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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 216 931

51 Int. Cl. : A23L 1/302

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A61K 31/205

ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 00951844 .0

86 Fecha de presentación: 21.07.2000

87 Número de publicación de la solicitud: 1196046

87 Fecha de publicación de la solicitud: 17.04.2002

54 Título: Composición para la prevención de la fatiga muscular y para la adaptación del músculo esquelético

al ejercicio extenuante. 30 Prioridad: 23.07.1999 IT RM990467

73 Titular/es: SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche

Riunite S.p.A. Viale Shakespeare, 47 00144 Roma, IT

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

72 Inventor/es: Cavazza, Claudio

01.11.2004

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Carpintero López, Francisco

ES 2 216 931 T3

01.11.2004

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 216 931 T3 DESCRIPCIÓN Composición para la prevención de la fatiga muscular y para la adaptación del músculo esquelético al ejercicio extenuante. 5

La presente invención se refiere a una composición para la prevención y tratamiento de deficiencias energéticas musculares, estados de astenia y fatiga muscular, estados de fatiga cardíaca y situaciones postinfarto, y para mejorar el rendimiento deportivo. 10

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En consecuencia, la composición puede tomar la forma y ejercer la acción de un suplemento dietético o de un medicamento real, dependiendo de la acción de soporte o preventiva, o de la acción estrictamente terapéutica, que se pretende que la composición ejerza en relación con los individuos particulares en los que se va a usar. Más en concreto, la presente invención se refiere a una composición de combinación administrable por vía oral, parenteral, rectal o transdérmica, y que comprende como ingredientes caracterizadores: (a) al menos una carnitina seleccionada del grupo formado por L-carnitina, acetil L-carnitina, propionil L-carnitina, butiril L-carnitina, valeril L-carnitina e isovaleril L-carnitina, o una sal farmacológicamente aceptable de las mismas, y

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(b) fosfato de creatinol o una sal farmacológicamente aceptable del mismo.

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Las composiciones que comprenden carnitinas y creatina o fosfocreatina ya se conocen. El documento WO 98/43.499 (Sigma-Tau) desvela un suplemento nutricional para facilitar la adaptación del músculo esquelético en individuos que participan en programas de ejercicio extenuante y para contrarrestar la aparición de fatiga y el cansancio en individuos asténicos, y que comprende una combinación de L-carnitina, acetil L-carnitina y propionil L-carnitina como ingredientes activos básicos, y que también puede comprender creatina y/o fosfocreatina como componentes aditivos opcionales.

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La patente de EE.UU. 4.376.117 (Simes) desvela la sal magnésica de O-fosfato de creatinol, que es útil en el tratamiento y prevención del infarto de miocardio.

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Tanto la carnitina como el fosfato de creatinol [O-fosfato de 1-(2-hidroxietil)-1-metilguanidina] se conocen bien por sus importantes efectos metabólicos y farmacológicos que han dado lugar a varios hallazgos farmacológicos y clínicos positivos. Se sabe que las carnitinas tienen una función importante en los procesos de beta-oxidación de ácidos grasos en la formación de ATP. También están dotadas de una importante actividad antioxidante, como lo demuestra su efecto protector frente a la peroxidación de los lípidos de las membranas fosfolipídicas celulares y frente al estrés oxidativo inducido a nivel de las células endoteliales y miocárdicas. Estos efectos bioquímicos de las carnitinas se reflejan en los resultados favorables que se obtienen en la práctica clínica con su uso en el tratamiento de varias formas de aterosclerosis, isquemia miocárdica, vasculopatías periféricas y diabetes. El fosfato de creatinol, que es un compuesto estructuralmente similar al fosfato de creatina, del que difiere en su mayor estabilidad y en varios aspectos metabólicos y farmacodinámicos, pertenece al grupo de fosfágenos que tienen una función fundamental en los procesos energéticos musculares. De hecho, se sabe que el fosfato de creatina está muy implicado en los procesos responsables de la síntesis de ATP en el músculo, que está reducida durante el ejercicio muscular. La creatina, el fosfato de creatina, la creatina fosfocinasa, ATP y ADP son estructuras bioquímicas fundamentales responsables de la función muscular, particularmente en condiciones anaerobias. Sin embargo, creatina, por encima de otros, es el compuesto esencial que condiciona las demás etapas, y su presencia tiene una importancia fundamental para conseguir la fosforilación y los procesos energéticos relacionados con ATP asociados. De hecho, su administración da lugar a un aumento de su concentración muscular y a un aumento del fosfato de creatina.

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Sin embargo, para obtener estos efectos en seres humanos es necesaria la administración de dosis elevadas de creatina, hasta 20 g al día y más, con los consiguientes efectos adversos, particularmente a nivel renal. Aun cuando sólo aproximadamente la cuarta parte de la creatina que se administra se puede transformar en fosfato de creatina, la administración de este último no es una opción práctica debido a su inestabilidad y a la dificultad de la administración oral. Por lo tanto, parecería tener mucho interés suministrar otro derivado portador de fósforo que perteneciera al grupo de fosfatos orgánicos que estuviera dotado de una gran estabilidad y de una excelente tolerabilidad, y que también se pudiera administrar por vía oral, como fosfato de creatinol, cuya administración, incluso a dosis bajas, induce un aumento sustancial de la creatina muscular, y la consiguiente formación de fosfato de creatina. Su administración produce aumento de la fuerza muscular en seres humanos, que también es marcada en ancianos, así como la desaparición de la astenia y la debilidad muscular en individuos convalecientes y la restauración de la eficiencia cardíaca en individuos que han sufrido un infarto. Sin embargo, y también con vista a su acción sobre la actividad muscular, son potencialmente incluso más intere2

ES 2 216 931 T3 santes los resultados de experimentos que indican su capacidad de estabilizar las membranas celulares, que pueden ser más resistentes al ataque por especies de oxígeno reactivas (ERO). 5

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Puesto que, como es sabido, uno de los efectos que el ejercicio muscular forzado puede inducir a nivel muscular son lesiones de las propias fibras musculares relacionadas con toxicidad por oxígeno y con los productos de la peroxidación lipídica, uno de los efectos favorables del fosfato de creatinol consiste en su capacidad de proteger la musculatura de las lesiones producidas por ERO. Sorprendentemente, ahora se ha encontrado que una composición de combinación que comprende como componentes caracterizadores: (a) al menos una carnitina seleccionada del grupo formado por L-carnitina, acetil L-carnitina, propionil L-carnitina, butiril L-carnitina, valeril L-carnitina e isovaleril L-carnitina, o una sal farmacológicamente aceptable de las mismas, y

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(b) fosfato de creatinol o una sal farmacológicamente aceptable del mismo,

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es extremadamente efectiva para la prevención y tratamiento de las deficiencias energéticas musculares, estados de astenia y fatiga muscular, estados de fatiga cardíaca y situaciones postinfarto, y para mejorar el rendimiento deportivo, debido al potente e inesperado efecto sinérgico que ejercen sus componentes. Pruebas toxicológicas

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Tanto las carnitinas como el fosfato de creatinol son productos conocidos por su baja toxicidad y buena tolerabilidad. En pruebas realizadas en ratas, se administraron por vía intraperitoneal dosis de L-carnitina y de fosfato de creatinol en combinación, correspondientes a 250 mg/kg de cada compuesto, sin que apareciera ningún signo de toxicidad. Del mismo modo, no se detectaron signos de toxicidad cuando se administraron 750 mg/kg de L-carnitina por vía oral en combinación con 750 mg/kg de fosfato de creatinol. Incluso la administración oral prolongada a ratas durante un mes de 200 mg/kg de L-carnitina más 200 mg/kg de fosfato de creatinol no produjo ninguna reacción de intolerancia tóxica. Los hemogramas completos y las pruebas bioquímicas que se realizaron al acabar el tratamiento tampoco pudieron mostrar ninguna anomalía digna de mención en comparación con los controles. En la autopsia ninguno de los principales órganos mostró ningún signo de agotamiento. Las investigaciones histológicas e histoquímicas confirmaron estos hallazgos, y los resultados son comparables a los que se obtuvieron en animales controles. Pruebas de fatiga muscular

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Se usó el método que describió Zheng (Zheng R.L., Acta Pharmacol. Sinica, 14, 47, 1993) para esta prueba a fin de observar si la administración de L-carnitina o de fosfato de creatinol o de los dos productos en combinación podía incrementar el tiempo de reacción en animales tratados en comparación con los controles.

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En esta prueba, diferentes grupos de ratones recibieron dosis orales diarias de 200 mg/kg de L-carnitina o 200 mg/kg de fosfato de creatinol o de los dos compuestos en combinación en el período de 6 días que precedió a la prueba. Se sumergió a los animales en un tanque lleno de agua y se midió el tiempo de resistencia a la natación.

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Tanto L-carnitina como el fosfato de creatinol incrementaron el tiempo de resistencia a la natación, pero se observó el efecto máximo en ratones tratados con la combinación de L-carnitina más fosfato de creatinol. De hecho, en estos últimos animales el tiempo de resistencia a la natación fue significativamente mayor que en los controles, lo que confirma el efecto sinérgico que ejercen los componentes de la composición (véase la Tabla 1). TABLA 1 Prueba de fatiga muscular

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Tratamiento

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Tiempo de natación (min)

Controles

93 ± 8

L-carnitina

118 ± 14

Fosfato de creatinol

124 ± 11

L-carnitina + fosfato de creatinol

191 ± 19

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ES 2 216 931 T3 Prueba de ejercicio muscular forzado

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Como se sabe, el ejercicio muscular forzado puede producir lesiones de tipo estructural e inflamatorio a nivel de las fibras musculares, debido al aumento de consumo de oxígeno y a la producción de especies reactivas del oxígeno (ERO). Se puede obtener un marcador del nivel de peroxidación lipídica inducida por ERO en el músculo a partir de la concentración muscular de malonildialdehído (MDA). Para esta prueba se usó el método descrito por Husain (Husain K., Pathophysiology, 4, 69, 1997) según la modificación de Li (Li J.X, Acta Pharmacol. Sinica, 20, 126, 1999), que consiste esencialmente en examinar a las ratas en una cinta sin fin a una velocidad controlada de la cinta y con una inclinación prefijada. De esta manera se hizo correr a las ratas a una velocidad de la cinta de 28 m/min y con una inclinación de aproximadamente 5º. El agotamiento de los animales control sometidos al ejercicio tuvo lugar después de aproximadamente 90 minutos. Se realizó la prueba en ratas que habían recibido un tratamiento oral los 6 días previos a la prueba con 200 mg/kg de L-carnitina o con 200 mg/kg de fosfato de creatinol o con los dos compuestos en combinación.

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Se sacrificó a los animales cinco y treinta minutos, respectivamente, después del final de la prueba, y se tomaron muestras de músculo gastrocnemio para medir el contenido de malonildialdehído (MDA) usando la reacción con ácido tiobarbitúrico según el método descrito por Ohkawa (Ohkawa H., Anal. Biochem., 95, 351, 1979). 20

En la Tabla 2 se presentan los resultados de esta prueba, que muestran que la combinación de L-carnitina más fosfato de creatinol induce una reducción muy significativa e inesperada de la concentración de MDA en las muestras musculares. Esto demuestra el inesperado efecto sinérgico de L-carnitina y fosfato de creatinol para proteger al músculo frente a las lesiones inducidas por las especies de oxígeno reactivas (ERO) que se producen en el transcurso del ejercicio muscular forzado.

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TABLA 2 Prueba de ejercicio muscular forzado 30

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Tratamiento

Contenido de MDA del músculo (nmol.g−1 ) Después de 5 min

Después de 30 min

Controles

240 ± 4

236 ± 10

L-carnitina

218 ± 11

216 ± 14

Fosfato de creatinol

206 ± 16

209 ± 12

L-carnitina + fosfato de creatinol

163 ± 14

169 ± 19

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Pruebas de contenido de ATP del músculo papilar de conejo después de hipoxia 45

Se puede inducir una reducción del contenido muscular de ATP sometiendo a hipoxia secciones de músculo papilar de conejo. La presencia en el líquido de perfusión de sustancias que interactúan con el metabolismo energético muscular puede reducir la pérdida del contenido de ATP del músculo inducida por la hipoxia. 50

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Para esta prueba se usó un grupo de conejos de Nueva Zelanda. Los conejos recibieron la administración intravenosa de 100 mg/kg de L-carnitina o de 100 mg de fosfato de creatinol o de los dos compuestos en combinación todos los días durante el período de tres días que precedió a la prueba. Después del tercer día de tratamiento se sacrificó a todos los animales, incluyendo los animales control. Después de extraer los corazones, se aislaron secciones de músculo papilar que medían 1 mm de diámetro y 4-5 cm de grosor. Se perfundieron estas secciones tisulares en un baño termostático con una solución saturada con O2 al 100%. Se indujo hipoxia al introducir N2 al 100% en lugar de O2 , y se mantuvo durante 90 minutos. Posteriormente se mantuvieron los tejidos en condiciones de perfusión normal durante otro período de 90 minutos. Se estimó el contenido de ATP del músculo papilar según el método descrito por Strehler (Strehler B.L., Methods in Enzymology III, N.Y. Acad. Press, 871, 1957). En la Tabla 3 se presentan los resultados de esta prueba, que muestran que la combinación de L-carnitina más fosfato de creatinol ofrece de manera inesperada un grado de protección sorprendentemente mayor frente a la reducción de ATP en el músculo papilar sometido a hipoxia que L-carnitina y fosfato de creatinol solos, demostrando así el efecto sinérgico de los dos compuestos presentes en la composición.

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ES 2 216 931 T3 TABLA 3 Prueba del contenido de ATP del músculo papilar de conejo 5

Tratamiento

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Concentración de ATP (mol/g de tejido) Antes de la hipoxia

Después de la hipoxia

Controles

1,49 ± 0,29

0,39 ± 0,046

L-carnitina

1,53 ± 0,15

0,48 ± 0,036

Fosfato de creatinol

1,55 ± 0,31

0,61 ± 0,045

L-carnitina + fosfato de creatinol

1,60 ± 0,28

1,18 ± 0,051

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A continuación se presentan ejemplos ilustrativos y no limitantes de composiciones según la invención. 20

1) 2) 25

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L-carnitina Fosfato de creatinol Acetil L-carnitina Fosfato de creatinol Mezcla de carnitinas (L carnitina 100 mg, acetil L-carnitina 100 mg, propionil L-carnitina 100 mg) Fosfato de creatinol L-carnitina Fosfato de creatinol Creatina Taurina Inosina Coenzima Q10 Selenio metionina Vitamina E Beta-caroteno L-carnitina Fosfato de creatinol Fosfocreatina Creatina Inosina Vitamina C Vitamina E Beta-caroteno Coenzima Q10 L-carnitina Fosfato de creatinol Fructosa-1,6-difosfato Maltodextrina Magnesio Selenio metionina Cinc Manganeso Coenzima Q10 L-carnitina Fosfato de creatinol Creatina Coenzima Q10 Vitamina E 5

400 mg 400 mg 300 mg 300 mg 300 mg

300 mg 200 mg 200 mg 100 mg 50 mg 50 mg 25 mg 50 µg 5 mg 5 mg 100 mg 100 mg 100 mg 100 mg 100 mg 50 mg 5 mg 5 mg 25 mg 200 mg 200 mg 200 mg 200 mg 10 mg 50 µg 10 mg 1 mg 25 mg 500 mg 500 mg 500 mg 50 mg 50 mg

ES 2 216 931 T3 Vitamina C Beta-caroteno Magnesio 5

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100 mg 5 mg 10 mg

Lo que se quiere decir con sal farmacológicamente aceptable de L-carnitina o de alcanoíl L-carnitina es cualquier sal de estos ingredientes activos con un ácido que no da lugar a efectos tóxicos o adversos indeseados. Esas sales les son bien conocidas a los expertos en farmacia. Son ejemplos de sales adecuadas, aunque no éstas exclusivamente: cloruro; bromuro; yoduro; aspartato, aspartato ácido; citrato, citrato ácido; tartrato; fosfato, fosfato ácido; fumarato, fumarato ácido; glicerofosfato; glucosa fosfato; lactato; maleato, maleato ácido; orotato; oxalato, oxalato ácido; sulfato, sulfato ácido; tricloroacetato; trifluoroacetato y metanosulfonato. En Int. J. of Pharm. 33, (1986), 201-217 se da una lista de sales farmacológicamente aceptables aprobada por la FDA.

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ES 2 216 931 T3 REIVINDICACIONES

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1. Una composición de combinación administrable por vía oral, parenteral, rectal o transdérmica, que comprende los siguientes ingredientes: (a) al menos una carnitina seleccionada del grupo formado por L-carnitina, acetil L-carnitina, propionil L-carnitina, butiril L-carnitina, valeril L-carnitina e isovaleril L-carnitina, o una sal farmacológicamente aceptable de las mismas, y

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(b) fosfato de creatinol o una sal farmacológicamente aceptable del mismo. 2. La composición de la reivindicación 1, en la que la razón ponderal (a):(b) es de 1:0,1 a 1:1.

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3. La composición de la reivindicación 1 ó 2, en la que la sal farmacológicamente aceptable del componente (a) se selecciona del grupo que comprende: cloruro; bromuro; yoduro; aspartato, aspartato ácido; citrato, citrato ácido; tartrato; fosfato, fosfato ácido; fumarato, fumarato ácido; glicerofosfato; glucosa fosfato; lactato; maleato, maleato ácido; orotato; oxalato ácido; sulfato, sulfato ácido; tricloroacetato; trifluoroacetato y metanosulfonato. 4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que además comprende vitaminas, coenzimas, sustancias minerales, antioxidantes, azúcares, aminoácidos y proteínas. 5. El uso de la composición de la reivindicación 1 para preparar un suplemento dietético para la prevención de deficiencias energéticas musculares, estados de astenia y fatiga muscular, estados de fatiga cardíaca y situaciones postinfarto, y para mejorar el rendimiento deportivo. 6. El uso de la composición de la reivindicación 1 para preparar un medicamento para el tratamiento terapéutico de deficiencias energéticas musculares, estados de astenia y fatiga muscular, estados de fatiga cardíaca y situaciones postinfarto.

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