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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 220 727

51 Int. Cl. : A61K 31/44, A61K 31/197

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A61K 45/06, A61P 25/32 A61P 25/34, A61P 25/36 A61P 25/30, A61K 45/00

ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 01910051 .0

86 Fecha de presentación: 09.03.2001

87 Número de publicación de la solicitud: 1267869

87 Fecha de publicación de la solicitud: 02.01.2003

54 Título: Antagonistas del receptor metabotrópico de glutamato para tratar la tolerancia y la dependencia.

30 Prioridad: 09.03.2000 GB 0005700

73 Titular/es: GLAXO GROUP LIMITED

Glaxo Wellcome House Berkeley Avenue Greenford, Middlesex UB6 0NN, GB

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

16.12.2004

72 Inventor/es: Corsi, Mauro y

Conquet, François

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Carpintero López, Francisco

ES 2 220 727 T3

16.12.2004

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 220 727 T3 DESCRIPCIÓN Antagonistas del receptor metabotrópico de glutamato para tratar la tolerancia y la dependencia. 5

Campo de la invención La invención trata del tratamiento de la tolerancia y la dependencia. También trata de procedimientos de detección selectiva para identificar productos nuevos que se pueden usar en el tratamiento de la tolerancia y la dependencia.

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Antecedentes de la invención

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La adicción es una enfermedad cerebral cónica que se manifiesta en seres humanos en una variedad de comportamientos y en un abanico de circunstancias sociales. Aunque es un fenómeno complejo, su definición médica es un trastorno del sistema nervioso central (SNC) manifestado como una alteración del comportamiento debido a un desequilibrio neurobiológico en el cerebro (Leshner, 1997, Science 278, 45). los individuos pueden convertirse en adictos a una amplia variedad de factores, incluidas sustancias tales como fármacos. El aspecto obsesivo-compulsivo de la dependencia de fármacos puede superponerse con otros comportamientos obsesivo compulsivos tales como la ludopatía o la actividad sexual compulsiva.

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En cuanto al abuso de sustancias, se induce el comportamiento de adicto, que se mantienen de forma multifactorial, desempeñando un papel fundamental las propiedades de refuerzo indeterminadas de la que se abusa. Existen muchas sustancias diferentes de las que los individuos pueden depender, incluidos opiáceos, benzodiazepinas, anfetaminas, nicotina, cocaína y etanol.

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El impacto de la dependencia de sustancias es enorme. Por ejemplo, la dependencia de nicotina es el tipo de adicción a drogas más ampliamente difundido. Un tercio de la población mundial de más de 15 años de edad son fumadores. El tabaquismo continúa aumentando entre adolescentes y, para el año 2005 la OMS estima que habrá 10 millones de muertes al año relacionadas con el tabaco. El abandono del hábito de fumar puede provocar una serie de síntomas en individuos dependientes, incluidos síntomas de abstinencia, depresión, ansiedad, dificultad para concentrarse y ganancia de peso. A pesar de la disponibilidad de varios tratamientos, muchos fumadores no son capaces de dejar de fumar.

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Por tanto, en el área del abuso de sustancias hay una necesidad fundamental no satisfecha de agentes farmacológicos que sean más eficaces que los disponibles en la actualidad en la reducción de los síntomas de abstinencia y, de un modo más importante, en la reducción de las tasas de recaídas. De hecho, el abandono del hábito de fumar es un área terapéutica con, generalmente, malos resultados: una tasa de éxito media del 30% en comparación con el 50-80% para el área de dependencia del alcohol, opioides y cocaína (a 6 meses).

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Sin embargo, el fundamento de la intervención farmacológica es todavía fuerte, ya que sólo la farmacoterapia actúa potencialmente sobre una población mayor de la tratada con intervenciones psicosociales y, por tanto, puede potenciar estos procedimientos tradicionales mediante la mejora del cumplimiento y la calidad del tratamiento. 45

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El glutamato es el transmisor de la gran mayoría de sinapsis excitatorias en el SNC de mamíferos y desempeña un papel importante en una amplia variedad de funciones del SNC. En el pasado, se pensaba que las acciones del glutamato en el cerebro de mamíferos estaban mediadas exclusivamente por la activación de los canales de cationes dependientes de glutamato, denominados receptores ionotrópicos de glutamato: véase Watkins & Evans, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 21, 165 (1985). Sin embargo, hacia mediados de la década de 1980, con el descubrimiento de un receptor de glutamato acoplado a la activación de la hidrólisis de fosfonoinosítidos, comenzaron a aparecer pruebas de la existencia de receptores de glutamato acoplados directamente a un segundo mensajero a través de las proteínas G. Esto condujo al descubrimiento de una nueva familia de receptores de glutamato denominados receptores metabotrópicos de glutamato (mGluR): véase, por ejemplo, Sladeczek y col., Nature, 317, 717 (1985) y Sugiyama y col., Nature, 325, 531 (1987).

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La búsqueda de ADNc relacionados con la familia de mGluR ha tenido como resultado el aislamiento de ocho genes que codifican distintos mGluR. Estos receptores se denominan mGluR1 hasta mGluR8. En función de la homología en la secuencia de aminoácidos, los ocho mGluR se pueden clasificar en tres grupos. El grupo 1 incluye los receptores mGluR1 y mGluR5, el grupo II los receptores mGluR2 y mGluR3 y el grupo III los receptores mGluR4, mGluR6, mGluR7 y mGluR8. Mientras que el grupo I de mGluR estimula el metabolismo del fosfato inositol y la movilización del Ca2+ intracelular, los grupos II y III de mGluR están acoplados de forma negativa a la adenilato ciclasa (Schoepp & Conn. Trend Pharmacol. Sci., 14, 13, 1993 y Pin & Duvoisin, Neuropharmacology, 34, 1 (1995)). El documento WO-A-98/40407 describe una nueva familia de proteínas de activación sináptica (en particular Homer) que se encontró que se unían a mGluR5 o mGluR1α. Se sugiere que estas proteínas puedan ser usadas en ensayos de detección selectiva para identificar compuestos que interfieran con o modulen esta unión, cuyos compuestos pueden quizás usarse como fármacos para tratar epilepsia, desarrollo anormal del cerebro, daño neuronal, traumas o ciertas adicciones a sustancias químicas. No hay indicación alguna sobre si tales compuestos serían por sí mismos 2

ES 2 220 727 T3 agonistas o antagonistas de la actividad receptora, o si tendrían algún efecto a parte de interferir la unión de Homer con el receptor. Sumario de la invención 5

Esta invención se basa en nuestros hallazgos de que:

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(i) un compuesto que puede actuar como antagonista selectivo del receptor metabotrópico de glutamato, mGluR5, puede reducir la reinstauración del comportamiento de búsqueda de nicotina en ratas tras la exposición a determinantes experimentales estimuladores de la recaída del uso de tabaco; y (ii) ratones defectivos para el receptor mGluR5 no exhiben hiperactividad inducida por cocaína y no muestran respuesta alguna a las propiedades de refuerzo de la cocaína y se autoadministran anfetaminas a ninguna de las dosis probadas.

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Nosotros hemos propuesto que el bloqueo farmacológico del receptor mGluR5 conduce a la regulación negativa de los receptores de dopamina 2 (D2), que a su vez reducen la actividad dopaminérgica. La reducción de la actividad dopaminérgica conduce a una disminución de las recaídas en el uso del tabaco. También hemos propuesto que el receptor mGluR5 causa la respuesta de hiperactividad a la administración de cocaína y también es un componente esencial del proceso de recompensa inducido por la cocaína y las anfetaminas. Además hemos propuesto que el receptor mGluR5 está implicado en el “aprendizaje emocional”. La adicción implica que un individuo ha “aprendido” primero a ser dependiente antes de ser adicto. Cada proceso de memorización está precedido y nosotros sugerimos que el receptor mGluR5 es responsable del proceso de “aprendizaje” de la dependencia, al margen del tipo de dependencia en cuestión. Por tanto, el receptor mGluR5 4w necesario para el inicio del proceso de dependencia, antes del establecimiento final de la adicción fisiológica. Según la presente invención, se proporciona, por tanto, el uso de un antagonista del receptor mGluR5, típicamente del mGluR5 humano, en la fabricación de un medicamento para usar en un procedimiento de tratamiento de tolerancia d dependencia, bulimia nerviosa, anorexia nerviosa o trastorno obsesivo-compulsivo. La invención también proporciona:

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- un antagonista del receptor mGluR5 para usar en un procedimiento de tratamiento del organismo humano o animal mediante terapia; - un procedimiento para tratar un hospedador que sufra tolerancia o dependencia, comprendiendo dicho procedimiento administrar al hospedador una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista de mGluR5;

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- una composición farmacéutica que comprende un antagonista del mGluR5 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; - productos que contienen un antagonista del receptor mGluR5 y una sustancia terapéutica como una preparación combinada para su uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de un trastorno para el cual se usa dicha sustancia terapéutica, en el que el uso de la sustancia terapéutica en ausencia de dicho antagonista podría conducir a tolerancia o dependencia de la sustancia terapéutica; - uso el receptor mGluR5 para identificar un producto para usar en el tratamiento de la tolerancia o la dependencia;

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- un procedimiento para identificar un producto para usar en el tratamiento de la tolerancia o la dependencia, que comprende: (a) poner en contacto un producto de prueba con mGluR5 en condiciones en las que la ausencia de la sustancia de prueba conduciría a actividad de dicho mGluR5, y

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(b) determinar si el producto de prueba es antagonista de la actividad de mGluR5; por tanto, para determinar si el producto de prueba puede usarse en el tratamiento de la tolerancia o dependencia de una sustancia; - un producto identificado mediante un procedimiento de la invención; 60

- un producto de la invención para usar en un procedimiento de tratamiento del organismo humano o animal mediante terapia; 65

- uso de un producto de la invención para la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de la tolerancia o la dependencia; - un procedimiento para tratar a un hospedador que sufra tolerancia o dependencia, comprendiendo el procedimiento administrar al hospedador una cantidad terapéuticamente eficaz de un producto de la invención; 3

ES 2 220 727 T3 - una composición farmacéutica que comprende un producto de la invención y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; y 5

- productos que contienen un producto de la invención y una sustancia terapéutica como una preparación combinada para su uso simultáneo, por separado o secuencial en el tratamiento de un trastorno para el que se usa dicha sustancia terapéutica, en el que el uso de la sustancia terapéutica en ausencia de dicho producto podría conducir a tolerancia o dependencia de la sustancia terapéutica. Breve descripción de las figuras

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La figura 1 (a) muestra los efectos de cocaína en la actividad motora de ratones mutantes () y de tipo salvaje (). Se midió la actividad horizontal cada 5 minutos durante una sesión de 60 minutos. Se inyectó a los ratones suero salino por vía i.p. y se introdujeron en el aparato en el tiempo 0. A los 15 minutos, los ratones recibieron 10 mg/kg de cocaína i.p. y se introdujeron de nuevo en el aparato. Se llevó a cabo el análisis estadístico (ANOVA de una sóla vía; n= 5-12) por comparación de valores a los tiempos de 20 a 60 minutos. Se omiten los EME. (b) muestra los efectos de cocaína sobre la actividad motora de ratones mutantes (barras negras) y de tipo salvaje (barras blancas). La cantidad total de actividad horizontal medida durante la sesión de 60 minutos se calculó como el porcentaje de efecto del tratamiento con vehículo (% cuantas frente a vehículo). Se inyectó a los ratones suero salino por vía i.p. y se introdujeron en el aparato en el tiempo 0. A los 15 minutos, los ratones recibieron 10, 20 ó 40 mg/kg de cocaína i.p. y se introdujeron de nuevo en el aparato. Se llevó a cabo el análisis estadístico (ANOVA de una sóla vía seguido por la prueba de Dunnett, * = p < 0,05; n= 14-16) por comparación de valores a los tiempos de 20 a 60 minutos. Se omiten los EME. La figura 2 muestra los resultados de experimentos de autoadministración de cocaína; (a) el experimento de aprendizaje con un reforzador de alimento (leche con azúcar) muestra que los ratones mGlu (+/+) (barras negras) y (-/-) (barras blancas) respondieron con un comportamiento operante igual; y

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(b) La curva de dosis respuesta a dosis diferentes de cocaína en el paradigma de autoadministración para ratones de tipo salvaje (λ) y defectivos (µ). La figura 3 muestra los resultados de microdiálisis con dopamina en el núcleo accumbens de ratones (a) de tipo salvaje y (b) defectivos, tras la inyección de 10 mg/kg de cocaína o tampón salino por vía intraperitoneal.

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La figura 4 muestra autoadministración de d-anfetamina en ratones defectivos (-/-) para mGluR5. Descripción detallada de la invención 40

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La presente invención se refiere a antagonistas del receptor mGluR5 para tratar la tolerancia o la dependencia. preferiblemente, el receptor mGluR5 es mGluR5 humano. Un antagonista del mGluR5 es una sustancia que disminuye o anula el efecto de un ligando(agonista) que típicamente activa el mGluR5. Por tanto, el antagonista puede ser, por ejemplo, un antagonista químico, un antagonista farmacocinético, un antagonista que actúe por medio de bloqueo del receptor, un antagonista no competitivo o un antagonista fisiológico. Un antagonista químico es un antagonista que se une al ligando en solución de forma que se pierde el efecto del ligando.

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Un antagonista farmacocinético es uno que reduce de forma eficaz la concentración del fármaco activo en su sitio de acción, por ejemplo aumentando la tasa de degradación metabólica del ligando activo. 55

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El antagonismo mediante bloqueo del receptor implica dos mecanismos importantes: antagonismo competitivo reversible e irreversible, o antagonismo competitivo sin equilibrio. El antagonismo competitivo reversible se produce cuando la tasa de disociación de las moléculas antagonistas es lo bastante elevada como para que, tras la adición del ligando, se produzca un desplazamiento de las moléculas antagonistas de los receptores. por supuesto, el ligando no puede desalojar una molécula antagonista unida, o viceversa. El antagonismo competitivo irreversible o sin equilibrio se produce cuando el antagonista se disocia muy lentamente, o no lo hace, del receptor, con el resultado de que no tiene lugar ningún cambio en la ocupación del antagonista cuando se aplica el ligando. Por tanto, no se puede superar el antagonismo. Al antagonismo no competitivo describe la situación en la que el antagonista bloquea en algún punto de la cía de transducción de señal, lo que conduce a la producción de una respuesta por parte del ligando.

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Antagonismo fisiológico es un término usado libremente para describir la interacción de dos sustancias cuyas acciones opuestas en el organismo tienden a anularse mutuamente. 4

ES 2 220 727 T3 Un antagonista también puede ser una sustancia que disminuya o anule la expresión del receptor mGluR5 funcional. por tanto, un antagonista puede ser, por ejemplo, una sustancia que disminuya o anule la expresión del gen que codifica el receptor mGluR5, disminuya o anule la traducción del ARN de mGluR5, disminuya o anule la modificación postraduccional de la proteína mGluR5 o disminuya o anule la inserción de mGluR5 en la membrana celular. 5

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Los antagonistas preferidos sin aquéllos que conducen a una reducción de la activación por el ligando de al menos un 10%, al menos un 20%, al menos un 30%, al menos un 40%, al menos un 50%, al menos un 60%, al menos un 70%, al menos un 80%, al menos un 90%, al menos un 95% o al menos un 99% a una concentración del antagonista de 1 µgml−1 , 10 µgml−1 , 100 µgml−1 , 500 µgml−1 , 1 mgml−1 , 10 mgml−1 , 100 mgml−1 . El porcentaje de antagonismo representa la disminución del porcentaje de la actividad del receptor mGluR5 en ensayos comparativos en presencia y ausencia del antagonista. cualquier combinación de los grados mencionados anteriormente de porcentaje de antagonismo y concentración del antagonista pueden usarse para definir un antagonista de la invención, prefiriéndose un antagonismo mayor a concentraciones menores. Un antagonista para usar en la invención puede ser un antagonista relativamente inespecífico, que es, en general un antagonista de receptores mGluR. Sin embargo, se prefiere que un antagonista ejerza antagonismo sólo sobre el grupo I de mGluR. Más preferiblemente, un antagonista usado en la invención es un antagonista selectivo del receptor mGluR5. Un antagonista selectivo de mGluR5 es uno que ejerza antagonismo sobre el receptor mGluR5, pero que el antagonismo que ejerza sobre otros mGluR sea débil o ninguno en absoluto. Los antagonistas más preferidos son aquéllos que pueden ejercer antagonismo selectivo sobre mGluR5 a concentraciones bajas, por ejemplo, aquéllos que producen un nivel de antagonismo del 50% o mayor a una concentración de 100 µgml−1 o menor. Por tanto, los antagonistas selectivos de mGluR5 pueden exhibir típicamente una actividad en el receptor mGluR5 al menos 100 veces mayor que en le receptor mGluR1, preferiblemente una actividad al menos 200 veces mayor y más preferiblemente una actividad al menos 400 veces mayor. Pueden exhibir un alto grado de selectividad y afinidad como antagonistas del receptor mGluR5 humano y/o de rata. En los documentos Ep-A-0807621, WO 99/02497, WO 00/20001 y WO 00/63166 se describen antagonistas adecuados para usar en la invención. Como se describe en el documento WO 9/02497, los antagonistas adecuados pueden, por tanto, tener la fórmula (I):

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en la que

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R1 representa hidrógeno, alquilo inferior, hidroxialquilo inferior, alquilamino inferior, piperidino, carboxi, carboxi esterificado, carboxi amidado, alquilo inferior insustituido, N-alquilo inferior-N-fenilcarbamoílo sustituido con alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo, alcoxi inferior, halo-alquilo inferior o halo-alcoxi inferior; R2 representa hidrógeno, alquilo inferior, carboxi, carboxi esterificado, carboxi amidado, hidroxi-alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior o alcanoiloxi inferior, 4-(4-fluoro-benzoil)-piperidin-1-ilcarboxi, 4-t-butiloxicarbonio-piperazin-1-il-carboxi, 4-(4-azido-2-hidroxibenzoil)-piperazin-1-il-carboxi o 4-(4-azido-2-hidroxi-3-yodo-benzoil)piperazin-1-il-carboxi; R3 representa hidrógeno, alquilo inferior, carboxi, carbonil-alcoxi inferior, carbamoil-alquilo inferior, hidroxialquilo inferior, aminometil-alquilo diinferior, morfonilocarbonilo o 4-(4-fluoro-benzoil)-piperadin-1-il-carboxi;

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R4 representa hidrógeno, alquilo inferior, hidroxi, hidroxi-alquilo inferior, amino-alquilo inferior, alquilamino inferior-alquilo inferior, alquilamino diinferior-alquilo inferior, alquilenamino inferior-alquilo inferior insustituido o sustituido con hidroxi, alcoxi inferior, alcanoiloxi inferior, amino-alcoxi inferior, alquilamino inferior-alcoxi inferior, alquilamino diinferior-alcoxi inferior, ftalimido-alcoxi inferior, alquilenamino inferior-alcoxi inferior insustituido o sustituido con hidroxi o con 2-oxo-imidazolidin-1-ilo, carboxi, carboxi esterificado o amidado, carboxi-alcoxi inferior o carboxi esterificado-alcoxi inferior; X representa un grupo alquenileno inferior o alquenileno opcionalmente sustituido con halo unido a través de átomos de carbono saturados adyacentes o de un grupo azo (-N=N-), y R5 representa un grupo aromático o heteroaromético que está insustituido o sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados entre alquilo inferior, halo, haloalquilo inferior, halo-alcoxi inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, fenilo insustituido o sustituido con alquilo inferior, alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo, fenil-alquinilo inferior insutituido o sustituido con alquilo inferior, alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo, hidroxi, hidroxi-alquilo inferior, alcanoiloxi inferior-alquilo inferior, alcoxi 5

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inferior, alqueniloxi inferior, alquilendioxi inferior, alcanoiloxi inferior, amino-, alquilamino inferior-, alcanoilamino inferior- o N-alquilo inferior-N-alcanoilamino inferior-alcoxi inferior, fenoxi insustituido o sustituido con alquilo inferior, alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo, fenilo-alcoxi inferior insustituido o sustituido con alquilo inferior, alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo, acilo, carboxi, carboxi esterificado, carboxi amidado, ciano, carboxi-alquilamino inferior, carboxi esterificado-alquilamino inferior, carboxi amidado-alquilamino inferior, fosfono-alquilamino inferior, fosfono esterificado-alquilamino inferior, nitro, amino, alquilamino inferior, alquilamino diinferior-acilamino, N-acilN-alquilamino inferior, fenilamino, fenil-alqyuilamino inferior, cicloalquil-alquilamino inferioro heteroaril-alquilamino inferior, cada uno de los cuales pueden estar insustituidos o sustituidos con alquilo inferior, alcoxi inferior, halo y/o trifluorometilo; sus óxidos y sus sales farmacéuticamente aceptables.

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Los compuestos de fórmula (I) con grupos básicos pueden formar sales de adición ácida y los compuestos de la fórmula (I) que tienen grupos ácidos pueden formar sales con bases. Los compuestos de fórmula (I) que tienen grupos básicos y además tienen al menos un grupo ácido también pueden formar sales internas. También se incluyen las sales totales y parciales, es decir, las sales con 1, 2 ó 3, preferiblemente 2, equivalentes de base por mol de ácido de fórmula (I), o sales con 1, 2 ó 3 equivalentes, preferiblemente 1 equivalente, de ácido por mol de base de fórmula (I). Terapéuticamente sólo se usan las sales inocuas y farmacéuticamente aceptables y, por tanto, son las preferidas. En la presente descripción, halo quiere decir flúor, cloro, bromo o yodo. Alquilo inferior es, típicamente, C1−6 , por ejemplo alquilo C1−4 . Alcoxi inferior es típicamente C1−4 , por ejemplo alcoxi C1−4 . Alquinilo inferior es típicamente alquinilo C2−5 . Alcanoílo inferior es típicamente alcanoílo C2−5 . alquileno inferior es típicamente alquileno C2−5 . Alquenileno inferior es típicamente alquenileno C2−5 . Alquinileno inferior es típicamente alquinileno C2−4 . Cuando X representa un grupo alquenileno, se prefiere la configuración trans.

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Los compuestos preferidos de fórmula (I) son aquéllos en los que: X representa un alquenileno (C2−4 ) o un grupo alquinileno opcionalmente sustituido con halo o un grupo alquenileno unido mediante átomos de carbono insaturados adyacentes.

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R1 es hidrógeno, alquilo (C1−4 ), alcoxi (C1−4 ), hidroxialquilo (C1−4 ), ciano, etinilo, carboxi, alcoxicarbonilo (C1−4 ), dialquilamino (C1−4 ), alquilaminocarbonilo (C1−6 ), trufluorometilfenilaminocarbonilo. R2 es hidrógeno, hidroxialquilo (C1−4 ), hidroxialquilo (C1−4 ), alcoxi (C1−4 ), carboxi, alcanoiloxi(C2−5 ), alcoxicarbonilo (C1−4 ), dialquilamino(C1−4 ), alcanoílo (C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminometilo, 4-(4-fluorobenzoil)piperidin-1-il-carboxi, 4-t-butiloxicarbonil-piperazin-1-il-carboxi, 4-(4-azido-2-hidroxibenzoil)-piperazin-1-il-carboxi o 4-(4-azido-2hidroxi-3-yodo-benzoil)-piperazin-1-il-carboxi. R3 es hidrógeno, alquilo (C1−4 ), carboxi, alcoxi(C1−4 )carbonilo, alquil(C1−4 )carbamoílo, hidroxialquilo (C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminometilo, morfonilocarbonilo o 4-(4-fluorobenzoílo)-piperidin-1-il-carboxi.

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R4 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi (C1−4 ), carboxi, alcanoiloxi (C2−5 ), alcoxi(C1−4 )carbonilo, aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalquilo(C1−4 ), carboxialquil(C1−4 )carbonilo, alcoxi(C1−4 )carbonilalcoxi(C1−4 ), hidroxialquilo (C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), m-hidroxi-p-azidofenilcarbonilamidoalcoxi(C1−4 ), y 45

R5 es un grupo de fórmula

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en la que Ra y Rb son, de forma independiente, hidrógeno, hidroxi, halógeno, nitro, ciano, carboxi, alquilo (C1−4 ), alcoxi 6

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(C1−4 ), hidroxialquilo(C1−4 ), alcoxi(C1−4 )carbonilo, alcanoílo(C2−7 ), alcanoiloxi(C2−5 ), alcanoiloxi(C2−5 )alquilo(C1−4 ), trifluorometilo, trifluorometoxi, trimetilsililetinilo, alquinilo(C2−5 ), amino, azido, aminoalcoxi(C1−4 ), alcanoil(C2−5 ) aminoalcoxi(C1−4 ), alquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), alquil(C1−4 )amino, dialquil(C1−4 ) amino, monohalobencilamino, trienilmetilamino, tienilcarbonilamino, trifluorometilfenilaminocarbonilo, tetrazolilo, alcanoil(C2−5 )amino, bencilcarbonilamino, alquil(C1−4 )carbonilamino, alcoxi(C1−4 )carbonil-aminocarbonilamino o alquil(C1−4 )sulfonilo. Rc es hidrógeno, flúor, cloro, bromo, hidroxi, alquilo (C1−4 ), alcanoiloxi(C2−5 ), alcoxi(C1−4 ) o ciano, y

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Rd es hidrógeno, halógeno o alquilo(C1−4 ). Los compuestos más preferidos de fórmula (I) son aquéllos en los que X es como se ha definido anteriormente y R1 es hidrógeno, alquilo(C1−4 ), alcoxi(C1−4 ), ciano, etinilo o dialquil(C1−4 )amino,

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R2 es hidrógeno, hidroxi, carboxi, alcoxi(C1−4 )carbonilo, dialquilo(C1−4 )aminometilo, 4-(4-fluorobenzoílo)-piperidin-1-il-carboxi, 4-t-butiloxicarbonil-piperizin-1-il-carboxi, 4-(4-azido-2-hidroxibenzoil)-‘piperazin-1-il-carboxi o 4-(4-azido-2-hidroxi-3-yodo-benzoil)-piperazin-1-il-carboxi, 20

R3 es como se ha definido anteriormente, R4 es hidrógeno, hidroxi, carboxi, alcanoiloxi(C2−5 ), alcoxi(C1−4 )carbonilo, aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalquilo(C1−4 ) o hidroxialquilo(C1−4 ), y

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R5 es un grupo de fórmula

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en la que Ra y Rb son de forma independiente son hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo(C1−4 ), alcoxi(C1−4 ), trifluorometilo, trifluorometoxi o alquinilo(C2−5 ) y Rc y Rd son como se ha definido anteriormente.

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Otros antagonistas selectivos de mGluR son 2-arilalquenil-, 2-heteroarilaquenil-, 2-arilalquinil-, 2-heteroaril-alquinil-, 2-arilazo y 2-heteroarilazo-piridinas, más particularmente 6-metil-2-(fenilazo)-3-piridinol, (E)-2-metil-6-estirilpiridina y (fenilazo)-3-piridinol, (E)-2-metil-6-estiril-piridina y compuestos de fórmula (II):

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en la que 55

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R1 es hidrógeno, alquilo(C1−4 ), alcoxi(C1−4 ), ciano, etinilo, o dialquil(C1−4 )amino, R2 es hidrógeno, hidroxi, carboxi, alcoxi(C1−4 )carbonilo, dialquil(C1−4 )aminometilo, 4-(4-fluorobenzoil)-piperidin1-il-carboxi, 4-t-butiloxicarbonil-piperazin-1-il-carboxi, 4-(4-azido-2-hidroxibenzoil)-piperazin-1-il-carboxi o 4-(4azido-2-hidroxi-3-yodo-benzoil)-piperazin-1-il-carboxi. R3 es hidrógeno, alquilo(C1−4 ), carboxi, alcoxi(C1−4 )carbonilo, alquil(C1−4 )carbamoílo, hidroxialquilo(C1−4 ). dialquil(C1−4 )aminometilo, morfonilocarbonilo o 4-(4-fluoro-benzoil)-piperazin-1-il-carboxi.

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R4 es hidrógeno, hidroxi, carboxi, alcanoiloxi(C2−5 ), alcoxi(C1−4 )carbonilo, aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalcoxi(C1−4 ), dialquil(C1−4 )aminoalquilo(C1−4 ) o hidroxialquilo(C1−4 ), y R5 es un grupo de fórmula 7

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en la que 10

Ra y Rb son de forma independiente hidrógeno, halógeno, nitro, ciano, alquilo(C1−4 ), alcoxi(C1−4 ), trifluorometilo, trifluorometoxi o alquinilo(C2−5 ), y Rc es hidrógeno, flúor, cloro, bromo, hidroxialquilo(C1−4 ), alcanoiloxi(C2−5 ), alcoxi (C1−4 ) o ciano; y

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Rd es hidrógeno, halógeno o alquilo(C1−4 ); en forma libre o en forma de sales farmacéuticamente aceptables.

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En el documento EP-A-0807621 se describen compuestos de fenil glicina adecuados. Por tanto, los compuestos de fenil glicina útiles en la invención pueden tener la fórmula (III)

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en la que R1 es hidrógeno, hidroxi o alcoxi(C1-6); 35

R2 es hidrógeno, carboxi, tetrazolilo, -SO2 H, -SO3 H, -CONHOH, O -P(OH)OR’, -PO(OH)OR’, -OP(OH)OR’ O -OPO(OH)OR’, donde R’ es hidrógeno, alquilo C1−6 , alquenilo C2−6 o arilarilo C1−6 ; R3 es hidrógeno, hidroxi o alcoxi C1−4 ; y

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R4 es flúor, trifluorometilo, nitro, alquilo C1−6 , cicloalquilo C3−7 , alquenilo C2−6 , alquinilo C2−6 , alquiltio C1−6 , heteroarilo, arilo opcionalmente sustituido, arilalquilo C1−6 opcionalmente sustituido, arilalquenilo C2−6 opcionalmente sustituido, arilalquinilo C2−6 opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi C1−6 opcionalmente sustituido, ariltio opcionalmente sustituido, aril C1−6 alquiltio opcionalmente sustituido o -CONR”R”’, -NR”R”’, -OCONR”R”’ O -SONR”R”’, donde R” Y R”’ son, cada uno, hidrógeno, alquilo C1−6 , alquilo o arilalquilo C1−6 , o R” y R”’ juntos forman un anillo alquileno C3−7 ; o una sal o éster de los mismos.

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En una forma de realización, R1 , R2 y R3 no son todos hidrógeno. En otra forma de realización, R4 no es flúor cuando R2 y R3 son hidrógeno y R1 es hidroxi. En las fórmulas anteriores, el grupo alquilo puede ser de cadena lineal o ramificada, tal como, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo e isobutilo, y preferiblemente es metilo o etilo. Un grupo alquenilo C2−6 incluye, por ejemplo, vinilo, pro-2-enilo, but-3-enilo, pent-4-enilo e isopropenilo. Un grupo alquenilo preferido es de la fórmula R-CH=CH-, donde R es alquilo C1−4 . Un grupo alquinilo incluye, por ejemplo, prop-2-inilo, but-3-inilo y pent-t-inilo. Un grupo alquinilo preferido es de la fórmula: R − C ≡ C−

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donde R es alquiloC1−4 . Un grupo cicloalquilo C3−7 es, preferiblemente, por ejemplo, ciclopropilo, ciclopentilo o ciclohexilo, y estos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes metilo. Preferiblemente, un grupo arilo es fenilo o naftilo, y un grupo fenilo o naftilo opcionalmente sustituido se sustituye opcionalmente con, por ejemplo, uno o más sustituyentes, preferiblemente de 1 a 3 sustituyentes, seleccionados de entre alquilo C1−4 , especialmente metilo, alcoxi C1−4 , especialmente metoxi y etoxi, carboxi, hidroxi, ciano, halo, especialmente bromo, cloro y flúor, trifluorometilo, nitro, amino, acilamino C1−4 y alquiltio C1−4 . Un grupo naftilo puede ser 1-naftilo o 2-naftilo. Cuando está sustituido, un grupo fenilo o naftilo está sustituido preferiblemente con de 8

ES 2 220 727 T3 uno a tres sustituyentes. Un grupo arilalquilo C1−6 es un grupo tal que esté unido a través de una cadena alquileno, por ejemplo, aril (CH2 )n , donde n es de 1 a 6 y un ejemplo más preferido es bencilo. Los ejemplos de grupos preferidos son los siguientes: 5

ariloxi-fenoxi opcionalmente sustituido; arilalcoxi C1−6 - fenilmetioxi o feniletoxi opcionalmente sustituido; ariltio-feniltio opcionalmente sustituido;

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arilalquiltio C1−6 -fenilmetiltio o feniletiltio opcionalmente sustituido.

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Un grupo heteroarilo puede ser un grupo arilo que tiene uno o más átomos hetero en el anillo. El término incluye estructuras de anillo condensado. Preferiblemente el grupo heteroarilo contiene uno o dos heteroátomos seleccionados de entre oxígeno, nitrógeno y azufre. Preferentemente contiene de 5 a 10 átomos de carbono y, por ejemplo, puede ser de la fórmula:

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donde Q es -O, -S o -NR, y R es hidrógeno o alquilo C1−4 . Por otra parte, un grupo heteroarilo comprende un anillo condensado de benceno como, por ejemplo:

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y otros grupos heteroarilo incluyen: 35

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Grupos heteroarilo especialmente preferidos son pirrolilo, tienilo o furanilo, siendo ejemplos preferidos 2-tienilo y 2-furanilo, y también piridilo, en particular 2 y 3-piridilo. 45

El grupo R2 es, preferiblemente, hidrógeno, carboxi o tetrazolilo, y especialmente carboxi, y el grupo R4 es, preferiblemente, alquilo C1−6 , alquenilo C2−6 , fenilo opcionalmente sustituido, fenilalquilo C1−6 opcionalmente sustituido, fenoxi opcionalmente sustituido, feniltio opcionalmente sustituido o fenilalquiltio C1−6 opcionalmente sustituido. Los grupos R1 y R3 son cada uno, preferiblemente, hidrógeno o hidroxi.

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Entre los ejemplos de antagonistas concretos del receptor mGluR5 que son útiles en la invención se incluyen 2metil-6-(feniletinil)-piridina (MPEP), 2-metil-6-[(1E)-2-feniletenil]piridina, 6-metil-2-(fenilazo)-3-piridinol, (RS)-αmetil-4-carboxifenilglicina (MCPG) y análogos y derivados de los mismos. 55

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Un antagonista del receptor mGluR5 puede usarse en un procedimiento de tratamiento del organismo humano o animal. El tratamiento puede ser un tratamiento profiláctico. En particular, tales antagonistas pueden usarse en el tratamiento de la tolerancia y/o dependencia. Los antagonistas también pueden usarse en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de la tolerancia y/o la dependencia. El estado de un paciente que sufre tolerancia y/o dependencia puede mejorarse mediante la administración de un antagonista del receptor mGñuR5. Puede administrarse una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor mGluR5 a un paciente humano que lo necesite. La tolerancia y la dependencia pueden tratarse según la invención. La tolerancia y la dependencia son fenómenos distintos.

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La tolerancia describe un aumento de la dosis necesaria para producir un efecto farmacológico determinado de una sustancia concreta En el caso de los opiáceos, por ejemplo, la tolerancia se desarrolla con rapidez. 9

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La dependencia implica dos componentes distintos, a saber, dependencia física y dependencia psicológica. la dependencia física se caracteriza por un claro síndrome de abstinencia, de forma que el abandono brusco de una sustancia interrupción de la administración) puede conducir a, por ejemplo, un aumento de la irritabilidad o temblores del cuerpo. La naturaleza exacta del síndrome de abstinencia está relacionada con la sustancia concreta en cuestión. La invención puede usarse en el tratamiento del síndrome de abstinencia/abandono de la sustancia. La dependencia psicológica es más compleja que la dependencia física y, probablemente, más importante en el desarrollo de la toma compulsiva de sustancias (es decir, adicción). Típicamente es muy probable que los adictos a los opiáceos que se recuperan del todo del síndrome de abstinencia vuelvan a tomar la droga más adelante. En modelos animales de dependencia psicológica de opiáceos basados en la medición de la potencialidad de las drogas para actuar como reforzadores en las pruebas de acondicionamiento operante, el efecto reforzador de la droga supera la duración del síndrome de abstinencia físico. La invención puede usarse en el tratamiento de la dependencia psicológica y en la reducción o anulación de los efectos reforzadores de las drogas. La invención es aplicable al tratamiento de muchas formas diferentes de tolerancia o dependencia. La tolerancia o dependencia pueden reducirse o anularse. Típicamente, la invención puede aplicarse al tratamiento de la tolerancia o la dependencia de sustancias. En el contexto de tolerancia y dependencia de sustancias, la invención se puede aplicar a lo que se puede denominar en general “abuso”, tal como la adicción a nicotina, en el caso de los fumadores, o el consumo de otras drogas, y al uso terapéutico. Por ejemplo, el uso terapéutico de benzodiazepinas y opiáceos puede conducir a tolerancia y/o dependencia de esos fármacos. Claramente es una ventaja el hecho de que esas consecuencias de efectos farmacológicos terapéuticos se vean disminuidas o anuladas. Por tanto, puede usarse un antagonista del receptor mGluR5 para prevenir la adicción a un producto farmacéutico terapéutico. En tal aplicación, el antagonista del receptor mGluR5 se administra antes de administrar dicho producto farmacéutico terapéutico, después de que se haya administrado dicho producto farmacéutico o después de la interrupción de la administración del producto farmacéutico, o puede administrarse de forma conjunta con dicho producto farmacéutico.

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La invención también tiene importancia en el tratamiento de un amplio espectro de otros trastornos relacionados con la adicción. Por ejemplo, se puede usar un antagonista del receptor mGluR5 en el tratamiento de bulimia nerviosa, anorexia nerviosa, ludopatía y apuestas, dependencia del sexo, dependencia de actividad deportiva o trastornos obsesivo-compulsivos. Por tanto, puede usarse un antagonista del receptor mGluR5 para tratar comportamientos obsesivos y/o compulsivos y los componentes obsesivos y/o compulsivos de una serie de trastornos tal como la ludopatía y/o la actividad sexual compulsiva. La invención proporciona tratamiento de la tolerancia a y la dependencia de una serie de sustancias. La invención es particularmente útil en el tratamiento de la dependencia de la nicotina, por ejemplo, para tratar los efectos de la abstinencia provocada por la interrupción del hábito de fumar. por tanto, la invención puede usarse en el tratamiento de los fenómenos relacionados con la interrupción del hábito de fumar, incluyendo ansias, depresión, ansiedad, dificultad para la concentración y ganancia de peso. Se pueden reducir los síntomas de abstinencia asociados con la interrupción del hábito de fumar.

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La invención también es útil en el tratamiento de la adicción a cocaína, anfetaminas y alcohol. La dependencia de cocaína, anfetaminas y alcohol puede reducirse o anularse. La tolerancia a y la dependencia de fármacos relacionados con anfetaminas, tal como dextroanfetamina, metilanfetamina, metilfenidato y fenfluramina, también puede tratarse usando un antagonista del receptor mGlu5.

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La invención es además útil en el tratamiento de tolerancia o dependencia de opiáceos, en ambos contextos de “abuso”, por ejemplo, dependencia de heroína, y en contextos “farmacéuticos”, por ejemplo en la profilaxis de tolerancia y/o dependencia de morfina. Además, la tolerancia y dependencia de benzodiazepinas, incluidos el diazepam y el tetrazepam, pueden tratarse mediante el uso de un antagonista del receptor mGluR5.

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Los antagonistas del receptor mGluR5 pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación. por tanto, pueden administrarse por vía oral, por ejemplo como comprimidos, pastillas, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos para dispersión. Los antagonistas también pueden administrarse por vía parenteral, bien por vía subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal, transdérmica o mediante técnicas de infusión. Los inhibidores también pueden administrarse en forma de supositorios. Un médico será capaz de determinar la vía de administración requerida para cada paciente en particular.

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La formulación de un antagonista del receptor mGluR5 dependerá de factores tales como la naturaleza del antagonista concreto, si se pretende darle uso farmacéutico o veterinario, etc. Un antagonista del receptor mGluR5 puede formularse para uso secuencial, por separado o secuencial. 65

Un antagonista del receptor mGluR5 típicamente se formula para la administración en la presente invención con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. El diluyente o vehículo farmacéutico puede ser, por ejemplo, una solución isotónica. por ejemplo, las formas sólidas orales pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, 10

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por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata, lubricantes, por ejemplo sílice, talco, ácido esteárico, magnesio o estearato cálcico, y/o polietilenglicoles; agentes de unión, por ejemplo, almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, por ejemplo, almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes, colorantes; edulcorantes, agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias inocuas y farmacológicamente inactivas usadas en las formulaciones farmacéuticas. Tales preparaciones farmacéuticas pueden fabricarse de forma conocida, por ejemplo, por medio de procedimientos de mezclado, granulado, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o recubrimiento película. Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser jarabes, emulsiones o suspensiones. Los jarabes pueden contener como vehículos, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol. Las suspensiones y emulsiones pueden contener como vehículo, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato sódico, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o alcohol polivinílico. Las suspensiones o soluciones para inyección intramuscular pueden contener, junto con el compuesto activo, un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo agua estéril, aceite de oliva, oleato etílico, glicoles, por ejemplo propilenglicol, y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. Las soluciones para la infusión o administración intravenosa pueden contener como vehículo, por ejemplo, agua estéril o, preferiblemente, pueden estar en la forma de soluciones salinas isotónicas, acuosas, estériles. A un paciente se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de un antagonista del receptor mGluR5. La dosis de un antagonista del receptor mGluR5 puede determinarse según varios parámetros, especialmente según la sustancia usada; la edad, el peso y el estado del paciente que se va a tratar; la vía de administración; y el régimen requerido. De nuevo, un médico será capaz de determinar la vía de administración requerida y la dosificación para cualquier paciente concreto. Una dosis diaria típica es de alrededor de 0,1 a 50 mg por kg de peso corporal, según la actividad del inhibidor específico, la edad, el peso y el estado del sujeto que se va a tratar, el tipo y gravedad de la degeneración, y la frecuencia y vía de administración. preferiblemente, los niveles de dosis diarias son de 5 mg a 2 g. La invención también proporciona procedimientos para identificar productos que pueden usarse en un procedimiento de tratamiento de un organismo humano o animal mediante tratamiento, en particular en el tratamiento de la tolerancia o la dependencia. Tales procedimientos comprenden esencialmente determinar si un producto de prueba es un antagonista del receptor mGluR5 y determinar si un antagonista así identificado puede usarse en el tratamiento de la tolerancia o dependencia de sustancias.

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Los antagonistas del receptor mGluR5 se han definido anteriormente y se puede usar cualquier ensayo adecuado y llevarse a cabo para determinar si el producto de prueba es un antagonista del receptor mGluR5. Preferiblemente, cualquier ensayo usado será adecuado para detección selectiva de alto rendimiento, por ejemplo, idealmente, el ensayo se llevará a cabo en un único pocillo de una placa de plástico de microtitulación. 40

Se puede usar un ensayo en cualquier formato adecuado para identificar un antagonista del receptor mGluR5. Preferiblemente, los formatos e los ensayos se adaptan de forma que se puedan llevar a cabo en un único pocillo de una placa de microtitulación de plástico. Por tanto, los ensayos se pueden adaptar para usar en técnicas de detección selectiva de alto rendimiento. 45

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Un ejemplo de ensayo para determinar la actividad de un compuesto de prueba como antagonista del receptor mGluR5 comprende expresar el receptor mGluR5 en células CHO que se han transformado con ADNc que codifican la proteína del receptor mGluR5 (Daggett y col., 1995, Neuropharmacology 34, 871). A continuación se activa el receptor mGluR5 mediante la adición de quisqualato y/o glutamato y se puede evaluar mediante, por ejemplo, la medición de: (i) hidrólisis de fosfoinositol (Litschig y col., 1999, Mol. Pharmacol. 55, 453); (ii) acumulación de [3H]citidinafosfatodiacilglicerol (Cavanni y col., 1999, Neuropharmacology 38, A10); o detección por fluorescencia del influjo de calcio hacia el interior de las células (Kawabata y col., 1996, Nature 383, 89; Nakahara y col., 1997, J. Neurochemistry 69, 1467). El ensayo se lleva a cabo en presencia y ausencia de un producto de prueba, para determinar si el compuesto de prueba puede actuar como antagonista de la actividad del producto de prueba.

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Se pueden llevar a cabo experimentos adecuados de control. por ejemplo, un antagonista putativo del receptor mGluR5 podría probarse con mGluR1 para determinar la especificidad del antagonista putativo, u otros receptores no relacionados con receptores mGluR para descartar la posibilidad de que sea un antagonista general de receptores de membrana celular. 60

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Entre los productos de prueba adecuados para identificar un antagonista del receptor mGluR5 se incluyen bibliotecas combinatorias, identidades químicas definidas, péptidos y miméticos de péptidos, oligonucleótidos y bibliotecas de productos naturales. los productos de prueba pueden usarse en una selección inicial de, por ejemplo, diez productos por reacción, y los productos de lotes que muestran antagonismo al probarse de forma individual. Además, pueden usarse productos anticuerpos (por ejemplo anticuerpos monoclonales y policlonales, anticuerpos de una única cadena, anticuerpos quiméricos y anticuerpos con CDR insertada. Los productos de prueba que muestran actividad en ensayos como los descritos anteriormente se pueden probar en 11

ES 2 220 727 T3 sistemas in vivo, tal como modelos animales de dependencia de sustancias, por ejemplo de nicotina, de cocaína o de anfetaminas. En los siguientes ejemplos se describen modelos adecuados. 5

Por tanto, la invención proporciona productos identificados mediante un procedimiento para identificar un producto que pueda usarse en un procedimiento de tratamiento del organismo humano o animal mediante terapia, en particular en el tratamiento de la tolerancia o la dependencia. Tales productos pueden usarse en procedimientos de tratamientos como se ha descrito antes. Los siguientes Ejemplos ilustran la invención:

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Ejemplo 1 Introducción 15

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Existen muchos informes acerca de que las señales relacionadas con el hábito de fumar desempeñan un papel fundamental en el mantenimiento del tabaquismo, la necesidad de un cigarrillo, la dificultad para la abstinencia y la recaída en el hábito de fumar. En investigaciones de laboratorio con seres humanos se ha mostrado que las señales relacionadas con el tabaquismo adquieren su valor condicionado de la asociación con el refuerzo de la nicotina que se obtienen de fumar un cigarro. La autoadministración de nicotina en animales de laboratorio es un modelo bien establecido de las propiedades de refuerzo de la nicotina, donde se pueden inducir comportamientos específicos de toma de nicotina y de búsqueda de nicotina y mantenerlos durante varias semanas. Se ha mostrado que el antagonismo dopaminérgico o las alteraciones en las vías de la dopamina reduce la autoadministración de nicotina. Se mostró que este modelo posee validez literal al simular los efectos sobre el comportamiento debidos a factores determinantes de la recaída en el hábito de fumar: la reexposición a nicotina a un estado estresante puede restablecer el comportamiento de búsqueda de nicotina en ratas tras una abstinencia prolongada de nicotina y extinción del comportamiento de autoadministración de nicotina: Chiamulera y col., Psychopharmacology, 127, 102 (1996); Buczek y col., Psychopharmacology, 144, 183 (1999). En Chiamulera y col., Arch. Pharmacol., 358, R578 (1998) se describe un protocolo en el que es posible inducir recaídas en ratas exponiéndolas a determinantes de las recaídas tras un periodo corto de abstinencia. Resultados

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El compuesto 2-metil-6-(feniletinil)-piridina (MPEP) es un antagonista potente y selectivo de receptores mGluR5 como se ha evaluado en receptores mGluR5 recombinantes comparados con receptores ionotrópicos de glutamato y otros mGluR. La farmacología de este compuesto se ha caracterizado en líneas celulares, cultivos celulares, en ensayos farmacológicos in vitro y en electrofisiología in vivo proporcionada de forma sistemática. Se administró MPEP a ratas para evaluar el efecto contra las recaídas en el comportamiento de búsqueda de nicotina en un modelo ya validado con farmacoterapia para el abandono del tabaquismo actual (precarga de nicotina) o potencial (mecamilamina). Se usaron ratas macho Wistar (Charles River) mantenidas en un peso de 240 g-269 g (85% de su peso corporal ad libitum). los animales se enjaularon de forma individual en una habitación con temperatura controlada y un ciclo de luz 12 h/oscuridad 12 h. Se adiestró a las ratas para que presionaran la palanca de infusión de nicotina (0,03 mg/kg/infusión) en cajas Skinner operantes. La nicotina estaba disuelta en suero salino heparinizado (0,09% de NaCl + 0,5 UI/ml de heparina) y el pH se ajustó a 7,4 con NaOH. Las dosis de nicotina se expresan como mg de base libre/kg de peso corporal por infusión. Tras la adquisición del comportamiento operante, las ratas se mantuvieron en un programa diario de autoadministración de nicotina durante al menso 2-3 semanas. En estas condiciones experimentales, el criterio para la adquisición y el mantenimiento de la dependencia de nicotina fue una actuación estable de comportamiento de toma de droga (medida como el número de infusiones de nicotina o el número de presiones de la palanca acopladas a nicotina por sesión). El día de la prueba, 24 horas después de la última sesión de autoadministración de nicotina, se expuso a las ratas a un “programa de recaídas” múltiple formado por dos componentes: en primer lugar, una fase de 30 minutos con exposición al contexto (cámara) y eventualmente tras responder a estímulos condicionados (tono + lámpara de señal) previamente acoplados a la autoadministración de nicotina. Al final del primer componente, se suministró a las ratas una inyección subcutánea (s.c.) no eventual de nicotina, 0,15 mg/kg, y se midieron las presiones de la palanca acopladas a nicotina e iniciales (pero sin consecuencias sobre la respuesta) durante la segunda fase de 120 minutos (“componente de nicotina”). La inyección s.c. de nicotina indujo un restablecimiento de respuesta significativamente mayor que la que se produjo tras la inyección de solución salina. La caracterización farmacológica de este protocolo se ha llevado a cabo utilizando dos tratamientos estándar para el abandono del tabaquismo (Rose & Corrigall, Psychopharmacology, 130, 28, 1997). El tratamiento previo con mecamilamina (1 mg/kg s.c., administrado inmediatamente antes de la sesión de recaída) o la precarga de nicotina (0,03 mg/kg i.v., administrada 30 minutos antes de la sesión, pero no los vehículos correspondientes, fueron capaces de reducir de forma significativa las presiones de la palanca acopladas a nicotina durante el “componente de nicotina” (68% y 49% respectivamente, en comparación con la respuesta tras el tratamiento con vehículo; P= < 0,05 en la prueba 12

ES 2 220 727 T3 de la t de Student). Sin embargo, no se observó efecto significativo alguno en la respuesta durante el “componente de señal”. 5

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Se disolvió MPEP en solución salina (0,09% de NaCl) y se administró a ratas a dosis de 1, 10 mg/kg o vehículo por vía intravenosa, bolos únicos, en un volumen de 1 ml/kg de peso corporal, 5 minutos antes del comienzo de la sesión de prueba de recaídas. Las pruebas de los efectos del pretratamiento con la droga se llevaron a cabo en diferentes días de sesiones de prueba. entre las diferentes sesiones de las pruebas de recaída transcurrieron al menos dos sesiones estables de autoadministración. El MPEP indujo inhibición del restablecimiento de la respuesta para la palanca acoplada a nicotina a ambas dosis de 1 y 10 mg/kg (60% y 86%, respectivamente, en comparación con la respuesta tras el tratamiento con vehículo: P=< 0,05 en el ANOVA) durante el “componente de señal”. Asimismo, ambas dosis fueron significativamente eficaces en la reducción del restablecimiento durante la fase del “componente de nicotina” a los tres puntos de tiempo, con un efecto máximo medido en el minuto 90: 42% y 98%, respectivamente, en comparación con la respuesta tras el tratamiento con vehículo: P= < 0,05 en el ANOVA. Por tanto, hemos demostrado que un compuesto que actúa como antagonista selectivo del receptor mGluR5 es capaz de reducir el restablecimiento del comportamiento de búsqueda de nicotina en ratas tras la exposición a determinantes experimentales de recaídas. Se piensa que el bloqueo farmacológico de los receptores mGluR5 puede modular de forma negativa el receptor D2 y, por tanto, reducir la actividad dopaminérgica subyacente a los comportamientos de búsqueda de la droga, incluida la recaída en el tabaquismo. Ejemplo 2

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Introducción Con el fin de investigar los mecanismos subyacentes de la dependencia de cocaína, hemos estudiado los efectos fisiológicos y de comportamiento de la cocaína sobre ratones defectivos en el receptor mGluR5. Para tener en cuanta posibles variaciones en las cepas de ratones, los defectivos se han derivado por separado en dos cepas endógamas: C57Black/6 y 129Sv. Los estudios que se recogen en la presente memoria descriptiva se llevaron a cabo en estas dos cepas. Materiales y procedimientos

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Objetivo génico: los ratones defectivos en el receptor mGluR5 se generaron del siguiente modo: de una genoteca de ADN isogénico-célula ES se aisló un fragmento genómico de 8,5 kb que contiene el último exón del gen de mGluR5 de ratón. Según los procedimientos estándar se insertaron en los dos sitios de SacII del último exón un casete de resistencia a neomicina y una unidad de selección TK, lo que dio como resultado una deleción de 360 pb en la secuencia codificadora del gen de mGluR5. La mutación se detectó mediante la técnica de Southern blot cortando el ADN genómico con EcoRI, lo que dio lugar a una banda del tipo salvaje de 5,1 kb y una banda mutada de 2,2 kb tras la hibridación con una sonda interna. Después se generaron animales heterocigotos y homocigotos, como se ha descrito previamente23 , y se confirmó la ausencia de mGluR5 con un anticuerpo frente al receptor mGluR5 (Upstate Biotech). Además, los heterocigotos se cruzaron por separado con ratones endógamos C57Bl/6J y 129SvPaslco durante 5 generaciones. A continuación se obtuvieron homocigotos mutantes así como ratones de tipo salvaje mediante el cruzamiento de los heterocigotos de la quinta generación dentro de cada entorno. Los estudios que se recogen en la presente memoria descriptiva se llevaron a cabo con ratones adultos de tipo salvaje (+/+) y KO (-/-) procedentes de estos cruzamientos. Autoadministración de cocaína: los ratones macho con mGluR5 (+/+) y (-/-) se enjaularon en un animalario con temperatura controlada y un ciclo de luz/oscuridad de 12/12 horas (luz a las 7:00 de la mañana) con alimentación y agua a demanda a excepción de durante el adiestramiento de comportamiento y durante las pruebas. los procedimientos de adiestramiento con alimento y la autoadministración de drogas se completaron en cámaras operantes (MedAssociates, Georgia, VT., EE.UU.) equipadas con 2 palancas (una activa, la otra inactiva; compensada entre los sujetos) en una pared y con un dispensador de líquido localizado en el centro de la pared opuesta. los datos experimentales y la obtención de los datos se controlaron con un PC compatible con IBM que usaba un software MedPc para Windows (MedAssociates. Georgia, VT., EE.UU.). Las inyecciones intravenosas se suministraron mediante una bomba de infusión (Modelo A, Razel Scientific) mediante sondas Tygon (diámetro interno de 0,5 mm (d.i.) x diámetro externo de 1,5 mm (d.e.), pared de 0,5 mm) conectada por un extremo a un eslabón giratorio de acero inoxidable con ensamblaje compensado (Instech, King of Prussia, PA, EE.UU.) para permitir el libre movimiento del animal, y por el otro extremo a la base del catéter montada en la región medioescapular del ratón. En un principio se adiestró a los ratones para que presionaran una palanca para ganar una recompensa líquida (leche entera con sacarosa, 60 g/l) en un programa de recompensa con una proporción fija de 1 tiempo de espera 1 segundo. Después de que los ratones ganaron 30 recompensas durante una sesión de 1 hora con este programa, se aumentaron los requerimientos del programa a lo largo de las sesiones hasta alcanzar una proporción de un programa de 2 tiempos de espera 20 segundos, que es idéntico al programa de recompensas usado posteriormente durante la autoadministración de cocaína. este adiestramiento típicamente disminuye el tiempo requerido por los animales para adquirir la autoadministración intravenosa y también permite la evaluación de las diferencias en la tasa de aprendizaje 13

ES 2 220 727 T3 y/o la capacidad para realizar la tares operante de la evaluación de los efectos de recompensa de las drogas.

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Tras la adquisición de la tarea de presionar la palanca, los ratones se anestesiaron con una mezcla de oxígenohalotano (0,8-1,5% halotano) y se les implantaron catéteres intravenosos crónicos en la yugular, como se ha descrito anteriormente (Caine y col., 1999, Psychopharmacology 147, 22-24; Deroche y col., 1997, Pharmacol. Biochem. Behav. 57, 429-40): los catéteres estaban compuestos por conductos silastic unidos a una cánula guía de acero inoxidable (Plastics One, Roanoke, VA) doblada en ángulo recto y encerrada en cemento dental sujeto con 1,0 cm cuadrado de malla de tela suave. El conducto se pasó por vía subcutánea desde la región medioescapular de los animales a la vena yugular externa derecha, donde se insertó y aseguró con un punto de sutura. Se dejó que los animales se recuperaran de la cirugía al menos 48 horas antes de proporcionarles acceso libre a cocaína. Para garantizar la permeabilidad, lo catéteres se enjuagaron todos los días con alrededor de 0,01-0,03 ml de suero salino con heparina (30 unidades usp/ml). cuando no estaban usándose, los catéteres se tapaban con un conducto Tygon de pequeña longitud tapado con monofilamentos. La permeabilidad del catéter se probó con Sodio Brevital (1% de metohexital sódico, Eli Lilly, indianápolis, IN) al final del experimento de autoadministración, para verificar la permeabilidad del catéter. Los animales con catéteres permeables exhiben una pérdida pronunciada de tono muscular dentro de los 2 segundos posteriores a la inyección intravenosa (iv) de Brevital. Todos los ratones se adiestraron con cocaína (0,8 mg/kg/inyección, 50 µl durante 2 segundos), donde 2 presiones de la palanca sobre la palanca activa activaba la bomba de infusión y suministraba una única inyección de solución con la droga con un programa de proporción fija (PF) con un periodo de 20 segundos de tiempo de espera (TE20 seg) (durante el cual se registraron las presiones de la palanca pero no se produjo ninguna consecuencia programada) hasta que se alcanzó un nivel basal estable (3 sesiones consecutivas con una variación 75% de respuesta husmeo). Después de que los ratones alcanzaron una autoadministración basal estable, se determinó una curva dosis de cocaína-respuesta, en la que se proporcionó a los ratones acceso a varias dosis de cocaína (0,0, 0,4, 0,8, 1,6 y 3,2 mg/kg/inyección) durante las sesiones diarias únicas según un cuadrado latino. Se registró el número de inyecciones de cocaína ganadas por sesión a cada dosis y se determinó el número de inyecciones a cada dosis durante al menos 2 sesiones distintas a cada dosis. Dado que los ratones (-/-) para el receptor mGluR5 no pudieron adquirir autoadministración estable de cocaína y, en su lugar, sus presiones de la palanca se extinguieron durante 3-5 sesiones de acceso a cocaína, se les volvió a adiestrar para presionar la palanca para obtener alimento según criterio (30 recompensas de alimento por sesión) entre cada dosis de cocaína. Este proceso se instauró de forma que los ratones (-/-) para mGluR5 tuvieran una tasa de respuesta distinta a cero durante el primer par de sesiones de acceso a cada dosis de cocaína. Típicamente, este nuevo adiestramiento para la obtención de alimento sólo requirió 1 ó 2 sesiones antes de terminar las pruebas con la siguiente dosis de cocaína. los ratones (-/-) para mGluR5 se probaron a las mismas dosis de cocaína que los ratones (+/+) para mGlR5, en un orden de dosis según un cuadrado latino, y se probaron a cada dosis hasta que la respuesta se estabilizó por debajo de 5 inyecciones por sesión. Microdiálisis: La técnica de microdiálisis transcerebral se usó para medir los niveles de DA en el Núcleo Accumbens de los ratones de la cepa salvaje así como de los defectivos. Los animales se anestesiaron con hidrato de cloral 450 mg/kg/10 ml i.p.) y se introdujeron en un aparato estereotáxico para pequeños animales por medio de sólo un adaptador para el hocico. Se expuso el cráneo y se cortaron los músculos laterales y se desplazaron para mostrar los huesos parietales. en cada lado se realizó un agujero de 1 mm y en agujero se insertó una sonda de microdiálisis horizontal previamente preparada (Zocchi y col., 1998. Neuroscience 82, 2) mediante un micromanipulador y se empujó a través del cerebro hasta su salida por el agujero opuesto. Se calcularon las coordenadas para colocar la sonda en el Núcleo Accumbens (A: +2,2 mm, V: -4,6 desde el bregma). Los extremos de la sonda se pegaron a cánulas de acero inoxidable de 5 mm de longitud y se aseguraron en la parte superior del cráneo mediante cola epoxi. La piel se suturó para dejar una ranura que permita el paso de las cánulas. El animal se enjauló solo durante al menos 24 horas antes de comenzar el experimento.

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El día del experimento, las cánulas se conectaron a sondas de polietileno (PE 10) a través de las cuales se bombeó un líquido cefalorraquídeo artificial (KCl 4 mM, NaCl 147 mM, CaCl2 1,3 mM) a través de la sonda a una velocidad de flujo estable de 1 µl/min. Las sondas se conectaron a un eslabón giratorio líquido para permitir el libre movimiento del animal. Antes de inyectar i.p. el tratamiento se dejaron pasar cuatro horas de perfusión. Las muestras se obtuvieron cada 20 minutos durante 3 horas tras el tratamiento e inmediatamente se congelaron a -80ºC. Al final del experimento, en cada animal se comprobó la localización de la sonda usando un criostat y una lente de aumento. Resultados

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El nivel basal de actividad locomotora de los ratones (-/-) para mGluR5 no fue significativamente diferente del de los ratones de tipo salvaje, como revelan las pruebas de habituación (no se muestra). En un experimento preliminar, cuando los ratones se trataron con el inhibidor de la recaptación de dopamina, cocaína (10 mg/kg i.p.), los resultados obtenidos mostraron que los ratones mutantes no presentaron el aumento esperado de la locomoción (Fig. 1a). Se llevó a cabo un experimento definitivo usando diferentes dosis de cocaína con el fin de caracterizar la sensibilidad reducida del mutante a los efectos estimulantes de la cocaína. Los ratones de ambos grupos se trataron con cocaína 10, 20, 40 mg/kg i.p. o con vehículo en diferentes días de prueba con un orden de dosificación aleatorio (es decir, todos los sujetos recibieron todos los tratamientos). La cocaína indujo un incremento relacionado con la dosis de la actividad horizontal en los ratones de tipo salvaje pero no en el grupo de ratones mutantes (Fig. 1b), lo que confirma 14

ES 2 220 727 T3 los hallazgos anteriores. Además, una inyección provocada intravenosa de 4 mg/kg de cocaína no indujo ningún efecto evidente en los ratones defectivos. Por tanto, nuestros hallazgos sugieren que el receptor mGluR5 es esencial para la hiperactividad inducida por cocaína. 5

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Se sabe bien que la hiperactividad inducida por psicoestimulantes no refleja ningún efecto de recompensa de la cocaína, que es la principal causa de la adicción a drogas (Koob y col., 1998, Neuron, 21, 467-76). Para evaluar mejor este último efecto, hemos aplicado el procedimiento de la autoadministración de cocaína por vía intravenosa (IV) tanto a los ratones mutantes para el receptor mGluR5 como a los de tipo salvaje (Epping-Jordan y col., 1998, Brain Research, 784, 105). en primero lugar se adiestró a los animales con alimento para permitirles adquirir un comportamiento operante consistente en presionar una palanca activa en condiciones definidas. Como se muestra en la figura 2a, los animales mutantes y de tipo salvaje adquirieron con éxito y a la misma velocidad la tarea de ingesta de alimentos antes de la autoadministración de cocaína. Este fue un importante experimento de control, ya que se ha comunicado la existencia de algún deterioro en el aprendizaje en ratones (-/-) para el receptor mGluR5 (Lu y col., 1997, J. Neurosci. 17, 5196-5205). Mientras que los ratones de tipo salvaje se autoadministraban cocaína a 0,8 mg/kg de forma estable (es decir, tras 6 días), los ratones (-/-) para mGluR5 mostraron una extinción de la respuesta y dejaron de presionar ña palanca activa después de tres sesiones. Es más, los ratones defectivos para mGluR5 no se autoadministraron cocaína a ninguna de las dosis probadas (de 0,4 a 3,2 mg/kg/inyección) mientras que los ratones de tipo salvaje mostraron una curva dosis-respuesta estándar con una curva óptima de respuesta-dosis con un máximo a 0,8 mg/kg (Fig. 2b). los resultados del adiestramiento con alimento sugieren que la imposibilidad para adquirir la autoadministración de cocaína en los ratones (-/-) para mGñuR5 no se debe a una incapacidad para aprender la tarea de presionar la palanca operante. Los resultados de los experimentos de autoadministración de cocaína sugieren que las propiedades de la recompensa de la cocaína no existen en ratones que carecen del gen para el receptor mGluR5. Después, además de la respuesta de hiperactividad, el receptor mGluR5 también puede ser un componente esencial del procedimiento de recompensa inducido por la cocaína.

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En varios estudios se ha comunicado que el tratamiento con psicoestimulantes inducía una liberación de DA en el estriado ventral de roedores (Koob y col., 1998, supra). Además, se ha establecido una estrecha correlación entre la actividad locomotora y la liberación de DA en el mesoaccumbens en respuesta a los psicoestimulantes (Zocchi y col., 1998, supra). Dado que los ratones (-/-) para el receptor mGluR5 no mostraron ni respuesta locomotora ni un comportamiento de adicción a la cocaína, estudiamos el nivel de liberación de DA en el núcleo accumbens de los ratones de tipo salvaje y mutantes tras el tratamiento con cocaína (MD). Como se muestra en la figura 3, los experimentos de microdiálisis revelaron que los niveles de liberación de DA eran similares en el núcleo accumbens de los ratones tanto control como defectivos después de una inyección IP de 10 mg/kg de cocaína, lo que sugiere que la ausencia de mGluR5 no afecta a la fase presináptica de la DA mesoaccumbens ni a la función del transportador de DA (DAT), ya que ambas curvas muestran el mismo pico y la misma disminución de las concentraciones de DA (Fig. 3). Además, en estudios de historadiografía llevados a cabo en los dos genotipos se reveló que no existían diferencias en los niveles de unión de DA, lo que sugiere que no se producen cambios en la expresión de receptores de DA en los ratones mutantes (no se muestra). En estudios recientes se ha mostrado que la activación de los receptores mGluR en el núcleo accumbens aumentó, no solo la liberación de DA, sino también indujo la activación locomotora dependiente de DA (Attarian y Amatric, 1997, Eur. J. Neurosci., 9, 809; Kim y Vezina, 1997, J. Phar. Exp. Ther., 283, 962; Vezina y Kim, Neurosci. Behav. Rev., 23, 577). Se ha mostrado que este efecto se bloquea con el antagonista no selectivo de los mGluR del grupo I, α-metil-4-carboxfenilglicina (MCPG). Estos resultados sugieren la existencia de una interacción entre los receptores mGlu y la transmisión dopaminérgica. Dado que, como se ha comunicado en la presente, la ausencia de mGluR5 no afecta a la liberación de DA en el núcleo accumbens de ratones mutantes, el mGluR5 puede ejercer un control desde el lado postsináptico de la sinapsis en la actividad dopaminérgica. Por tanto, se ha mostrado que este receptor se localiza, como mGluR del grupo I, postsinápticamente (Romano y col., 1995, Comp. Neurol., 355, 3). Por otro lado, la interacción entre la liberación de DA descrita anteriormente podría estar mediada por mGluR de los grupos II o III, que se sabe que controlan la actividad sináptica desde el lado presináptico de la sinapsis. Las investigaciones se han centrado principalmente en la comprensión de la contribución de los sistemas dopaminérgico y serotoninérgico en la dependencia de drogas (Koob y col., 1998, supra). Sin embargo, estudios recientes con receptores de DA y el transportador de DA (DAT) de ratones defectivos aportaron resultados inesperados (véase Drago y col., 1998, Dev. Neurosci, 20, 2-3, para revisión). Los ratones mutantes en el receptor D2 tienen una actividad locomotora espontánea anómala, pero todavía muestran una respuesta locomotora a las inyecciones IP de opioides (Maldonado y col., 1997, Nature, 388). Además, cabe destacar que los ratones defectivos para el receptor D1 o el transportador DAT, en los cuales no se observó actividad locomotora tras la inyección de cocaína, también tenían un comportamiento espontáneo anómalo (Miner y col., 1995, Neuroreport, 6; Giros y col., 1996, Nature, 379). en contraste con esto, los ratones mutantes para mGluR5 no son hiperactivos de forma espontánea e incluso mostraron una ausencia de respuesta locomotora a la cocaína en ambos contextos C57Bl6 y 129Sv (Fig. 1). Por tanto, puede afirmarse sin ambigüedades que la cocaína no aumenta la actividad locomotora en ratones defectivos para mGluR5. El hecho de que los ratones mutantes para el gen de DAT, aunque hiperactivos, no se autoadministran cocaína, sugiere que la transmisión dopaminérgica puede no ser el efecto principal del procedimiento de recompensa inducido por la recompensa de la cocaína. (Rocha y col., 1998, Nature Neurosci. 1,2 ). En contraste con esto, los resultados presentados aquí que muestran que los ratones defectivos en mGluR5 no se autoadministran cocaína a ninguna de las dosis probadas, sugieren firmemente que el mGluR5 desempeña un papel fundamental en los mecanismos de 15

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recompensa. Dado que la mutación se lleva a cabo durante la embriogénesis del ratón, se pueden haber producido algunos cambios en el desarrollo neural que a su vez podrían tener consecuencias importantes en el inicio del proceso de la recompensa en la etapa adulta. Sin embargo, el hecho de que la liberación de DA no se ve afectada en el núcleo accumbens de ratones (-/-) en el mGluR5, como se muestra con estudios de microdiálisis, sugiere que la respuesta dopaminérgica, al menos a este nivel, se conserva en los mutantes. Debe destacarse que este resultado contradice la afirmación bien admitida según la cual DA elevada es una condición obligatoria para los efectos de recompensa de la cocaína (Koob y col., 1998, supra). Es posible que el receptor mGluR5 actúe de forma sinérgica con el sistema dopaminérgico y en el lado postsináptico de la neurona, para mediar los mecanismos de recompensa así como la respuesta de hiperactividad inducida por cocaína. Por tanto, recientemente se ha descrito la existencia de una actividad cooperadora entre los receptores de dopamina y los receptores metabotrópicos de glutamato en la corteza prefrontal de ratones (Otani y col., 199, J. Neurosci., 19, 9788-9802). Juntos con los resultados procedentes de otros estudios con ratones defectivos, nuestros datos destacan la importancia del glutamato como uno de los principales neurotransmisores en el abuso de drogas, y el mGluR5 es un elemento clave en el procedimiento de recompensa. En resumen, hemos mostrado que, aunque no tienen ningún fenotipo aparente, los ratones defectivos e el receptor mGluR5 mostraron una ausencia de respuesta locomotora a la inyección de cocaína. Además, los ratones (-/-) en mGluR5 no se autoadministraron cocaína a ninguna de las dosis probadas, mientras que los ratones (+/+) para el mGluR5 mostraron una curva estándar dosis-respuesta. por último, tras el tratamiento con cocaína, la dopamina(DA) se liberó de forma parecida en el núcleo accumbens de ratones de tipo salvaje y mutantes, lo que sugiere un efecto mediado por la transducción de la señal sobre el receptor mGluR5 en el sistema dopaminérgico. Nuestros resultados demuestran que, además de la dopamina, el glutamato, a través del mGluR5, desempeña un papel clave en la dependencia de psicoestimulantes. Ejemplo 3

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Autoadministración de d-anfetamina

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Todas las condiciones de enjaulamiento, adiestramiento, quirúrgicas y de prueba para los experimentos de la autoadministración de d-anfetamina eran idénticas a las usadas en los experimentos de la autoadministración de cocaína, descritas en el ejemplo 2 antes. Inicialmente se realizaron pruebas con ratones macho (-/-) para mGluR5 para la autoadministración de d-anfetamina (0,2 mg/kg/inyección) con un programa 2 de proporcionas fijas (PF) con un tiempo de espera de 20 segundos (TE20seg). los resultados se muestran en la figura 4. Todos los ratones probados no adquirieron la autoadministración a la dosis inicial. Los ratones también se probaron a dosis de 0,1, 0,05 y 0,0 (suero salino) mg/kg/inyección de d-anfetamina y mostraron una extinción casi completa de la respuesta a todas las dosis, incluido el suero salino en cinco sesiones. Como en los experimentos de autoadministración de cocaína, dado que los ratones (-/-) para mGluR5 no adquirieron la autoadministración estable de d-anfetamina, pueden volverse a adiestrar para que presionen la palanca para obtener líquido a criterio entre cada dosis de d-anfetamina. Este procedimiento se instauró de forma que los ratones (-/-) para mGluR5 tuvieran una tasa de respuesta distinta de cero durante el primer par de sesiones de acceso a cada dosis de d-anfetamina. La imposibilidad para adquirir la autoadministración de d-anfetamina en los ratones (-/-) para mGluR5 sugiere que el mGluR5 desempeña un papel esencial en las propiedades de recompensa de la d-anfetamina.

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ES 2 220 727 T3 REIVINDICACIONES

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1. Uso de un antagonista del receptor metabotrópico de glutamato 5 (mGluR5) en la fabricación de un medicamento para usar en un procedimiento de terapia de tolerancia o de dependencia. 2. Uso según la reivindicación 1 en el tratamiento de la dependencia del tabaco. 3. Uso según la reivindicación 1 en el tratamiento de tolerancia o dependencia.

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4. Uso según la reivindicación 1 en el tratamiento de la interrupción o el abandono de una droga. 5. Uso según la reivindicación 3 ó 4, en el que la droga es nicotina, cocaína, anfetaminas o drogas relacionadas con ellas, una benzodiazepina, un opiáceo o etanol.

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6. Uso según la reivindicación 3 ó 4, en el que la droga es una sustancia terapéutica. 7. Uso según la reivindicación 6, en el que la sustancia terapéutica es anfetamina o drogas relacionadas con la misma, una benzodiazepina o un opiáceo.

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8. Productos que contienen un antagonista del mGluR5 y una sustancia terapéutica como una preparación combinada para uso simultáneo, por separado o secuencial en el tratamiento de un trastorno para el que se usa dicha sustancia terapéutica, en el que el uso de la sustancia terapéutica en ausencia de dicho antagonista podría conducir a tolerancia a o dependencia de la sustancia terapéutica. 9. Uso de un producto identificado mediante un procedimiento de selección, que comprende: (a) poner en contacto un producto de prueba con el receptor mGluR5 en condiciones tales que en ausencia de la sustancia de prueba conduciría a la actividad de dicho mGluR5; y

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(b) determinar si el producto de prueba actúa como antagonista de la actividad del mGluR5; por tanto, determinar si el producto de prueba puede usarse en el tratamiento de tolerancia o dependencia, para la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de la tolerancia o dependencia. 10. Productos que contienen un producto identificado mediante un procedimiento de selección como se ha definido en la reivindicación 9, y una sustancia terapéutica en forma de una preparación combinada para su uso simultáneo, por separado o secuencial, en el tratamiento de un trastorno para el cual se usa dicha sustancia terapéutica, en el que el uso de la sustancia terapéutica en ausencia de dicho producto, podría llevar a la tolerancia a o la dependencia de la sustancia terapéutica. 11. Uso de un antagonista del receptor metabotrópico de glutamato 5 (mGluR5) en la fabricación de un medicamento para usar en el tratamiento de bulimia nerviosa, anorexia nerviosa, dependencia del sexo o trastornos obsesivocompulsivos.

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