes, reumartritis maligna, enfermedad de Behet, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y enfermedad de Raynaud; varias enfermedades causadas por poluci´ on ambiental; manchas; peces; verrugas; tumores, lesiones traum´ aticas, lunares; malestar general; malestar depu´es de borrachera y estre˜ nimiento, sino tambi´en como alimentos sanitarios, que son eficaces en matener la belleza y la salud. Puesto que los productos naturales obtenidos por el procedimiento de producci´ on seg´ un el presente invento act´ uan sobre todas las cuatro especies de ox´ıgeno reactivo, es decir sobre O2 − , H2 O2 , .OH y oxido de 1O2 , se considera que tienen la ventaja de que sus efectos son mayores que aquellos SOD (super´ dismutasa). Adem´as, puesto que la arriba descrita actividad en los productos fue estable y aument´ o en presencia de ´acidos del est´ omago, y puesto que los productos se descompusieron por los a´cidos del est´omago para producir compuestos de bajo peso molecular, dando por resultado un marcado efecto de actividad antioxidante (v´ease Inflammation, volumen 10, n´ umero 1, 1986, por Niwa y otros) los productos pueden usarse para el tratamiento, la prevenci´ on y la conservaci´on de la salud por administraci´on oral. Tambi´en es posible usar los productos t´ opicamente para el tratamiento de quemaduras, heridas de traumatismos generales o dermatosis. Abajo se hace una descripci´ on de la eficacia en actividad antioxidante, de las muestras que consisten en varias combinaciones con varios materiales para nuestros productos, pero el presente invento no est´ a limitado a estos ejemplos. Cada muestra fu´e preparada de acuerdo con los siguientes m´etodos: Muestra 1 A

50

100 g de salvador de arroz se colocaron en un recipiente revestido con cer´amica y se calentaron gradualmente a alrededor de 70 grados C de tal manera que no se sobrecalentasen y depu´es se moli´ o. 20 mg de “koji”, comercialmente disponible, se a˜ nadieron al salvado molido de arroz y la mezcla fu´e preparada durante 72 horas a 33 grados C. 55

Muestra 1 B Se realiz´ o el mismo procedimiento que aquel de la muestra 1A con la excepci´ on de que se utilizaron g´ermenes de trigo en lugar de salvado de arroz. 60

5

2 007 414 Muestra 1 C Se efectu´ o el mismo procedimiento que aquel de la muestra 1A con la excepci´on de que se utiliz´o trigo en lugar de salvador de arroz. 5

Muestra 1 D

10

100 g de habas de soja se colocaron en un recipiente de hierro y se calentaron gradualmente revolviendo junto con 500 g de arena a alrededor de 80 grados C, de tal manera que no se sobrecalentasen. Las habas de soja fueron separadas de la arena por diferencia de peso entre habas de soja y arena, despu´es fueron molidas. Se a˜ nadi´ o a las habas de soja molidas, 30 mg de “koji”, comercialmente disponible y la mezcla entonces fu´e preparada durante 72 horas a 32 grados C. Muestra 1 E

15

Se efectu´ o el mismo procedimiento que aquel de la muestra 1 A con la excepci´on que se utiliz´o “hatomugi” (un tipo de cebada en lugar del salvado de arroz. Muestra 1 F 20

Se colocaron semillas de s´esamo en un grueso recipiente de barro calent´ andose hasta alrededor de 80 grados C, de tal modo que no se sobrecalentasen, y despu´es se molieron. Muestra 2 A 25

El resultado de la muestra 1 F fu´e estrujado para extraer de ello aceite. Muestra 2 B 30

Se realiz´ o el mismo procedimiento que aquel de la muestra 2 A con la excepci´on de que se utilizaron habas de soja calentadas en lugar de las semillas de s´esamo. Muestra 3 A

35

T´e verde en polvo Muestra 3 B Zumo prensado a partir de “Yuzu” (cit´ on)

40

Muestra 3 C Polvo extraido secando las hojas inmaduras de la planta de cebada un a baja temperatura. 45

Muestra D Vitamina C sint´etica (producida qu´ımicamente) Ejemplos y efectos

50

La eficacia en actividad antioxidante de las muestras de varios materiales de combinaci´on as´ı obtenidas se menciona en la tabla 1 compar´andolas con las muestras de control

55

(La Tabla 1 pasa a la p´ agina siguiente)

60

6

2 007 414 TABLA I Efecto inhibidor de ox´ıgeno activo 5

Clasificaci´on

NO.

Composici´ on de cada muestra

O2 −

H2 O2

.OH

1O2

Ejemplos de

1

28

24

23

25

ensayo

2 3 4 5 6 7

1A:2A=90:10 (proporci´ on de peso) 1A:2B=90:10 1B:2A=90:10 1A:2A:3A=80:10:10 1A:1C:2A:3B=15:65:10:10 1A:1B:2A:3B= 40:40:10:10 1A:1B:1C:1E:1F:2A:3A =13:13:13:13:13:7:12:16 2B fu´e usado en lugar de 2A de No. 7 10 partes de 3B se a˜ nadieron A 10 partes de No. 7 3C se us´o en lugar de 3A se No. 7 3D se us´o en lugar de 3A de No. 7

26 30 46 51 60 75

22 28 48 50 62 72

22 25 41 47 61 77

21 27 44 50 63 75

68

65

66

67

85

80

88

87

77

75

72

74

70

67

68

67

Misma muestra que No, 1, pero no sometida a calentamiento y fermentaci´on Misma muestra que No. 7, pero no sometida a calentamiento y fermentaci´on Misma muestra que No. 7, pero calentada sin rayos infra-rojos de gran alcance teniendo superficies sobrecantadas Misma muestra que No. 7, pero conteniendo aceite obtenido de semillas de s´esamo no calentadas diferencia de 2A

6

5

6

4

8

8

6

6

3

2

4

2

7

8

7

9

10

15

8

20

9 10

25

11 30

Ejemplos de 35

40

45

1

control 2

3

4

50

Nota 1): Los valores num´ericos de efectos inhibidores de ox´ıgeno activo son proporciones en % de reducciones de niveles de ox´ıgeno activo generados en tubos de ensayo, medidas por el m´etodo descrito abajo. 55 2)

Los valores para 102 fueron obtenidos por mediciones de quimiluminiscencia.

Los resultados de ensayos cl´ınicos realizados respecto a los ejemplos 1, 4, 7 y 9 y ejemplos comparativos 2 y 4 en la tabla 1 se ilustran en la tabla 2. 60

Los resultados de ensayos cl´ınicos realizados respecto a los ejemplos 1, 4, 7 y 9 y ejemplos de control 7

2 007 414 2 y 4 de la Tabla 1 se muestra en la Tabla 2. TABLA II 5

Enfermedades

Artritis reumatoide

Enfermedad de Raynaud

Ef´elides pecas

Malestar despu´es de borrachera

10

Dosis por dia

15 g

9g

9g

12 g

3 meses

4 meses

1 mes

15

Administraci´ on Periodo

Una vez (despu´es de excesiva bebida)

Ejemplos de ensayo

1 4 7 9

2/6 3/6 11/18 16/22

2/6 2/5 4/6 6/8

1/6 1/6 6/18 6/15

3/6 3/6 13 /20 14/20

Ejemplos de control

2 4

0/8 9/8

0/5 0/6

9/6 0/4

0/4 1/5

20

25

30

Nota: Los valores num´ericos en la tabla indican las proporciones del n´ umero de los pacientes con resultados efectivos a aquel de los casos ensayados. La valoraci´on de efectos antioxidantes de las muestras, mostradas en la Tabla 1, se realizaron de acuerdo con el m´etodo descrito en Niwa y otros (Inflamation, volumen 10, n´ umero 1, 1986, p´ aginas 8081). El m´etodo se describir´a brevemente abajo.

35

Cada una de las muestras de ensayo del presente invento se someti´ o a ser sonificada y despu´es se a˜ nadi´ o a un sistema generador de especies de ox´ıgeno reactivo, (neutr´ ofilos y oxidasa de xantina-xantina); se a˜ nadi´ o la dosis terap´eutica (en terminos de su esperada concentraci´on de suero en el cuerpo humano) de cada muestra (1,6 mg/ml). 40

45

Niveles de especies de ox´ıgeno activo generados en presencia de cada muestra de ensayo, fueron medidos y fueron comparados con aquellos obtenidos de muestras de control, a las que no se hab´ıa correlacionado ninguna composici´ on seg´ un el presente invento. La dosis terap´eutica, arriba descrita, es la esperada concentraci´ on de suero de la composici´on del presente invento, cuando se absorbe por el cuerpo una dosis usada generalmente por d´ıa (10 g de la composici´ on del presente invento). Las cuatro especies de ox´ıgeno reactivo fueron medidas de acuerdo con el siguiente m´etodo:

50

55

on de ferricitocromo o por O2 − se midi´o por un espectrofot´ ometro de Para O2 − la cantidad de reducci´ Beckman a una absorbancia de 550 nm, despu´es se convirti´o en la cantidad de O2 − . Para H2 O2 puesto on en la que H2 O2 reduce la fluorescencia emitida por escopoletina en presencia de peroxidasa, la reducci´ fluorescencia emitida por escopoletina se midi´o utilizando escopletina hiperoxidasa mediante un espectrofot´ ometro fluorescentre producido por Hitachi Ltd. a una longitud de onda de excitaci´ on de 370 nm y de una longitud de onda de emisi´ on de 460 nm. Para .OH, en base del principio de que .OH reacciona con ´acido α-ceto-metiol-but´ılico (KMB) para producir etileno (C2 H4 ) se determin´o la cantidad de gas de etileno por cromatograf´ıa de gas mediante un aparato de Hitachi Ltd y se convirti´ o en la cantidad de .OH.

60

Se midi´ o la quimiluminescencia (1 02 ) utilizando un contador de centelleo de l´ıquido, bajo condiciones, en que no se a˜ nadi´ o ning´ un luminol y no se permiti´ o ninguna luz.

8

2 007 414 REIVINDICACIONES

5

1. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, caracterizado por comprender la preparaci´ on de semillas, granos y/o g´ermenes de plantas con microorganismos a˜ nadidos despu´es del calentamiento y a˜ nadiendo aceite, obtenido de plantas calentadas, al producto as´ı preparado, efectu´ andose el calentamiento de forma continua y gradual, y a temperatura suave y apropiada, preferentemente entre 50◦C y 150◦C, en muchos casos entre 50◦C y 100◦ C, dependiendo esta temperatura del tipo de planta usada.

10

2. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 1, caracterizado porque la proporci´ on de dichos g´ermenes es de 5% de peso o m´as de la cantidad total de dichas semillas, granos y g´ermenes de plantas. 3. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 1, caracterizado porque se usa salvado de arroz o germen de trigo.

15

4. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 1, caracterizado porque dichas semillas, granos y/o g´ermenes de plantas se calientan por radiaci´on por rayos infra-rojos de gran alcance. 20

25

30

5. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 1, caracterizado porque dichas semillas, granos y/o g´ermenes de plantas se preparan con hongo “koji” (Aspergillus oryzae). 6. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 1, caracterizado porque se a˜ nade aceite de s´esamo. 7. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, caracterizado por comprender la preparaci´ on de semillas, granos y/o g´ermenes de plantas con microorganismos a˜ nadidos despu´es de calentar, a˜ nadiendo aceite obtenido de planta calentada y adici´on de vitamina C, derivados de vitamina C, o plantas conteniendo tales sustancias. 8. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque la proporci´ on de dichos g´ermenes es de 5% de peso o m´as de la cantidad total de dichas semillas, granos, y g´ermenes de plantas.

35

40

9. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque se usa salvado de arroz o germen de trigo. 10. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque dichas semillas, granos y/o g´ermenes de plantas se calientan en un recipiente hecho de metales revestidos de cer´amica o materiales de alfarer´ıa de barro. 11. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque dichas semillas, granos y/o g´ermenes de plantas se calientan por radiaci´on por un rayo infra-rojo de gran alcance.

45

50

12. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque dichas semillas, granos y/o g´ermenes de plantas se preparan con hongo “koji”(Aspergillus oryzae). 13. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos, seg´ un la reivindicaci´on 7, caracterizado porque se a˜ nade aceite de s´esamo. 14. Procedimiento de producci´ on de productos naturales antioxidantes para fines m´edicos.

55

60

9