Hepatitis por cobre en perros

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Definición de la enfermedad Origen Características generales Especies afectadas Razas de perros afectadas y prevalencia Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria Base genética Diagnóstico clínico Diagnóstico molecular Consejo genético a criadores y propietarios.

z Definición de la enfermedad z Origen z Características generales z Especies afectadas z Razas de perros afectadas y prevalencia z Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria z Base genética z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Definición de la enfermedad z

z

Incapacidad de los hepatocitos para excretar por bilis el exceso de cobre absorbido. Desorden autosómico recesivo cuyo estudio en mayor profundidad ha sido realizado en la raza de perros Bedlington terrier.

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Definición de la enfermedad

z Origen z Características generales z Especies afectadas z Razas de perros afectadas y prevalencia z Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria z Base genética z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Origen z

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Se cree que los Bedlington terrier provienen de un rouge-coated Scotch terrier, de los cuales un gran numero de estos fueron llevados en el s. XVIII desde Escocia a Inglaterra. Allí se utilizaban principalmente como perros de caza. El origen de la patología se relaciona con un solo perro de la raza llamado Flint, el cual se uso como fundador de la misma (modelo cuello de botella).

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Definición de la enfermedad Origen

z Características generales z Especies afectadas z Razas de perros afectadas y prevalencia z Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria z Base genética z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Características generales z

Fisiopatologia. z z

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Exceso de Cu en lisosomas ATP7B membrana aparato de Golgi ApoceruloplaminaÆ ceruloplasmina Hepatitis por cobre (MURR1) Æ perro Enfermedad de Wilson (ATP7B) Æ hombre

Características generales z

Primeras manifestaciones clínicas. z pérdida de apetito z vómitos z pérdida del peso z depresión z letargo z poliuria/polidipsia

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Muestras especificas de fallo hepático z ictericia z problemas de la coagulación z acumulación de líquidos en abdomen (ascitis) z pérdida extrema del peso z anormalidades neurológicas (encefalopatía hepática)

Características generales z

Características de enfermedad autosómica recesiva (Mendeliana). z z z

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NN y NA son sanos AA enfermo Necesario que ambos padres sean portadores 25% descendencia enferma y el 50% portadora

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Definición de la enfermedad Origen Características generales

z Especies afectadas z Razas de perros afectadas y prevalencia z Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria z Base genética z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Especies afectadas z z z z z z

Perro Bóvidos Ovino Porcino Ratones Hombre

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Definición de la enfermedad Origen Características generales Especies afectadas

z Razas

de perros afectadas y prevalencia

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Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria Base genética Diagnóstico clínico Diagnóstico molecular Consejo genético a criadores y propietarios.

Razas de perros afectadas y prevalencia

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Definición de la enfermedad Origen Características generales Especies afectadas Razas de perros afectadas y prevalencia

z Importancia

de la enfermedad en la clínica veterinaria

z z z z

Base genética Diagnóstico clínico Diagnóstico molecular Consejo genético a criadores y propietarios.

Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria z

z z

En España frecuencia de presentación no descritaÆ diagnostico intuitivo y tratamiento sistematico de fallo hepático 50% de los Bedlington en EEUU Países europeos: z z

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Inglaterra 50% Holanda y Bélgica 37%

Estudio mas profundo en Bedlington por ser considerado modelo animal

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Definición de la enfermedad Origen Características generales Especies afectadas Razas de perros afectadas y prevalencia Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria

z Base genética z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Base genética z

El gen se identifico estudiando la descendencia enferma del perro fundador mediante estudios de segregación mediante ligamiento y se acotó la zona de la mutación mediante positional cloning. Luego se analizó esa región mediante el gen candidato por medio de desequilibrio de ligamiento.

Base genética z

El positional cloning se realizó siguiendo los siguientes pasos: z z

z

Asignar el gen a un cromosoma Construir un mapa físico por hibridación irradiación mediante un BAC específico de la región del cromosoma que contiene el gen y posterior mapeo fino por mapeo de homocigotos Construcción de un mapa genético del gen potencial por comparación al humano

Base genética Asignar el gen a un cromosoma.

z z

z

Mediante hibridación por fluorescencia in situ (FISH) usando el BAC N21-27, que contiene en marcador CO4107, se localiza este en el cromosoma 10 del perro en la región q26. Secuenciando este BAC se observa que es homóloga a la del gen MURR1 humano (localizado en el cromosoma 2, región p13-21) y con ello se excluyen otros genes responsables del transporte del cobre (ATP7B, CTR1, CTR2 y el ATOX1) como candidatos a ser los causantes de la toxicosis por cobre.

Base genética z

Construir un mapa físico por hibridación irradiación mediante un BAC específico de la región del cromosoma que contiene el gen y posterior mapeo fino por mapeo de homocigotos z Construyen estos mapas y reducen el gen afectado a 500 kb. También se determina que la distancia entre el marcador CO4107 y el gen de la toxicosis por cobre es tan pequeña que prácticamente es imposible que existan recombinaciones que dificulten la identificación del mismo (pero existen).

Base genética Construcción de un mapa genético del gen potencial por comparación al humano.

z

z

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z

A partir del RNA de perros afectados se realiza la transcripción viéndose una deleccion del exón 2 del MURR1 situándose los puntos de corte en 65.3091 y 65.3489 Mb del cromosoma 10 del perro, en los intrones 1 y 2 de MURR1 respectivamente, formándose un fragmento de 39.7 KB Proteína truncada de 94 aa´s en vez de 188 que produce el alelo normal Distinguir por inmunoblotting y RT-PCR.

Base genética z

Gen MURR1: z

En perros esta compuesto por 3 exones: z z z

z

exón 1 de 226 bp exón 2 de 284 bp exón 3 de 1011 bp

El gen del perro tiene 170 kb, estando el marcador CO4107 localizado en el intrón 1 del MURR1 canino aproximadamente a 3,5 kb del punto donde se produce la delección.

Base genética z

Gen MURR1: z

z

z

Los dos límites de fracturación comparten homología de secuencia. El lado izquierdo de la zona de corte contiene la secuencia ATTTATGATAGT(CA)3(GA)13 y el derecho contiene la secuencia ATTTATGATAGT(CA)2(GA)13, esta homología pudo haber sido el factor determinante en la formación de la mutación, quizás por medio de recombinación. La longitud exacta del exón 1 sigue siendo desconocido, desde el sitio del comienzo de la transcripción que todavía tiene que ser determinado y aún no han identificado al promotor. La proteína MURR1 canina presenta una elevada homología con la humana y con la de ratón.

Base genética z

Caracterización molecular y funcional del MURR1. z z z z z

Anticuerpos monoclonales Proteína de masa molecular de 23 kD Detectada en citosol y asociada a membranas Localización subcelular Æ asociada a un compartimento vesicular intracelular aun no identificado 2003 se investiga la interacción entre el MURR1 y el transportador de cobre ATP7B viéndose que colaboran en la excreción biliar del cobre. Recientes estudios muestran interacciones ente el MURR1 y varias proteínas, lo que sugiere que posee una acción pleiotrópica.

z z z z z z

z

Definición de la enfermedad Origen Características generales Especies afectadas Razas de perros afectadas y prevalencia Importancia de la enfermedad en la clínica veterinaria Base genética

z Diagnóstico clínico z Diagnóstico molecular z Consejo genético a criadores y propietarios.

Diagnóstico clínico z z

Epidemiológico: hembras/ 2-6 años Signos clínicos: z z z z z

z

Ictericia Hepatomegalia Debilidad/ perdida de apetito y de peso Signos nerviosos Hepatitis activa crónicaÆ cirrosisÆ fallo hepáticoÆ muerte En etapa avanzada signos vagos e inespecíficos

Diagnóstico clínico z

Analíticas: z

z

Hematología: normal/ anemia y hemólisis suaves con alteración de la coagulación. Bioquímica: ALT 2/3 del nivel normal/ hiperbilirrubinemia y la bilirrubinuria (en casos de crisis hemolítica)/actividad de la ceruloplasmina oxidasa del plasma esta normal o aumentada levemente.

Diagnóstico clínico z

Pruebas específicas: z

Biopsia hepática z z z

z

Estudio anatomopatológico Estudio cuantitativo (radioisopo Cu-64) Estudio semicuantitativo (ácido rubeánico o tinción con rhodamina)

Molecular

Diagnóstico clínico z

Biopsia hepática: z

Estudio anatomopatológico. z z

Hepatitis necrótica agudaÆ hepatomegalia Fibrosis y cirrosisÆ higado pequeño

Diagnóstico clínico z

Biopsia hepática: z

Estudio cuantitativo. z

z

z

Medir niveles fecales de Cu-64 a las 48 horas después de la administración parenteral Perros afectados mostrarán reducida la radioactividad comparado con los perros normales, debido a la reducción de excreción biliar del cobre Técnicas de medida: espectroscopia por absorción atómica / análisis por activación de neutrón

Diagnóstico clínico z

Biopsia hepática: z

z

Análisis histoquímico usando el ácido rubeánico o tinción con rhodamina Evaluar el numero y distribución de los gránulos que contienen cobre así como su intensidad

Diagnóstico clínico Grupo I: histomorfología normal y no hay presencia de gránulos de cobre Grupo II: histológicamente normal y gránulos que contienen cobre en los hepatocitos centrolobulillares. Grupo III: hepatitis multifocal en la zona centrolobulillar y vena central y gránulos de cobre. Cada foco de hepatitis esta compuesto de 1-3 hepatocitos necróticos y 3-4 macrófagos que han fagocitado células pigmentadas junto con unos pocos linfocitos, células plasmáticas y neutrófilos. Grupo IV: necrosis hepática y en cuyas áreas centrales muestran linfocitos, células plasmáticas y neutrófilos. También se observan rosetas de hepatocitos, figuras mitóticas y variación en el diámetro de los hepatocitos (signos de regeneración hepática). Acabando en cirrosis y fibrosis portal junto con presencia de muchos gránulos.

Diagnóstico clínico z

Desventaja de las pruebas: z z

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No pueden realizarse en 1 año de edad) Los perros afectados no deben usarse para apareamiento, y la reproducción de sus padres se debe evitar también al tratarse de portadores.

Bibliografía z z z

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