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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k kInt. Cl. : A61K 31/42

11 N´ umero de publicaci´on:

2 104 710

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˜ ESPANA

A61K 31/365 A61K 31/195 A61K 31/00

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 91912670.6 kFecha de presentaci´on : 21.06.91 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 607 124 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 27.07.94

T3

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54 T´ıtulo: Alteraci´ on del ritmo y el tipo de crecimiento de pelo.

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73 Titular/es: Joseph H. Handelman

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72 Inventor/es: Ahluwalia, Gurpreet S.;

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74 Agente: D´ıez de Rivera y Hoces, Alfonso

30 Prioridad: 25.06.90 US 542586

26 West 61 Street New York, NY 10023, US

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

16.10.97

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 104 710 T3

16.10.97

Aviso:

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Shander, Douglas y Harrington, F. Eugene

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 104 710 T3 DESCRIPCION

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Esta invenci´on se refiere a un m´etodo y a una composici´ on para alterar el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo en mam´ıferos, especialmente el crecimiento de pelo estimulado por andr´ogenos, mediante aplicaci´on t´ opica a la piel de una composici´on que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. Antecedentes de la invenci´ on

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Se ha propuesto anteriormente alterar el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo mediante aplicaci´ on a la piel de inhibidores de ciertas enzimas tales como inhibidores de la 5-alfa-reductasa o de la ornitina descarboxilasa, o de materiales antiandrog´enicos tales como agentes de uni´on al receptor de andr´ ogenos citoplasm´atico, como se describen en las patentes de Estados Unidos nos 4.720.489 y 4.885.289. Por otra parte, se ha teorizado que otras enzimas, incluida la gamma-glutamil transpeptidasa, est´ an involucradas en diversas fases de la formaci´on del fol´ıculo piloso o del crecimiento del pelo, pero la relaci´on entre las diversas enzimas y las reacciones que controlan, as´ı como los efectos de unas con otras y sobre el crecimiento del pelo, no han sido completamente elucidados, como se desprende de Richards y col., Cancer Research, vol. 42, 4143-4152 (1982); DeYoung y col., Cancer Research, vol. 38, 3697-3701 (1978); y Chase, Physiolo. Zool., vol. 24, 1-8 (1951). Se ha encontrado ahora que el ritmo y el tipo de crecimiento de pelo en los mam´ıferos (incluidos los seres humanos), especialmente el crecimiento de pelo estimulado por andr´ogenos, se ve alterado mediante aplicaci´on t´ opica a la piel de una composici´on que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. De acuerdo con la presente invenci´ on se proporciona el procedimiento de reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mam´ıferos, que comprende la etapa de aplicar sobre la piel una composici´ on que contiene un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa.

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Tambi´en se proporciona de acuerdo con la presente invenci´ on la utilizaci´on, para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mam´ıferos de una composici´ on t´ opica que comprende un veh´ıculo no t´ oxico dermatol´ ogicamente aceptable, y un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa en concentraciones desde 0,1% hasta 20%, basadas en el peso total de dicha composici´ on.

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Entre los inhibidores de la enzima gamma-glutamil transpeptidasa que pueden ser usados en la presente invenci´on se encuentran el ´acido (alfa S,5S)-amino-3-cloro-4,5-dihidro-isoxazolac´etico(acivicina) ; 1-gamma-L-glutamil-2-(2-carboxi-fenil)-hidrazina (antglutina); 5,5’-(4,5,6,7-tetrabromo-3-oxo-1(3H)isobenzofuranilideno)-bis[´acido 2-hidroxibenceno-sulf´ onico] (bromosulfale´ına); a´cido N-fumarol-L-2,3diaminopropanoico, a´cido L-2-amino-4-oxo-5-cloropentanoico (clorocetona); y g-glutamilhidrazona de acetoglutarato. Entre ´estos, se prefiere la acivicina, la antglutina y la bromosulfale´ına. La composici´on contiene, adem´as del inhibidor, un veh´ıculo o escipiente no t´oxico dermatol´ ogicamente aceptable que est´a adaptado para ser extendido sobre la piel. La concentraci´ on del inhibidor en la composici´ on puede ser variada en un amplio intervalo hasta una soluci´ on saturada, preferiblemente entre 0,1% y 20% en peso o incluso m´as; la reducci´on del crecimiento de pelo aumenta a medida que aumenta la cantidad de inhibidor aplicado por unidad de superficie de la piel. La cantidad m´ axima eficazmente aplicada se ve limitada u ´ nicamente por la velocidad de penetraci´ on del inhibidor en la piel. Generalmente, las cantidades eficaces oscilan entre 10 y 2500 microgramos o m´as por cent´ımetro cuadrado de piel.

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Los siguientes ejemplos espec´ıficos pretenden ilustrar m´ as claramente la naturaleza de la presente invenci´on. Ejemplo 1 Se prepar´ o un veh´ıculo o excipiente con la siguiente composici´on:

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ES 2 104 710 T3

Componente

Porcentaje de concentraci´ on en peso

Agua Etanol Propilenglicol Dipropilenglicol Alcohol benc´ılico Carbonato de propileno

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68% 16% 5% 5% 4% 2%

Se mezcl´o acivicina (Sigma Chemical Co., St. Louis) con distintas porciones del veh´ıculo anterior, para proporcionar probetas que conten´ıan 1,2 y 6% en peso del inhibidor respectivamente, y el pH se ajust´ o a pH 7,5 con hidroxido s´ odico. 15

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Se utilizaron cuatro grupos (de ocho animales en cada grupo) de machos sanos de hamsters Golden Syrian. Estos animales se consideraron modelos aceptables para el crecimiento del pelo de la barba humana, ya que muestran unos o´rganos laterales de forma ovalada, uno a cada lado, cada uno de, 8 mm de di´ ametro principal, en los cuales crece un grueso y basto pelo negro similar al pelo de la barba humana. Estos o´rganos producen pelo en respuesta a los andr´ ogenos de los hamsters. Los o´rganos laterales de cada hamster se depilaron por aplicaci´ on de un depilatorio qu´ımico basado en tioglicolato (Surgex), y a un o´rgano de cada animal se le aplic´ o 10-25 mg del veh´ıculo s´olo, una vez al d´ıa, mientras que al otro ´organo de cada animal se le aplic´ o una cantidad igual de veh´ıculo que conten´ıa el inhibidor. Despu´es de tres semanas de dichas aplicaciones (cinco d´ıas a la semana), los o´rganos laterales se afeitaron y se pes´ o la cantidad de pelo recogida (masa de pelo) de cada uno. El grado de reducci´ on en el crecimiento de pelo debido al inhibidor se expres´ o como la disminuci´on en porcentaje de la masa de pelo del o´rgano tratado con el inhibidor, comparada con la del o´rgano tratado s´ olo con el veh´ıculo. Como testigo, un grupo de ocho animales ten´ıa ambos o´rganos laterales de cada animal tratados con el veh´ıculo s´olo. Los resultados se muestran en la siguiente Tabla 1.

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TABLA 1 Inhibici´ on del crecimiento del pelo por acivicina Masa de pelo de los o ´rganos laterales de los hamsters (mg)

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Grupo de Tratamiento Testigo Acivicina Acivicina Acivicina

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Concentraci´ on de compuesto activo

No tratados (media)

Tratados (media)

Porcentaje de inhibici´ on

0,00 1,0% 2,0% 6,0%

0,58 1,04 1,33 0,79

0,61 0,85 0,56 0,15

— 18,2 57,9 81,0

Tambi´en se observ´ o que el pelo en el ´organo tratado era de naturaleza m´ as vellosa que en el ´organo no tratado. Adem´as, se encontr´ o que tratamientos t´ opicos similares con una soluci´on al 6% de acivicina durante un per´ıodo de tres semanas provocaban una inhibici´ on de alrededor del 87% en la actividad enzim´atica del fol´ıculo. Ejemplo 2

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Se prepar´ o una composici´ on que conten´ıa 5% en peso de bromosulfale´ına dis´ odica en el veh´ıculo descrito en el Ejemplo 1, y se aplic´ o a los ´organos laterales de los hamsters en las mismas condiciones que las descritas en el Ejemplo 1. Se observ´o una reducci´on del 32% en la masa de pelo despu´es de tres semanas. Ejemplo 3

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La antglutina, descrita como un inhibidor espec´ıfico de la gamma-glutamil transpeptidasa en la Patente Japonesa n´ umero 53-127.432, y considerada como un inhibidor de la enzima gamma-glutamil transpeptidasa por Minato, Archives Biochem, Biophy., vol. 192, 235-240 (1979), se prepar´o mediante un 3

ES 2 104 710 T3 procedimiento b´ asicamente igual al descrito por Kinoshita y col., Bull Chem. Soc. Jpn., vol. 54, 22192220 (1981). La s´ıntesis se llev´o a cabo en las siguientes cuatro etapas: 1.Acido 2-hidrazinobenzoico 5

Una soluci´on de acetato s´odico (21,7 g, 0,265 moles) en agua (80 mL) se a˜ nade a una soluci´ on de hidrocloruro de a´cido 2-hidrazinobenzoico (Aldrich, 50 g, 0,265 moles) en agua (1500 mL), form´andose un precipitado espeso. Esta mezcla se refrigera durante tres horas, se filtra, se lava con agua (2x50 mL) y etanol (1 x 100 mL), y se seca al vac´ıo para dar el a´cido libre con un rendimiento del 75%. 10

2.Amida de ´ester alfa-benc´ılico del a ´cido N-t-BOC-L-glut´ amico y de a ´cido g-2-hidrazinobenzoico

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La siguiente reacci´on se realiza bajo una atm´osfera de nitr´ ogeno, usando material de vidrio previamente secado. Se a˜ nade una soluci´ on de N,N’-diciclohexilcarbodiimida (Aldrich, 16,9 g, 0,074 moles) en cloruro de metileno anhidro (50 mL) a una soluci´ on de ´ester alfa-benc´ılico del ´acido N-t-BOC-L-glut´amico (Sigma, 25 g, 0,074 moles) y trietilamina (Aldrich, 10,4 g, 0,103 moles) en cloruro de metileno anhidro (150 mL). A esta soluci´ on se a˜ nade una suspensi´ on de a´cido 2-hidrazinobenzoico (23 g, 0,151 moles) en cloruro de metileno anhidro (500 mL). La mezcla de reacci´on se agita a temperatura ambiente durante toda una noche y se filtra por una almohadilla de Celite 545. El filtrado se evapora a vac´ıo, se redisuelve en cloruro de metileno (250 mL) y se lava con agua (3 x 100 mL). La capa org´ anica se evapora en vac´ıo y el residuo resultante se purifica por recristalizaci´ on en etanol/agua para dar el compuesto deseado con un rendimiento del 30%. 3. Amida de ´ acido N-t-BOC-L-glut´ amico y de a ´cido g-2-hidrazinobenzoico

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La siguiente reacci´on se realiza bajo una atm´osfera de nitr´ ogeno, usando material de vidrio previamente secado. Se a˜ nade un catalizador de paladio sobre carbono (Aldrich, 5% C, 4,5g) a una soluci´ on del producto de la etapa 2 (10 g, 0,02 moles) y ciclohexeno (Aldrich, 12 mL) en etanol absoluto (225 mL). La mezcla se somete a reflujo durante tres horas, se enfr´ıa y se filtra a trav´es de una almohadilla de Celite 545. El filtrado se evapora en vac´ıo para dar el compuesto deseado con un rendimiento mayor del 90%. 4. Preparaci´ on de 1-g-L-glutamil-2-(2-carboxifenil)-hidracina-antglutina

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La siguiente reacci´on se realiza bajo una atm´osfera de nitr´ ogeno, usando material de vidrio previamente secado. Se agitan el producto de la etapa 3 (7,1 g; 0,02 moles) anisol (Aldrich, 29,6 g, 0,26 moles), nade ´eter et´ılico (300 y a´cido trifluoroac´etico (Aldrich, 5 g, 0,046 moles), a 0◦C durante tres horas. Se a˜ mL) a la soluci´on de reacci´on y el precipitado cauchoide resultante se tritura con ´eter et´ılico adicional para producir antglutina bruta en forma de un polvo blanco con un rendimiento del 40%. El producto bruto es posteriormente purificado por medio de cromatograf´ıa de intercambio i´onico con una columna de intercambio ani´onico Dowex 2 x 8, proporcionando 240 mg de un producto cristalino ligeramente amarillo que exhib´ıa unos m´ aximos de absorci´ on de UV (g max) a pH 2 y pH 7 y a 320 y 306 nm muy pr´ oximos a los valores encontrados en la bibliograf´ıa. La antglutina preparada de la manera anteriormente descrita se disolvi´ o en probetas del veh´ıculo descrito en el Ejemplo 1, y se aplic´ o a los ´organos laterales de los grupos de hamsters de la misma manera que la descrita en el Ejemplo 1, utiliz´ andose un grupo de ocho animales para cada composici´ on diferente. Los resultados fueron los siguientes: TABLA 2

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Masa de pelo de los o ´rganos laterales de los hamsters (mg) Grupo de tratamiento

Concentraci´ on del compuesto activo

No tratados (media)

Tratados (media)

Porcentaje de inhibici´ on

Testigo Antglutina Antglutina Antglutina Antglutina

0,00 0,5% 1,0% 2,0% 6,0%

2,66 2,03 1,92 2,57 2,26

2,33 1,81 1,60 1,58 0,74

— 10,7 16,7 38,6 67,2

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ES 2 104 710 T3 Se encontr´ o que la antglutina tambi´en inhibe la actividad de la gamma-glutamil transpeptidasa del fol´ıculo de pelo, para la que la antglutina ten´ıa una fuerte afinidad inhibitoria. Resultados similares pueden esperarse con otros inhibidores de la gamma-glutamil transpeptidasa. 5

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ES 2 104 710 T3 REIVINDICACIONES

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1. Procedimiento cosm´etico para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mam´ıferos, que comprende la etapa de aplicar a la piel una composici´ on que contiene un inhibidor de la gammaglutamil transpeptidasa. 2. Procedimiento seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque dicho inhibidor es acivicina, bromosulfale´ına o antglutina.

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3. Procedimiento seg´ un las reivindicaciones 1 ´o 2, caracterizado porque la cantidad a aplicar es de 10 a 2500 microgramos de dicho inhibidor por cent´ımetro cuadrado de piel. 4. Utilizaci´on con fines cosm´eticos para reducir el ritmo y alterar el tipo de crecimiento de pelo en mam´ıferos de una composici´on t´ opica que comprende un veh´ıculo no t´ oxico dermatol´ ogicamente aceptable, y de 0,1 a 20%, basado en el peso total de dicha composici´on, de un inhibidor de la gamma-glutamil transpeptidasa. 5. Utilizaci´on seg´ un la reivindicaci´ on 4, caracterizada porque dicho inhibidor es acivicina, bromosulfale´ına o antglutina.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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