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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 223 505

51 Int. Cl. : A23K 1/18

7

ESPAÑA

12

TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 00922720 .8

86 Fecha de presentación: 21.04.2000

87 Número de publicación de la solicitud: 1171003

87 Fecha de publicación de la solicitud: 16.01.2002

54 Título: Alimento completo para larvas de peces y procedimiento para su preparación.

30 Prioridad: 21.04.1999 FR 99 05049

73 Titular/es: INSTITUT NATIONAL DE LA

RECHERCHE AGRONOMIQUE (INRA) 147, rue de l’Université 75341 Paris Cédex 07, FR IFREMER INSTITUT FRANCAIS DE RECHERCHE POUR L’EXPLOITATION DE LA MER 45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

01.03.2005

72 Inventor/es: Zambonino, José;

Cahu, Chantal; Quazuguel, Patrick y Bergot, Pierre

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Curell Suñol, Marcelino

ES 2 223 505 T3

01.03.2005

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 223 505 T3 DESCRIPCIÓN Alimento completo para larvas de peces y procedimiento para su preparación. 5

La presente invención se refiere a una composición de alimento completo para larvas de peces, así como a su procedimiento de preparación. Actualmente, la producción de alevines de peces, y en particular de peces marinos, comprende obligatoriamente una fase de alimentación por unas presas vivas, tales como las rotíferas y las Artemia.

10

La duración de utilización de las presas vivas en el curso de un ciclo de producción de alevines en vivero varía según las especies de peces marinos. Esta duración es generalmente de 40 a 50 días y puede alcanzar unos sesenta días para las especies de peces criados en Europa. 15

La utilización de un alimento de sustitución de las presas vivas, llamado alimento de destete, sólo interviene ulteriormente, progresivamente más allá de cuarenta días después de la eclosión. La utilización de presas vivas, en particular de Artemia, en la alimentación de los alevines en el seno de los viveros presentan numerosos inconvenientes.

20

La necesidad de recurrir a una estructura de cría secundaria a fin de producir las presas vivas destinadas a la alimentación de los alevines representa un primer inconveniente a la vez industrial y económico. 25

30

En segundo lugar, la calidad de las presas vivas y las posibilidades de aprovisionamiento de presas vivas son aleatorias y muy variables según los años. No es necesario decir que la calidad de las presas vivas tiene consecuencias directas sobre el nivel de supervivencia y de crecimiento de los alevines alimentados con estas últimas. Se ha determinado así que la utilización de un alimento de substitución de las presas vivas podría presentar numerosas ventajas, en razón en particular de una gran facilidad de conservación y de almacenado, de una mayor reproductibilidad en la calidad de la aportación alimenticia de los alevines, y en consecuencia una mayor regularidad de los resultados cuantitativos y cualitativos cuando tiene lugar la cría de las larvas de peces. Algunas tentativas de realización de composiciones alimenticias utilizadas como sustitutos parciales o totales de las presas vivas han sido descritas en el estado de la técnica.

35

La solicitud de patente francesa publicada con el nº 2 572 625 describe una composición alimenticia para larvas de peces destinada a sustituir parcialmente las presas vivas. La misma comprende polvo de yema de huevo secada en mezcla con un lípido líquido a temperatura ambiente. 40

45

50

55

Otros sustitutos alimenticios se describen en un primer artículo de CAHU et al (1998, Aquaculture, vol. 169, páginas 1-7), que compara tres sustitutos alimenticios desde el punto de vista de su aptitud para asegurar la supervivencia y el crecimiento de dos tipos de peces: la lubina y la carpa. Los resultados muestran que la composición de sustituto que presenta las mejores propiedades en cuanto a nivel de supervivencia y de crecimiento de los alevines posee una aportación proteínica que comprende, a partes iguales, levadura en polvo (Protibel) y un hidrolizado de proteínas de pescado (respectivamente 40% en peso de materia seca de la composición), lecitina de soja a razón de 5% en peso de la materia seca, y de una aportación de lípidos en forma de 2% en peso de aceite de pescado. Según los autores de este artículo, aunque el sustituto alimenticio en cuestión sea el mejor de los tres sustitutos ensayados, estas propiedades nutritivas no son bastante satisfactorias para prever utilizarlo reemplazando las presas vivas. Otro artículo de CAHU et al. (1999, Aquaculture, vol. 171, páginas 109-119) describe cuatro sustitutos alimenticios para alevines, designados respectivamente HO, H19, H38 y H58. Los autores proponen aportar una parte de las proteínas no solamente en forma de harina de pescado, sino también en forma de una preparación de hidrolizado de proteínas de pescado a razón de 19%, 38,5% y 58% en peso de materia seca respectivamente de los sustitutos H19, H38 y H58.

60

Estos sustitutos alimenticios han sido ensayados exclusivamente sobre unas larvas de lubina que han sido alimentadas con la ayuda de la una o la otra de estas cuatro composiciones desde el quinto día siguiente a la apertura de la boca (día 10 a contar de la eclosión). 65

Los resultados experimentales muestran que la preparación H19 posee las mejores cualidades nutritivas, tanto desde el punto de vista del porcentaje de supervivencia de las larvas como desde el punto de vista de su crecimiento y de su calidad (porcentaje de malformación ósea y madurez de las larvas). La composición del sustituto H19 comprende en particular, expresado en porcentaje en peso de materia seca, 58% de harina de pescado, 19% de concentrado de 2

ES 2 223 505 T3 proteína soluble de pescado, 5% de lecitina de soja, 4% de aceite de pescado, 8% de un aditivo vitamínico así como 5% de aditivo mineral. 5

10

15

Este artículo ha establecido que el contenido óptimo de concentrado soluble de proteína de pescado, el único parámetro variable de las diferentes composiciones del sustituto alimenticio ensayadas en este artículo, era de 19%. Los autores han concluido que la incorporación del hidrolizado de proteínas de pescado en esta proporción precisa es capaz de incrementar la calidad de las larvas, estimada por la observación del porcentaje de malformaciones del esqueleto. Se ha encontrado ahora según la invención, que el contenido de fosfolípidos de composiciones destinadas a la alimentación de larvas de peces, en particular de peces marinos, es una característica esencial con respecto a las cualidades nutritivas de dichas composiciones, y muy particularmente en lo que concierne a su capacidad de mantener un alto porcentaje de supervivencia en las larvas de peces, para asegurar a estas larvas un alto porcentaje de crecimiento, y para permitir la obtención de una población de alevines de excelente calidad, que presentan un porcentaje particularmente bajo de malformación esquelética y un alto grado de madurez fisiológica. La invención tiene por objeto una composición según la reivindicación 1.

20

25

Según la invención, se ha demostrado que una aportación de fosfolípidos más elevada que en las composiciones del estado de la técnica es esencial para realizar un alimento completo que da unos porcentajes de supervivencia y de crecimiento de las larvas equivalentes o superiores a los obtenidos con unas presas vivas como las rotíferas y las Artemia. Los fosfolípidos están presentes en el vitelio del huevo que es utilizado por el embrión de pez para su desarrollo hasta que sea capaz de ingerir alimentos exógenos. Están también presentes en las presas vivas. Los fosfolípidos deben también ser aportados en cantidad suficiente en los alimentos completos para las larvas de peces mientras que dicha aportación no es obligatoria en los alimentos para los peces adultos. El contenido de fosfolípidos del alimento completo según la invención está comprendido entre 8,5 y 25% en peso de la materia seca del alimento, preferentemente entre 10 y 20%.

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35

40

45

50

55

60

65

Según un aspecto de la invención, un contenido final superior a 8,5% de fosfolípidos totales en el alimento está garantizado por la adición de por lo menos 6% de fosfolípidos de origen vegetal, que se añaden a los fosfolípidos eventualmente aportados por los otros ingredientes. Se pueden utilizar unas lecitinas de origen vegetal, como la lecitina de soja, o la lecitina de otras plantas oleaginosas tales como el girasol o la colza. Se precisa que el término de lecitina designa unas mezclas lipídicas en las cuales los fosfolípidos representan más de 50% de los lípidos totales. Las clases de fosfolípidos más abundantes en las lecitinas son la fosfatidilcolina, la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilinositol. Las lecitinas comerciales pueden presentarse con una riqueza variable de fosfolípidos, en particular en forma desaceitada (aproximadamente 90% de fosfolípidos) o no desaceitada (aproximadamente 50% de fosfolípidos). Así, la adición de 6% de fosfolípidos puede ser realizada tanto por la adición de 7% de lecitina con 90% de fosfolípidos como por la adición de 12% de lecitina con 50% de fosfolípidos. Las lecitinas vegetales contienen unos ácidos grasos con C18 de las series de ácidos grasos indispensables n-3 y n6 (ácido linoleico: 18:2n-6 y ácido linolénico: 18:3n-3) pero están desprovistos de ácidos grasos poliinsaturados con C20 y C22, en particular el ácido araquidónico (20:4n-6), el ácido eicosapentaenoico (EPA, 20:5n-3) y docosahexaenoico (DHA, 22:6n-3). Esto no limita la utilización de las lecitinas puesto que estos últimos ácidos grasos pueden ser aportados, independientemente de lecitinas añadidas, por los otros ingredientes del alimento. Esta última aportación puede realizarse en forma de triglicéridos o de fosfolípidos, utilizando en particular unos productos que provienen de los pescados como los aceites de pescado o las harinas de pescado. La composición para alimento completo según la invención contiene una aportación de lípidos neutros, que provienen de la harina de pescado y que contienen unos ácidos grasos largos poliinsaturados, en particular de la serie (n-3). Los ácidos grasos de la serie (n-3) representan 2,5% en peso de la materia seca en el alimento según la invención. Teniendo en cuenta esta aportación complementaria posible de ácidos grasos, la composición de ácidos grasos de las lecitinas no es crítica y pueden ser empleadas unas lecitinas modificadas como unas lecitinas hidrogenadas. Según otro aspecto de la invención, el contenido de lípidos totales de alimento es superior a 25% en peso de la materia seca. La presencia de una cantidad suficiente de fosfolípidos en el alimento, además de su interés específico, mejora la utilización digestiva de los otros constituyentes lipídicos del alimento y en especial la de los lípidos neutros y en particular la de los triglicéridos. Una de las ventajas de incrementar el contenido de lípidos de los alimentos es aumentar su contenido de energía digestible para la cobertura de las necesidades energéticas de las larvas. Se ha demostrado según la invención que una composición de alimento que contiene, según un aspecto de la invención, 17% de lecitina de soja no desaceitada (% de la materia seca del alimento) y que presenta un contenido de fosfolípidos totales de 12% (que corresponden a aproximadamente 9% que provienen de la lecitina y 3% que provienen de los otros ingredientes del alimento) aseguraría unos porcentajes de supervivencia y de crecimiento muy superiores a los que se obtenían en el estado de la técnica con el sustituto H19 citado anteriormente. 3

ES 2 223 505 T3 Además, se ha demostrado que los resultados de supervivencia y de crecimiento obtenidos con un alimento según la invención son equivalentes o superiores a los que se obtenían con unas presas vivas, es decir con unas rotíferas durante los primeros días de alimentación y con las Artemia en los días siguientes. 5

Según otro aspecto, el contenido de proteínas de pescado no hidrolizadas de la composición para alimento completo según la invención es superior a 50% en peso de la materia seca.

10

La aportación de proteínas no hidrolizadas está preferentemente constituida por harina de pescado que entra en la composición para alimento completo a razón de 45 a 60% en peso de la materia seca y es de manera totalmente preferida de aproximadamente 56% en peso de materia seca.

15

Según otro aspecto de la invención, la composición para alimento completo comprende además un contenido de proteínas hidrolizadas, preferentemente en forma de un concentrado proteínico soluble de pescado, comprendido entre 8 y 25%, preferentemente entre 10 y 22% y de manera totalmente preferida de aproximadamente 14% en peso de la materia seca de la composición. Ventajosamente, una composición para la preparación de un alimento completo para larvas de peces según la invención comprenderá además un aditivo vitamínico.

20

Se puede por ejemplo utilizar una mezcla vitamínica cuya composición en vitaminas, expresada por kilo de mezcla vitamínica, es la siguiente: Acetato de retinol (1 g);

25

Colecalciferol (2,5 mg); Acetato de all-rac-α-tocoferol (10 g); Menadiona (1 g);

30

Tiamina (1 g); Riboflavina (0,4 g); 35

Pantotenato de D-calcio (2 g); Piridoxina HCL (0,3 g); Cianocobalamina (1 g);

40

Niacina (1 g); Cloruro de colina (200 g); 45

Ácido ascórbico (20 g); Ácido fólico (0,1 g);

50

Biotina (1 g); y Mesoinositol (30 g).

55

La composición de alimento completo para larvas de peces según la invención puede además comprender un aditivo mineral. Preferentemente, dicho aditivo mineral está constituido por una mezcla mineral de constitución siguiente, expresada por kilogramo de mezcla mineral:

60

65

KCl (90 g); Kl (40 mg); CaHPO4 .2H2 O (500 g); NaCl (40 g); CuSO4 5H2 O (3 g); ZnSO4 .7H2 O (4 g); CoSO4 .7H2 O (20 mg); FeSO4 .7H2 O (20 g); MnSO4 .H2 O (3 g); CaCO3 (215 g); MgSO4 .7H2 O (124 g) y NaF (1 g). La aportación de vitaminas y de compuestos minerales de la composición para alimento completo según la invención puede ser cualitativa y cuantitativamente adaptada en función de los contenidos finales de vitaminas y minerales que resultan de la aportación de las otras materias primas utilizadas en la preparación de esta composición, como por ejemplo el contenido de vitaminas y minerales de las fuentes de proteínas, lípidos y fosfolípidos.

4

ES 2 223 505 T3 Ventajosamente, la composición para alimento completo según la invención puede también comprender pequeñas cantidades de factores de apetencia tales como la betaína. 5

De manera preferida, dichos factores de apetencia serán utilizados en las composiciones según la invención a razón de 0,5 a 3% en peso de la materia seca, por ejemplo a razón de aproximadamente 1% en peso de materia seca. Además, el contenido de agua final de la composición de alimento completo para larvas de peces según la invención no es superior a 14% en peso de la composición, y está preferentemente comprendido entre 7 y 10% en peso y es de manera totalmente preferida de aproximadamente 8% en peso de la composición final.

10

De manera preferida, una composición para alimento completo según la invención tendrá la composición siguiente, expresada en peso de materia seca: TABLA 1 15

Ingredientes

20

25

% de materia seca

Harina de pescado Concentrado proteínico soluble de pescado Lecitina de soja Mezcla vitamínica Mezcla mineral Betaína

56 14 17 8 4 1

Según otro aspecto de la invención, dicha composición tendrá la constitución siguiente, expresada en peso de materia seca: 30

35

Proteínas totales (N x 6,25): Fosfolípidos totales: Lípidos totales: Cenizas:

56% 12% 26% 14%

La composición de alimento completo para las larvas de peces según la invención puede ser ventajosamente utilizada para preparar un alimento compuesto completo para la alimentación de larvas de peces presentado en forma de gránulos de granulometría definida. 40

Preferentemente, el tamaño de los gránulos de alimento compuesto completo es tal que la mayor dimensión es inferior a 600 µm. El tamaño de los gránulos puede ser ajustado para preparar un elemento compuesto completo conveniente para unas larvas de peces de edades diferentes o también para unas larvas de peces de especies que tengan tamaños diferentes. 45

Así, según un primer modo de realización del alimento compuesto completo para larvas de peces según la invención, el tamaño de los gránulos está comprendido entre 400 y 600 µm. 50

Según un segundo aspecto del alimento compuesto completo según la invención, el tamaño de los gránulos está comprendido entre 200 y 400 µm. Según un tercer aspecto del alimento compuesto completo para larvas de peces, el tamaño de los gránulos está comprendido entre 120 y 200 µm.

55

Finalmente, según un cuarto aspecto del alimento compuesto completo para larvas de peces según la invención, el tamaño de los gránulos es inferior a 120 µm. El alimento compuesto completo para larvas de peces descrito anteriormente, posee unas cualidades nutritivas que lo destinan a un uso extendido, es decir a la vez para nutrir unos peces de agua dulce y unos peces marinos.

60

Preferentemente, el alimento compuesto completo para larvas de peces según la invención está destinado a la alimentación de los peces de agua de mar cualquiera que sea el origen. Está en efecto no solamente adaptado para la alimentación de los peces europeos tales como las lubinas, las doradas o también el rodaballo, sino también para la alimentación de los peces exóticos de cría tales como el lates o también la ombrina. 65

El alimento compuesto completo para larvas de peces según la invención tiene unas cualidades nutritivas tales que permite un porcentaje de supervivencia así como un porcentaje de crecimiento de las larvas aún nunca jamás 5

ES 2 223 505 T3 alcanzados así como la producción de larvas que tienen un porcentaje de malformaciones morfológicas particularmente bajo y un grado de madurez excepcional, comparado con los sustitutos alimenticios descritos en el estado de la técnica. 5

La invención tiene además por objeto un procedimiento para la preparación de un alimento compuesto completo para larvas de peces, estando dicho procedimiento caracterizado porque comprende unas etapas siguientes: a) obtención de una pasta por mezcla de agua y de por lo menos tres materias primas en las proporciones siguientes: (i) harina de pescado en proporción de 50 a 65% en peso de la mezcla final;

10

(ii) concentrado proteínico soluble de pescado en proporción de 8 a 25% en peso de la mezcla final; (iii) lecitina de soja en proporciones de 7 a 25% en peso de la mezcla final; 15

b) granulación por vía húmeda de la pasta así obtenida en forma de filamentos; c) congelación de los filamentos de pasta a baja temperatura, preferentemente a una temperatura inferior a -80ºC; d) trituración y/o molido de los filamentos de pasta congelada en la etapa c);

20

e) tamizado de los gránulos obtenidos cuando tiene lugar la etapa de trituración.

25

La etapa de molido y de trituración de los filamentos extruídos es particularmente facilitada debido a la etapa de congelación previa. En efecto, la pasta inicial que resulta de la mezcla de materias primas mezcladas con agua posee una concentración importante de lípidos, lo que tiene por efecto colmatar los trituradores y los tamices utilizados para fabricar las partículas de alimentos. Por el contrario, la congelación previa permite presentar la composición inicial en una forma sólida y fiable particularmente adaptada a las etapas de trituración y después tamizado.

30

El procedimiento según la invención está además caracterizado porque se añade agua en el momento de la mezcla inicial de la etapa a), a razón de 10 a 15% del peso de la mezcla. Esta etapa en particular tiene por función permitir el pegado de las partículas de los diferentes constituyentes de materia prima para la obtención de una pasta homogénea al final de la etapa inicial de mezcla. 35

El procedimiento según la invención comprende además ventajosamente una etapa de secado de los filamentos de pasta obtenidos después de etapa b) de granulación a fin de ajustar el contenido de agua de la composición de los filamentos a un valor inferior a 14%, preferentemente a un valor comprendido entre 7 y 10% y de manera totalmente preferida a un valor de aproximadamente 8%. 40

La etapa de secado puede ser ventajosamente realizada a la temperatura de 50ºC durante 20 minutos. La etapa de secado precede a la etapa de congelación; la misma es preferentemente realizada a continuación de la etapa b) de granulación por vía húmeda. 45

La invención se refiere también a un procedimiento de cría de larvas de peces, caracterizado porque las larvas son alimentadas a razón de 1 a 4 g por día y por 2500 larvas, con el alimento completo anteriormente descrito. La invención será además ilustrada por las figuras y los ejemplos siguientes. 50

Descripción detallada de las figuras Figura 1 55

Crecimiento de las larvas de lubina alimentadas con unas presas vivas o con unos sustitutos alimenticios En ordenadas: peso de las larvas expresado en mg de materia húmeda; En abscisas: edad de las larvas expresada en nombre de días después de la eclosión.

60

El crecimiento ha sido seguido del día 9 al día 40 después de la eclosión para unas larvas alimentadas del día 9 al día 40 exclusivamente con presas vivas (Artemia), de una composición para alimento completo según la invención o de la composición H19 del estado de la técnica (CAHU et al., 1999). Cada punto representa el resultado de la media ± diferencia tipo de 4 lotes de 10 larvas. 65

6

ES 2 223 505 T3 Figura 2 Estudio de la supervivencia de las larvas en el día 40 5

10

En ordenadas: porcentaje de supervivencia de las larvas expresada en porcentajes de larvas vivas calculados en forma de la relación de larvas vivas el día 40 con el número de larvas vivas al día 2 después de la eclosión. El porcentaje de supervivencia ha sido determinado para unas larvas alimentadas exclusivamente por unas presas vivas (Artemia), un sustituto alimenticio del estado de la técnica H19 y la composición según la invención para alimento completo según la invención. Cada punto representa el resultado de la media ± diferencia tipo de 4 lotes. Ejemplos Ejemplo 1

15

Preparación de un alimento compuesto completo para peces según la invención

20

En un primer tiempo, las materias primas utilizadas, y en particular la harina de pescado, son tamizadas antes de su mezcla, de tal manera que se obtengan unas partículas de cada una de las materias primas que tengan un tamaño inferior a 160 µm. Las materias primas son las siguientes:

25

• harina de pescado es la harina comercializada bajo la denominación NORSETM LT94, de contenido de proteínas superior a 78% en peso de materia seca, y comercializada por la Sociedad NORSILDMEL. • el concentrado proteínico soluble de pescado (hidrolizado de proteínas de pescado) es el CPSPTM especial G, comercializado por la Sociedad SOPROPECHE.

30

• la lecitina de soja utilizada, designada por la referencia D10, es comercializada por la Sociedad SAPA-DAFA. • la betaína se presenta en forma de clorhidrato de una pureza superior a 99% y es comercializada bajo la referencia B3501 por la Sociedad Sigma.

35

• la mezcla vitamínica utilizada es comercializada bajo la referencia 762 por la Sociedad UPAE-INRA. • la mezcla mineral utilizada es comercializada bajo la referencia 763 por la Sociedad UPAE-INRA.

40

Las materias primas anteriores han sido mezcladas en un bol de acero movido por un brazo mecánico, después de adición de 10% de agua (en peso de la mezcla inicial) a fin de asegurar el pegado de las partículas de los diferentes constituyentes. La mezcla homogénea de las materias primas pasa a continuación a través de una hilera a fin de formar largos filamentos cilíndricos (“spaghetti”) de 3 mm de diámetro.

45

Los filamentos de materia prima son a continuación secados a fin de llevar el continuo de agua a aproximadamente 8% en peso de la mezcla final. El secado es realizado en una estufa con flujo de aire caliente a la temperatura de 50ºC durante 20 minutos. 50

Los filamentos de un diámetro de 3 mm cuyo contenido de agua ha sido ajustado son a continuación sometidos a una etapa de congelación con nitrógeno líquido por una duración de una decena de segundos.

55

Los filamentos congelados son a continuación sometidos a una etapa de triturado en un triturador y puestos en forma de gránulos por unos medios conocidos. Preferentemente, se mantiene una baja temperatura durante esta etapa, de manera que se evite el colmatado del triturador.

60

Los gránulos obtenidos en la etapa anterior son a continuación congelados con nitrógeno líquido y pasados sobre unos tamices. Se han utilizado unos tamices sucesivos de tal manera que separen los gránulos en diferentes fracciones de tamaño respectivamente comprendido entre 400 y 600 µm, 200 y 400 µm, 120 y 200 µm y finalmente de tamaño inferior a 120 µm. Los gránulos así obtenidos tienen un contenido de agua de 8% de la materia seca. La constitución precisa de la composición para alimento completo es la siguiente:

65

7

ES 2 223 505 T3 Ingredientes

% de materia seca

Harina de pescado Concentrado proteínico soluble de pescado Lecitina de soja Mezcla vitamínica Mezcla mineral Betaína

5

10

56 14 17 8 4 1

La composición de los gránulos, expresada con respecto a la materia seca del alimento es de: 15

• proteínas totales (N x 6,25): 56%; • fosfolípidos totales: 12%; • lípidos totales: 26%;

20

• cenizas: 14%. Ejemplo 2

25

30

35

Supervivencia y crecimiento de las larvas de lubina alimentadas con el alimento compuesto completo según la invención y comparación con un sustituto alimenticio representativo del estado de la técnica para unas larvas de una edad de 9 a 40 días Unas larvas de lubina (Dicentrarchus labrax) han sido repartidas en unas cubas de 35 litros con una densidad de 60 larvas/l. El conjunto de las larvas ha sido alimentado con unas rotíferas (Brachionus plicatilis) durante un periodo de tiempo de 3 días que siguen a la apertura de la boca. Las larvas han sido a continuación separadas en dos grupos de cuatro lotes y la supervivencia y el crecimiento de las larvas han sido seguidos desde el día 9 al día 40 después de la eclosión (es decir del día 4 al día 35 después de la apertura de la boca). El primer grupo de cuatro lotes ha sido alimentado exclusivamente con nauplii de Artemia. El segundo grupo de cuatro lotes ha sido exclusivamente alimentado con el alimento compuesto completo según la invención de acuerdo con el ejemplo 1.

40

45

Las otras condiciones de cría han sido uniformizadas en las cubas, siendo la temperatura del agua mantenida a 20ºC con una salinidad de 35 ppm. Las cubas han sido aclaradas de forma permanente. La alimentación de las larvas se ha realizado con la ayuda de distribuidores automáticos de tipo cinta rodante fijados encima de las cubas y el alimento ha sido proporcionado a las larvas en continuo (24/24). Las cantidades diarias de alimento compuesto completo han sido de 1 g por día para 2500 larvas al principio de nutrición y han sido progresivamente aumentadas hasta 4 g/d para 2500 larvas al final del ciclo de nutrición (D 40 después de la eclosión).

50

55

Las cantidades de alimentos utilizadas corresponden a una distribución en exceso que permite una disponibilidad permanente de los gránulos o de las presas vivas para las larvas. Según el procedimiento de distribución alimenticio considerado, el alimento compuesto completo decanta lentamente en la columna, lo que hace posible la captura de los gránulos por las larvas en el curso de esta decantación lenta. Cada día, los depósitos de alimentos excedentes y de heces acumulados en el fondo de las cubas son extraídos sin nueva puesta en suspensión.

60

65

Después de 32 días de alimentación (40 días después de la eclosión), los resultados, expresados como la media ± diferencia tipo de la media, son los siguientes:

Supervivencia (%) Peso medio (mg)

Alimento completo 70 ± 6,9 32 ± 3,8

Artemia 55 ± 8,1 35 ± 4,1

8

H19 47 ± 6,2 6 ± 0,8

ES 2 223 505 T3 Los resultados obtenidos en las mismas condiciones de cría con el sustituto alimenticio H19 representativo del estado de la técnica (CAHU et al., 1999) son también presentados a título de comparación. 5

La supervivencia indicada corresponde al número de larvas al final de la experiencia (cuadragésimo día después de la eclosión) expresada en porcentaje del número inicial de larvas puestas en cría dos días después de la eclosión (figura 2). El peso medio individual ha sido calculado a partir de cuatro extracciones de 10 larvas para cada una de las cubas de un mismo lote experimental.

10

El crecimiento de las larvas ha sido seguido del día 9 al día 40 después de la eclosión y los resultados experimentales están representados en la figura 1. 15

Los resultados de la figura 1 muestran que los efectos del alimento compuesto completo según la invención sobre el crecimiento de las larvas son totalmente comparables, incluso idénticos, con las propiedades de las nauplii de Artemia. El día 40 después de la eclosión, las larvas alimentadas con el alimento compuesto completo según la invención tienen un peso (32 mg) que no difiere significativamente del peso de las larvas alimentadas con las Artemia (35 mg).

20

En contrapartida, las larvas alimentadas con la ayuda del sustituto alimenticio H19 del estado de la técnica tienen un porcentaje de crecimiento extremadamente bajo, puesto que el peso de las larvas alimentadas con este sustituto al día 40 es de aproximadamente 5 mg, o sea un peso 6 veces menor que el obtenido con el alimento compuesto completo según la invención.

25

60 días después de la eclosión, las larvas que no han recibido nunca Artemia pesaban 300 mg de media y presentaban un desarrollo armonioso, en particular a nivel del esqueleto.

30

Los resultados de la tabla indican una supervivencia significativamente más importante en las larvas que han recibido el alimento compuesto completo según la invención que las larvas alimentadas con las Artemia o el sustituto alimenticio H19.

35

Estos resultados demuestran claramente que el alimento compuesto completo según la invención reemplaza ventajosamente la Artemia en la secuencia de cría de las larvas de lubina y que este sustituto alimenticio permite incluso un porcentaje de supervivencia de las larvas significativamente superior al porcentaje de supervivencia obtenido con una alimentación de las larvas con la ayuda de presas vivas. Ejemplo 3

40

Supervivencia y crecimiento de las larvas de lubina alimentadas con el alimento compuesto completo según la invención para las larvas de una edad de 5 a 10 días

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Las condiciones generales de la cría de las larvas de lubina son las expuestas en el ejemplo 2. A la apertura de la boca, o sea 5 días después de la eclosión, las larvas han sido separadas en dos grupos, el primer grupo de 4 lotes ha sido alimentado exclusivamente con rotíferas, el segundo grupo de 4 lotes ha sido alimentado con el alimento compuesto completo según la invención. Las partículas del alimento tenían un tamaño inferior a 120 µm. Después de 5 días de alimentación, los pesos medios eran de 0,85 ± 0,07 mg para las larvas alimentadas con el alimento compuesto según la invención mientras que sólo alcanzaba 0,76 ± 0,10 mg para las larvas alimentadas con las rotíferas. La supervivencia era idéntica en los dos grupos (92%).

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Este ejemplo muestra que el alimento completo según la invención reemplaza ventajosamente a las rotíferas y puede ser utilizado como alimento único durante toda la cría de las larvas de peces. 55

Este alimento presenta interés para unas especies cuya cría de las larvas hace intervenir una larga utilización de rotíferas, tal como el rodaballo o la dorada. Ejemplo 4

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Estudio comparativo de la calidad y de la madurez de las larvas de lubina alimentadas con alimento compuesto completo según la invención o el sustituto alimenticio H19 Se han medido unos parámetros fisiológicos en las larvas que provienen de la experiencia descrita en el ejemplo 2.

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Al cuadragésimo día de desarrollo, solamente 3,8 ± 1,5% de las larvas alimentadas con alimento compuesto completo según la invención presentaba una malformación esquelética. Este porcentaje era de 6 ± 1,2% en las larvas alimentadas con el sustituto alimenticio designado H19 en el artículo de CAHU et al. 1999. El estado de madurez de las funciones digestivas ha sido evaluado por dos parámetros: la secreción de una enzima 9

ES 2 223 505 T3 pancreática y la aparición en los bordes en cepillo de los enterocitos de una enzima característica de la digestión de tipo adulto, la fosfatasa alcalina. 5

Las larvas alimentadas con alimentos según la invención presentaban un porcentaje de secreción de tripsina de 55 ± 5,5%, superior al de las larvas alimentadas con el sustituto alimenticio designado H19, 43 ± 4,9%. La actividad de la fosfatasa alcalina alcanzaba 308 ± 10,7 mU/mg de proteínas en las larvas alimentadas con el alimento según la invención y era de 110 ± 8,9 mU/mg para las larvas alimentadas con el sustituto alimenticio H19.

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La utilización del alimento según la invención es ventajosa para producir unas larvas de buena calidad morfológica y fisiológica. En particular, la maduración de las funciones digestivas en el curso de la vida larvaria es indispensable para un buen desarrollo ulterior del pez.

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ES 2 223 505 T3 REIVINDICACIONES

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1. Composición de alimento completo para larvas de peces, caracterizada porque posee un contenido de fosfolípidos comprendido entre 10 y 20% en peso de la materia seca de dicho alimento, y un contenido de proteínas totales comprendido entre 40 y 60% en peso de materia seca de dicho alimento. 2. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque posee un contenido de fosfolípidos de origen vegetal por lo menos igual a 6% de materia seca del alimento.

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3. Composición según una de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizada porque posee un contenido de lípidos totales superior a 25% en peso de materia seca. 4. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque presenta un contenido de proteínas totales igual a 50% en peso de la materia seca. 5. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque posee un contenido de proteínas hidrolizadas comprendido entre 8 y 25% en peso de la materia seca, más particularmente comprendido entre 10 y 22%, y preferentemente igual aproximadamente a 14% en peso de la materia seca.

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6. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque comprende además una mezcla aditiva vitamínica. 7. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque comprende además una mezcla aditiva mineral. 8. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque comprende además un factor de apetencia, tal como la betaína.

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9. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque posee un contenido de agua inferior a 14% en peso de la composición final. 10. Composición según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada por la constitución siguiente:

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Ingredientes

% en peso de materia seca

Harina de pescado Concentrado proteínico soluble de pescado Lecitina de soja Mezcla vitamínica Mezcla mineral Betaína

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11. Alimento compuesto completo para larvas de peces constituido por gránulos de una composición según una de las reivindicaciones 1 a 10. 50

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12. Alimento según la reivindicación 11, caracterizado porque el tamaño de los gránulos es inferior a 600 µm, siendo las diferentes fracciones de tamaño 600-400 µm, 400-200 µm, 200-120 µm e inferior a 120 µm. 13. Procedimiento para la preparación de un alimento completo según una de las reivindicaciones 11 y 12, caracterizado porque comprende las etapas siguientes: a) obtención de una pasta por mezcla de agua y de por lo menos tres materias primas en las proporciones siguientes: (i) harina de pescado en proporción de 50 a 65% en peso de la mezcla final;

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(ii) concentrado proteínico soluble de pescado en la proporción de 8 a 25% en peso de la mezcla final; (iii) lecitina de soja en proporción de 7 a 25% en peso de la mezcla final;

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b) granulación por vía húmeda de la pasta así obtenida en forma de filamentos; c) congelación de los filamentos de pasta a baja temperatura, preferentemente a una temperatura inferior a -80ºC;

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ES 2 223 505 T3 d) trituración y/o molido de los filamentos de pasta congelada en la etapa c); e) tamizado de los gránulos obtenidos cuando tiene lugar la etapa de trituración. 5

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14. Procedimiento según la reivindicación 13, caracterizado porque, cuando tiene lugar la etapa a) de la mezcla, se añade agua a razón de 10 a 15% del peso de la mezcla. 15. Procedimiento según una de las reivindicaciones 13 y 14, caracterizado porque la etapa b) de granulación es seguida de una etapa de secado a fin de ajustar el contenido de agua de los filamentos a un valor inferior a 14%, preferentemente un valor comprendido entre 7 y 10% y de manera totalmente preferida un valor de 8% aproximadamente. 16. Procedimiento de cría de larvas de peces, caracterizado porque las larvas son alimentadas a razón de 1 a 4 g, por día y por 2500 larvas, con un alimento completo según una de las reivindicaciones 11 y 12.

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