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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

A61K 31/565 (2006.01) A61K 31/57 (2006.01) A61P 15/12 (2006.01)

ESPAÑA

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11 Número de publicación: 2 269 999

51 Int. Cl.:

TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 03716467 .0

86 Fecha de presentación : 11.03.2003

87 Número de publicación de la solicitud: 1482948

87 Fecha de publicación de la solicitud: 08.12.2004

54 Título: Terapia hormonal sustitutiva que inhibe progestágeno sulfatasa continua.

30 Prioridad: 11.03.2002 US 363148 P

17.05.2002 US 381541 P

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

01.04.2007

73 Titular/es: JANSSEN PHARMACEUTICA N.V.

Turnhoutseweg 30 2340 Beerse, BE

72 Inventor/es: Caubel, Patrick, Michel y

Friedmen, Andrew, Joseph

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Ungría López, Javier

ES 2 269 999 T3

01.04.2007

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. Pº de la Castellana, 75 – 28071 Madrid

ES 2 269 999 T3 DESCRIPCIÓN Terapia hormonal sustitutiva que inhibe progestágeno sulfatasa continua. 5

La presente invención se refiere a la utilización de formulaciones hormonales en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en una forma particular de terapia hormonal sustitutiva (THS) para el tratamiento de mujeres postmenopáusicas o no menstruantes. Más particularmente, el medicamento para ser utilizado en esa forma particular de terapia hormonal sustitutiva continua contiene un progestágeno potente inhibidor de sulfatasa que es norgestimato (NGM) o norelgestromina (NGMN) y un estrógeno adecuado.

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Técnica anterior La terapia hormonal sustitutiva que utiliza una combinación de estrógeno y progestágeno es en sí misma conocida. 15

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WO 00/59577-A describe una terapia hormonal sustitutiva interrumpida con una baja dosis de estrógeno en la cual una preparación farmacéutica contiene una pluralidad de dosis para la administración consecutiva de dosis administradas en fases de actividad estrogénica relativamente dominantes y fases de actividad progestagénica relativamente dominantes alternas. Las fases de actividad estrogénica relativamente dominantes comprenden tres dosis diarias, o un equivalente de las mismas, de una sustancia que presente actividad estrogénica equivalente a 1 mg por día aproximadamente de 17β-estradiol. Las fases de actividad progestagénica relativamente dominantes comprenden tres dosis diarias, o un equivalente de las mismas, de una combinación de una sustancia que presente actividad estrogénica equivalente a 1 mg por día aproximadamente de 17β-estradiol y una sustancia que presente actividad progestagénica equivalente a 90 µg por día aproximadamente de norgestimato. WO 01/52857-A describe una composición farmacéutica para terapia hormonal sustitutiva. La composición contiene, como un primer agente activo, un estrógeno (o un derivado natural o sintético del mismo) en cantidades suficientes para tratar enfermedades, trastornos y síntomas asociados con niveles endógenos de estrógeno deficientes en mujeres, y drospirenona como segundo agente activo en cantidades suficientes para proteger el endometrio de los efectos adversos del estrógeno, junto con excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

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US-A-6165491 describe una composición, basada en progesterona y estrógeno, que está destinada a terapia hormonal sustitutiva en la menopausia. La composición comprende una suspensión de progesterona en un medio lipofílico que contiene valerato de 17-estradiol disuelto en dicho medio lipofílico, en la cual la proporción en peso de progesterona respecto a la base correspondiente de 17-estradiol base es de 25 a 600. 35

EP-A-0309263 describe una formulación anticonceptiva y su utilización en un método de anticoncepción y de sustitución hormonal. La formulación emplea una combinación de estrógeno y progestina y en la cual un corto periodo de actividad estrogénica relativamente dominante alterna con un corto periodo de actividad progestagénica relativamente dominante. 40

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US-A-4906169 describe unidades de dosificación para absorción transdérmica de estrógeno/progestina, que comprenden una capa de soporte, una capa polimérica contigua que es una capa adhesiva en la que está disuelta o microdispersa al menos una dosis eficaz mínima de un estrógeno. Adherida a la capa polimérica hay una capa adhesiva en la que está disuelta y/o microdispersa al menos una dosis mínima de progestina, preferiblemente el estrógeno natural, 17-beta-estradiol o etinil estradiol o combinaciones de los mismos y la progestina, noretindrona o norgestimato o combinaciones de los mismos. Las unidades de dosificación para absorción transdérmica son utilizadas en un proceso de control de la fertilidad y en terapia de sustitución estrogénica. US-A-6071531 describe las administración transdérmica de fármacos, en particular parches y métodos para administrar transdérmicamente 17-deacetil norgestimato, ya sea solo o en combinación con un estrógeno, particularmente etinil estradiol. Estos parches pueden ser también utilizados para proporcionar terapia hormonal sustitutiva. US-A-5968919 describe geles alcohólicos tópicos o alcohólicos acuosos que contienen testosterona, progesterona, estradiol u otras hormonas que tienen una penetración incrementada a través de la piel mediante la inclusión en la formulación de 2-n-nonil-1,3-dioxolano u otro hidrocarbil derivado de 1,3-dioxolano o 1,3-dioxano o acetal, como compuesto intensificador de la penetración cutánea. Antecedentes de la invención

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Un porcentaje sustancial de carcinomas de mama humanos son dependientes de hormonas. Estudios en animales y ensayos clínicos han confirmado que los estrógenos, particularmente el estradiol, son las hormonas más importantes implicadas en la estimulación del crecimiento de los tumores de mama dependientes de hormonas (véanse las refs. # 1 en 493, #2 en 967, #7 en 1589, #8 en 525, #9 en 135, #10 en 225, #11 en 625 y #12 en 1497).

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Los niveles plasmáticos de estrona y estradiol en mujeres post-menopáusicas son muy bajos (véanse las refs. #1 en 493 y #11 en 626). Además, la concentración de estrona y estradiol en tejido tumoral de mama es un orden de magnitud mayor que las concentraciones plasmáticas (véanse las refs. #1 en 493, #2 en 967 y #13 en 641). La Figura 1 muestra el proceso enzimático mediante el cual se forman estrógenos localmente en las células de cáncer de mama 2

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humano y de este modo hacen asequible la estimulación del crecimiento (véase la ref. #10 en 229). Con referencia a la Figura 1, hay estudios que han demostrado que el enzima sulfatasa parece ser al menos 10x más importante en la formación de estrógenos que el enzima aromatasa (véanse las refs. #1 en 493, #2 en 967, #4 en 17, #5 en 931, #7 en 1589, #8 en 525, #9 en 135, #10 en 228, #11 en 626 y 628 y #13 en 641). Por tanto, es la ruta de la sulfatasa la ruta principal que estimula la formación local de estrógenos en las células de cáncer de mama humano. Como el estradiol es uno de los principales factores implicados en la estimulación del crecimiento de los tumores de mama dependientes de hormonas y la ruta de la sulfatasa es la ruta principal para la formación de estradiol en la mama, una disminución de la formación de estradiol por la supresión de la ruta de la sulfatasa tendría una actividad terapéutica potencial en el tratamiento del cáncer de mama (véanse las refs. #1 en 493, #3 en 55, #4 en 17, #5 en 931, #6 en 123 y #11 en 631). La supresión de la ruta de la sulfatasa tendrá un efecto protector de la mama. En un aspecto, la presente invención proporciona un régimen de THS para suprimir de manera continua la actividad sulfatasa en células de cáncer de mama humano; o proporciona un régimen de THS con una supresión excepcional de la actividad sulfatasa en células de cáncer de mama humano. En otro aspecto, la presente invención proporciona un régimen de THS para suprimir de manera continua la formación de estrógenos en células de cáncer de mama humano; o proporciona un régimen de THS con la supresión excepcional de la formación de estrógenos en células de cáncer de mama humano. En otro aspecto más, la presente invención proporciona un régimen de THS que minimiza la exposición de la mama al estrógeno formado localmente; proporciona un régimen de THS que reduce la exposición de la mama a los estrógenos, en comparación con otros regímenes de THS de dosis de estrógeno equivalentes; o proporciona un régimen de THS con los niveles más bajos de exposición de la mama a los estrógenos en comparación con otros regímenes de THS de dosis de estrógeno equivalentes. En otro aspecto, la presente invención proporciona un régimen de THS que tiende a limitar la exposición de la mama a aquellos niveles de estrógeno que son administrados en el régimen.

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En otro aspecto más, la presente invención proporciona un régimen de THS que proporciona a la mama un efecto protector excepcional y continuo. 35

En otro aspecto, la presente invención proporciona un régimen de THS que minimiza los factores de riesgo asociados con el cáncer de mama. Referencias

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1. Inhibition of Estrone Sulfatase Enzyme in Human Placenta and Human Breast Carcinoma; T.R. JEFFRY EVANS y col., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., Vol. 39, Nº 4A, 1991, pp. 493-499. 2. In Vitro Effect of Synthetic Progestogens on Estrone Sulfatase Activity in Human Breast Carcinoma; ODILE PROST-AVALLET y col., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., Vol. 39, Nº 6, 1991, pp. 967-973.

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3. Effect of the progestagen R5020 (promegestone) and of progesterone on the uptake and on the transformation of estrone sulfate in MCF-7 and T-47d human mammary cancer cells: correlation with progesterone receptor levels; JORGE R. PASQUALINI y col., Cancer Letters, 66 (1992) 55-60, Elsevier Scientific Publishers Ireland Ltd. 4. Action of Danazol On The Conversion Of Estrone Sulfate To Estradiol And On The Sulfatase Activity In The MCF-7, T-47D y MDA-MB-231 Human Mammary Cancer Cells; B-L. NGUYEN y col., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., Vol. 46, Nº 1, 1993, pp. 17-23. 5. Effect of Promegestone, Tamoxifen, 4-Hidroxytamoxifen and ICI 164,384 on the Oestrone Sulphatase Activity of Human Breast Cancer Cells; GERARD CHETRITE y col., Anticancer Research 13: 931-934 (1993).

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6. Inhibition Of Steroid Sulfatase Activity By Danazol; KJELL CARLSTROM y col., Acta Obstet. Gynecol. Scand. Suppl. 107-111. 60

7. Effect of the Progestagen Promegestone (R-5020) on mRNA of the Oestrone Sulphatase in the MCF-7 Human Mammary Cancer Cells; JORGE R. PASQUALINI y col., Anticancer Research 14: 1589-1594 (1994). 8. Effect of Nomegestrol Acetate on Estrone-sulfatase and 17β-Hydroxysteroid Dehydrogenase Activities in Human Breast Cancer Cells; G. CHETRITE y col., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., Vol. 58, Nº 5/6, pp. 525-531, 1996.

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9. Effect of Tibolone (Org OD14) and its Metabolites on Estrone Sulphatase Activity in MCF-7 and T-47D Mammary Cancer Cells; G. CHETRITE y col., Anticancer Research 17: 135-140 (1997). 3

ES 2 269 999 T3 10. Progestins and Breast Cancer; J.R. PASQUALINI y col., J. Steroid Biochem. Molec. Biol., Vol. 65, Nº 1-6, pp. 225-235, 1998. 5

11. Control of Estradiol In Human Breast Cancer. Effect of Medrogestone on Sulfatase, 17β-Hidroxysteroid Dehydrogenase And Sulfotransferase Activities in Human Breast Cancer Cells; JORGE RAUL PASQUALINI y col., Euro. Congr. On Menopause (1998), pp. 625-633. 12. Constitutive Expression of the Steroid Sulfatase Gene Supports the Growth of MCF-7 Human Breast Cancer Cells in Vitro and in Vivo; MATTIE R. JAMES y col., Endocrinology, Vol. 142, Nº 4, pp. 1497-1505.

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13. Concentrations of Estrone, Estradiol and Their Sulfates, And Evaluation of Sulfatase and Aromatase Activities in Patients with Breast Fibroadenoma; J.R. PASQUALINI y col., Int. J. Cancer, 70, pp. 639-643 (1997). Resumen de la invención 15

De acuerdo con la presente invención, se proporciona la utilización de una combinación de estrógeno y norgestimato o norelgestromina para la fabricación de un medicamento para ser utilizado en un método de prevención del cáncer de mama a la vez que proporciona terapia hormonal sustitutiva, según se define en las reivindicaciones adjuntas. 20

En una realización preferida, tal terapia comprende un ciclo de unidades de dosificación separadas adaptadas para la administración oral diaria consecutiva durante la duración del ciclo, donde dichas unidades de dosificación contienen, en mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable, una combinación de un estrógeno en una cantidad eficaz para sustitución hormonal, y norgestimato o norelgestromina en una cantidad que es a la vez una cantidad protectora del endometrio eficaz y una cantidad protectora de la mama eficaz.

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En otra realización preferida, tal terapia comprende uno o más parches transdérmicos adaptados para la administración consecutiva durante la duración del ciclo, donde dichos parches transdérmicos de dicha unidad contienen colectivamente para un ciclo de administración continua una combinación de un estrógeno en una cantidad eficaz para sustitución hormonal, y norgestimato o norelgestromina en una cantidad que es a la vez una cantidad protectora del endometrio eficaz y una cantidad protectora de la mama eficaz. En una realización preferida adicional, tal terapia comprende uno o más anillos vaginales adaptados para la administración consecutiva durante la duración del ciclo, donde dichos anillos vaginales de dicha unidad contienen colectivamente para un ciclo de administración continua una combinación de un estrógeno en una cantidad eficaz para sustitución hormonal, y norgestimato o norelgestromina es una cantidad que es a la vez una cantidad protectora del endometrio eficaz y una cantidad protectora de la mama eficaz. Los solicitantes han descubierto sorprendentemente que se espera que tal régimen tenga niveles reducidos de estrógeno en la mama en comparación con otras terapias hormonales sustitutivas que tienen dosis equivalentes de estrógenos. Breve descripción de las figuras

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Figura 1 - Muestra el proceso enzimático implicado en la formación y transformación de estrógenos en cánceres de mama humanos. Descripción detallada de la invención

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El régimen de THS de acuerdo con la presente invención es administrado continuamente ciclo tras ciclo, sin interrupción de la administración de estrógeno ni de progestágeno, a una mujer post-menopáusica o deficiente en estrógenos con necesidad de tal terapia. El término mujeres deficientes en estrógenos tiene la intención de referirse a aquellas mujeres que son deficientes en estrógenos prematuramente debido a medios naturales o artificiales tales como castración química, extracción del útero y/o de los ovarios, etc. El método de administración puede ser transdérmico, vaginal u oral. Cuando la administración es transdérmica, un parche adecuado es llevado continuamente sustituyéndolo cuando se requiera. Cuando la administración es vaginal, un dispositivo vaginal adecuado, tal como un anillo, es insertado de manera continua sustituyéndolo cuando se requiera. Cuando la administración es oral, se administran diariamente unidades de dosificación oral. El ciclo de administración dura normalmente 28 días o más, pero puede ser más largo, de hasta 60 días e incluso de hasta 90 días, o más corto, por debajo de 21 días. En el caso de un régimen de THS, el ciclo puede incluir un régimen en el cual haya una variación día a día o semana a semana de la dosis de agente activo administrado de acuerdo con un patrón fijado. En tal caso, el régimen que incluye variación de la dosis es repetido ciclo tras ciclo. El ciclo puede ser también un régimen en el que no haya variación de la dosis del agente activo administrado. En tal caso, el ciclo no es más que una convención que representa una unidad útil de administración o venta. En cualquiera de los casos, un producto para THS que utiliza el régimen de THS en cuestión es prescrito, vendido y administrado en unidades de ciclo. El producto de THS basado en un ciclo podría ser de 1 a 10 anillos vaginales que son insertados y sustituidos posteriormente cada 7, 14 ó 21 días según su diseño. El producto de THS basado en un ciclo podría ser de 2 a 10 parches transdérmicos que son fijados y posteriormente sustituidos cada 7, 10 ó 14 días según su diseño. 4

ES 2 269 999 T3 El producto de THS basado en un ciclo podría ser de 21, 28, 56 o más tabletas que son administradas oralmente a diario. 5

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“Estrógeno” se refiere en la presente a un modulador de los receptores estrogénicos que tiene un efecto agonista o antagonista sobre el receptor estrogénico, pero preferiblemente un efecto agonista. Puede emplearse cualquier estrógeno convencional como componente adecuado en el régimen de THS de esta invención. Además del 17β-estradiol comúnmente utilizado, puede emplearse también como componente estrogénico 17α-etinilestradiol, ésteres y éteres de 17α-etinilestradiol tales como, por ejemplo, 3-dimetilamino propionato de 17α-etinilestradiol, 3-ciclopentil éter de 17α-etinilestradiol (quienestrol) y 3-metil éter de 17α-etinilestradiol (mestranol). Pueden emplearse también estrógenos naturales tales como estrona, sulfato de estrona, sal piperazina del sulfato de estrona, estradiol y estriol, y sus ésteres. Son bien conocidos para esta utilización estrógenos equinos conjugados (EEC) o estrógenos conjugados (EC). Estrógenos sintéticos o moduladores estrogénicos sintéticos adecuados para ser utilizados en la presente incluyen tamoxifeno, toremifeno, ormeloxifeno, modrefeno, fulvestrant, lasofoxifeno, bazedoxifeno (TSE-424), arzoxifeno, tesmilifeno, miproxifeno, EM-652 (Sch-57068), 3339 (Aventis), Ospemifeno (Fc 1271A), ERA-923, GTx006, HM-101, DPC-974, A-007, SP-8490, WAY-140424, tibolona, levodoxifeno, raloxifeno. El estrógeno preferido es 17β-estradiol, el cual es bien conocido en la técnica de la terapia hormonal sustitutiva y se utiliza actualmente en productos para THS comercialmente disponibles. El objetivo de cualquier régimen de THS es aliviar uno o más de los diferentes síntomas de la menopausia, o de una condición inducida similar a la menopausia, mediante la administración de estrógeno suficiente. El estrógeno podría ser administrado en cantidades suficientes para aliviar los sofocos y los sudores nocturnos con el fin de mejorar los patrones de sueño y la sensación de bienestar general de la paciente. El estrógeno podría ser administrado en cantidades suficientes para proteger contra la pérdida de calcio del esqueleto, especialmente de los cuerpos vertebrales, impidiendo fracturas por aplastamiento y la pérdida de altura corporal. El estrógeno podría ser administrado en cantidad suficiente para reducir el riesgo de muerte por una enfermedad cardíaca isquémica. El estrógeno podría ser administrado en cantidad suficiente para proteger la vascularidad y la salud de la mucosa vaginal y del tracto urinario. En la presente, la administración de una cantidad de estrógeno para sustitución hormonal a mujeres post-menopáusicas o deficientes en estrógenos con necesidad de tal terapia, proporcionaría un alivio parcial o total en relación con uno o más de estos objetivos.

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En una caracterización de una cantidad de estrógeno para sustitución hormonal, se administra por cualquier vía adecuada estrógeno suficiente de tal manera que sea equivalente en su efecto a una cantidad de 0,25 mg aproximadamente a 2,5 mg aproximadamente de 17β-estradiol administrado oralmente. Preferiblemente, tal estrógeno debe ser administrado en una cantidad que sea equivalente en cuanto a su efecto a una cantidad de 0,5 mg aproximadamente a 1,5 mg aproximadamente de 17β-estradiol administrado oralmente. En otra caracterización de una cantidad de estrógeno para sustitución hormonal, se administra por cualquier vía adecuada estrógeno suficiente de tal manera que sea equivalente en su efecto a una cantidad de 10 mcg aproximadamente a 200 mcg aproximadamente de 17α-etinilestradiol administrado oralmente. Preferiblemente, tal estrógeno debería ser administrado en una cantidad que fuera equivalente en su efecto a un rango de 25 mcg aproximadamente a 100 mcg aproximadamente de 17α-etinilestradiol administrado oralmente. Se deduce que en el caso de una tableta oral diaria, se administrará una dosis preferida de 17β-estradiol (o una cantidad equivalente de un estrógeno adecuado para THS) entre 0,25 mg aproximadamente y 2,5 mg aproximadamente, y más preferiblemente entre 0,5 mg aproximadamente y 1,5 mg aproximadamente. Tabletas orales diarias específicas podrían contener 0,5, 0,75, 1,0 ó 1,5 mg de 17β-estradiol. En el caso de un anillo vaginal, el anillo preferido suministra a la circulación sistémica una dosis diaria de 17β-estradiol (o una cantidad equivalente de un estrógeno adecuado para THS) entre 0,15 mg aproximadamente y 1,5 mg aproximadamente, y más preferiblemente entre 0,3 mg aproximadamente y 0,9 mg aproximadamente. Un anillo vaginal específico podría ser insertado durante una semana y proporcionar a la circulación sistémica en ese periodo de tiempo una dosis diaria media de 0,3, 0,45, 0,6 ó 0,9 mg de 17β-estradiol. En el caso de un parche transdérmico, un parche preferido proporciona a la circulación sistémica una dosis diaria de 17β-estradiol (o una cantidad equivalente de un estrógeno adecuado para THS) entre 0,15 mg aproximadamente y 1,5 mg aproximadamente, y más preferiblemente entre 0,3 mg aproximadamente y 0,9 mg aproximadamente. Un parche específico podría ser llevado durante una semana y suministrar a la superficie de la piel en ese periodo de tiempo una dosis diaria media de 0,3, 0,45, 0,6 ó 0,9 mg de 17β-estradiol. Independientemente de todo lo anterior, en la presente se desea utilizar cantidades convencionales de estrógeno, ya que no es el componente estrogénico el que es crítico para la invención. Las personas expertas en la técnica conocen bien las dosis de estrógeno continuo requeridas en los regímenes de THS. Norgestimato (NGM) o norelgestromina (NGMN) son los progestágenos utilizados en la presente y son conocidos cada uno de ellos en la técnica de la terapia de sustitución hormonal. De hecho, el norgestimato es utilizado actualmente en al menos un producto para THS disponible comercialmente. El progestágeno preferido es norelgestromina (17-dnorgestimato). La norelgestromina es el metabolito principal del norgestimato en humanos, siendo convertido un 80% e incluso más de norgestimato en norelgestromina in vivo. Por esta razón, se deduce para el norgestimato la inhibición de la actividad del enzima sulfatasa que se ha demostrado para la norelgestromina. Por supuesto, para obtener una inhibición equivalente de la actividad del enzima sulfatasa, puede ser necesario administrar una dosis mayor de norgestimato en comparación con cualquier dosis de norelgestromina.

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Los objetivos de cualquier régimen de THS se consiguen básicamente por la administración de un estrógeno, que en la práctica es normalmente 17β-estradiol. El NGM o la NGMN se administra junto con el estrógeno no tanto para tratar la condición en cuestión sino, en parte, para que se oponga a la acción del estrógeno en el endometrio. Se ha 5

ES 2 269 999 T3 observado que la administración de larga duración de un estrógeno que no tiene oposición por la administración de NGM o de NGMN, da lugar a un incremento sustancial de la incidencia de cáncer de endometrio. Por tanto, es un primer requisito del régimen de THS de la presente que se administre NGM o NGMN en una cantidad que sea una cantidad protectora del endometrio eficaz. 5

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De acuerdo con la presente invención, es actualmente un requisito adicional que el NGM o la NGMN sean administrados a mujeres post-menopáusicas o deficientes en estrógenos con necesidad de terapia de sustitución hormonal en una cantidad que sea una cantidad protectora de la mama eficaz. En una caracterización de una cantidad de NGM o NGMN protectora de la mama y asumiendo una cantidad protectora del endometrio, se administra suficiente compuesto activo para proporcionar, durante una porción sustancial de cada día, una supresión sustancial de la actividad sulfatasa, por ejemplo del 50% o mayor y, preferiblemente, del 67% o mayor y muy preferiblemente del 75% o mayor. Una porción sustancial del día quiere indicar un periodo de al menos 4 horas, pero en la invención podría significar un periodo de al menos 8 horas o 12 horas o incluso 24 horas. En el caso de una tableta oral diaria, se administra una dosis preferida de norgestimato o norelgestromina entre 30 µg y 500 µg, y más preferiblemente entre 45 µg y 300 µg. Tabletas orales diarias específicas podrían contener 45, 60, 90, 120, 180 ó 250 µg de norgestimato o norelgestromina. En el caso de un anillo vaginal, un anillo preferido proporciona a la circulación sistémica una dosis diaria de norgestimato o norelgestromina entre 20 µg y 300 µg, y más preferiblemente entre 30 µg y 180 µg. Un anillo vaginal específico podría ser insertado durante una semana y proporcionar a la circulación sistémica en ese periodo de tiempo una dosis diaria media de 25, 35, 50, 70, 100 ó 140 µg de norgestimato o norelgestromina. En el caso de un parche transdérmico, un parche preferido proporciona a la circulación sistémica una dosis diaria de norgestimato o norelgestromina entre 20 µg y 300 µg, y más preferiblemente entre 30 µg y 180 µg. Un parche específico podría ser llevado durante una semana y suministrar a la circulación sistémica en ese periodo de tiempo una dosis diaria media de 25, 35, 50, 70, 100 ó 140 µg de norgestimato o norelgestromina. En la Tabla 1, se describen regímenes preferidos de THS orales diarios de acuerdo con la presente invención que contienen norgestimato (NGM) o norelgestromina (NGMN).

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En la Tabla 2, se describen regímenes transdérmicos preferidos de THS o regímenes de anillos vaginales utilizando parches o anillos semanales que contienen norgestimato (NGM) o norelgestromina (NGMN). Los parches o anillos semanales proporcionan a la circulación sistémica la dosis diaria media descrita de NGM o NGMN.

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El estrógeno y NGM o NGMN son administrados oralmente preferiblemente juntos en tabletas que contienen también un vehículo no tóxico farmacéuticamente aceptable, pero pueden ser también administrados separadamente. Los vehículos adecuados incluyen carbonato de magnesio, estearato de magnesio, calcio, lactosa, azúcar, peptina, dextrina, almidón, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, etc. La tableta puede contener también una o más sustancias 8

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que actúen como diluyentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes o agentes desintegrantes de tabletas así como materiales para encapsulación. En general, los agentes activos son procesados junto con los aditivos, vehículos y/o agentes para mejorar el sabor habituales empleados normalmente en farmacia galénica, de acuerdo con prácticas farmacéuticas aceptadas de manera general. Las tabletas que contienen las hormonas podrían contener también suplementos nutritivos tales como, por ejemplo, suplementos de hierro, ácido fólico, calcio, vitamina B6 , vitamina B12 , etc. En la fabricación de una tableta típica, los agentes activos son granulados con lactosa deshidratada por aspersión, un agente lubricante y un colorante, y comprimidas. Las tabletas orales son envasadas preferiblemente en forma de un kit o envase farmacéutico en el que las dosis diarias están ordenadas para su administración secuencial correcta. Esta invención se refiere también, por tanto, a una unidad farmacéutica que contiene las tabletas del régimen en una secuencia fijada, sincronizada, donde la secuencia o la disposición de las unidades de dosificación corresponden al régimen de administración diaria. El estrógeno y NGM o NGMN pueden ser administrados juntos transdérmicamente mediante la utilización de un parche. En términos generales, los parches son dispositivos que contienen como mínimo una matriz reservorio del fármaco para contener el fármaco y medir el depósito o el suministro del fármaco a la piel, un soporte y una capa adhesiva para adherir el dispositivo al paciente. El dispositivo puede contener otras capas tal como una capa para controlar la velocidad de liberación del fármaco con el fin de modular la velocidad de administración, y similares. El dispositivo puede contener intensificadores de la permeabilidad para incrementar la tasa de penetración de los fármacos a través de la piel. Los parches son bien conocidos y comprendidos por las personas expertas en la técnica. Los parches se emplean actualmente en productos comercializados para la administración de ciertos progestágenos y para la administración de 17β-estradiol específicamente. Parches específicos e incluso su aplicación a esteroides del tipo descrito en la presente están descritos en las Pat. de EE.UU. Nos 5474783; 5656286; 5958446; 6024976; 5252334; 5006342 y 4906463.

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El estrógeno y NGM o NGMN pueden ser administrados juntos intravaginalmente mediante la utilización de un anillo. En términos generales, los anillos son dispositivos que tienen una porción o cuerpo elastomérico en el que está disperso el esteroide activo y que actúa como reservorio y medidor de la difusión del compuesto activo al revestimiento de la vagina. El anillo puede estar compuesto totalmente por elastómero con el esteroide disperso a través del mismo homogéneamente según está descrito en la Pat. de EE.UU. Nº 3545397. El anillo puede tener un núcleo central interno inerte rodeado por una capa elastomérica que contiene el agente activo según está descrito en la Pat. de EE.UU. Nº 4012496. El anillo puede tener un núcleo central interno conteniendo el agente activo elastomérico rodeado por una capa elastomérica fina que inicialmente no contiene agente activo. El anillo puede tener un núcleo central inerte rodeado por una capa elastomérica que contiene el agente activo y rodeado además por una capa externa elastomérica de grosor variable que inicialmente no contiene agente activo, según está descrito en la Pat. de EE.UU. Nº 4292965. El elastómero, el diseño en capas del anillo, el área de su superficie, la concentración del agente activo, la naturaleza del agente activo, etc., se combinan todos para determinar la tasa de liberación del compuesto activo. Los anillos son bien conocidos y comprendidos por las personas expertas en la técnica. Los anillos se emplean actualmente en productos comercializados para la administración de ciertos esteroides. Anillos específicos adicionales y su aplicación para esteroides del tipo descrito en la presente están descritos en las Pats. de EE.UU. Nos 4871543 y 5188835. Métodos de los ensayos biológicos

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Productos químicos El sulfato de [6,7-3 H(N)]-estrona (3 H-E1 S), sal de amonio (actividad específica 53 Ci/mmol) y el [4-14 C]-estradiol (14 C-E2 ) (actividad específica 57 mCi/mmol) fueron adquiridos a New England Nuclear Division (DuPont de Nemours, Les Ulls, Francia). La pureza de los radiosótopos fue determinada mediante cromatografía en capa fina (TLC) en el sistema apropiado antes de su utilización. E1 S, sal de amonio, E1 y E2 sin marcar (grado analítico), fueron obtenidos de Sigma-Aldrich Chimie (St Quentin Fallavier, Francia). El 17-deacetilnorgestimato (NGMN; oxima de 13-etil17-hidroxi-18,19-dinor-17α-pregn-4-en-20-in-3-ona) fue una donación de R.W. Johnson Pharmaceutical Research Institute, Medicinal Chemistry Department (Raritan, NJ, EE.UU.); el acetato de medroxiprogesterona (MPA; 17αacetoxi-6α-metilprogesterona) fue obtenido de Sigma-Aldrich Chimie. Todos los demás productos químicos eran del máximo grado disponible comercialmente. Cultivo celular

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Las líneas celulares de cáncer mamario humano dependientes de hormonas MCF-7 y T-47D fueron cultivadas en Medio Esencial Mínimo de Eagle (MEM) tamponado con 10 mmoles/l de HEPES (pH 7,6), suplementado con 2 mmoles/l de L-glutamina, 100 U/ml de penicilina-estreptomicina y un 5% de suero de ternera fetal (FCS) (A.T.G.C., Marne-la-Vallée, Francia) para T-47D, o un 10% de FCS para las células MCF-7, e incubadas a 37ºC en una atmósfera humidificada de un 5% de CO2 . Los medios fueron cambiados dos veces por semana. Las células fueron pasadas cada 10-12 días y resembradas en frascos de 75 cm2 (A.T.G.C.) a 3 x 106 células/frasco. Cuatro días antes de los experimentos, las células fueron transferidas a MEM que contenía un 5% de FCS tratado desprovisto de esteroides. El FCS había sido tratado durante una noche a 4ºC con carbón activo revestido con dextrano (DCC) (0,1-1% p/v, DCC-FCS). Las líneas celulares MCF-7 y T-47D utilizadas en la presente fueron depositadas de acuerdo con el Tratado de Budapest bajo las referencias MCF7_JJPRD y T47D_JJPRD el 17 de Mayo de 2002 en The Belgian 9

ES 2 269 999 T3 Co-ordinated Collections of Microorganisms (BCCM), Laboratorium voor Moleculaire Biologie, Universiteit Gent, K.L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Gent, Bélgica y están disponibles públicamente bajo los números de acceso LMBP 5862CB y LMBP 5863CB, respectivamente. 5

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Aislamiento y cuantificación de [3 H]-estradiol a partir de células de cáncer mamario humano incubadas con [3 H]E1 S Células preconfluentes fueron incubadas durante 4 horas a 37ºC en MEM-DCC-FCS con la adición de 5 x 10−9 moles/l de [3 H]-E1 S solo (células control) o en combinación con los diferentes compuestos: NGMN o MPA, disueltos en etanol (concentración final < 0,2%), en un rango de concentraciones de 5 x 10−5 - 5 x 10−9 moles/l. Las células control recibieron únicamente el vehículo etanol. Después de 24 horas, se retiró el medio, se lavaron las células 2 veces con Solución Salina Tamponada de Hanks enfriada en hielo (HBSS, sin calcio ni magnesio) (A.T.G.C.) y se recogieron mediante rascado. Después de centrifugar, la pella fue tratada con etanol 80% y se extrajo la radiactividad durante al menos 24 horas a -20ºC. Se determinó la captación de radiactividad por las células en el sobrenadante etanólico y se evaluó el contenido de ADN en la pella restante de acuerdo con Burton, Biochem. Journal 62:315-323, 1956. Se añadió [14 C]-E2 (5000 dpm) para monitorizar las pérdidas analíticas y se utilizaron E1 y E2 sin marcar (50 µg) como vehículos e indicadores de referencia. En los extractos etanólicos totales, se aisló E2 mediante cromatografía en capa fina (TLC) en gel de sílice 60F254 (Merck, Darmstadt, Alemania), revelada con un sistema de cloroformo-acetato de etilo (4:1, v/v). Después de la visualización de los estrógenos bajo U.V. a 254 nm, las áreas apropiadas fueron cortadas en pequeños fragmentos, colocadas en viales de centelleo líquido con etanol (0,5 ml) y se dejaron extraer durante 30 minutos. Se añadieron 3 ml de Opti-fluor (Packard, Rungis, Francia) y los viales fueron analizados para determinar el contenido de 3 H y 14 C con corrección de la amortiguación mediante un estándar externo. La evaluación cuantitativa de E2 fue calculada como porcentaje de la radiactividad total asociada con las células y expresada posteriormente como fmoles de E2 formado/mg de ADN de E1 S.

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Análisis estadístico

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Los datos están expresados como valores de la media ± error estándar de la media (ESM). Se utilizó el test t de Student para determinar la significación de las diferencias entre las medias; valores de p ≤ 0,05 fueron considerados significativos. Resultados

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La Tabla 3 muestra los efectos de concentraciones de NGMN y de acetato de medroxiprogesterona (MPA) sobre la conversión de E1 S en E2 en la línea celular de cáncer de mama humano dependiente de hormonas T-47D. Los datos son la media ± ESM de determinaciones duplicadas de 3 experimentos independientes. * p ≤ 0,05 frente a los valores del control (células no tratadas); ** p ≤ 0,005 frente a los valores del control (células no tratadas). TABLA 3

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La Tabla 4 muestra los efectos de concentraciones de NGMN y de acetato de medroxiprogesterona (MPA) sobre la conversión de E1 S en E2 en la línea celular de cáncer de mama humano dependiente de hormonas MCF-7. Los datos son la media ± ESM de determinaciones duplicadas de 3 experimentos independientes. * p ≤ 0,05 frente a los valores del control (células no tratadas); ** p ≤ 0,005 frente a los valores del control (células no tratadas).

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ES 2 269 999 T3 TABLA 4

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La Tabla 5 muestra los valores de la CI50 de NGMN y del acetato de medroxiprogesterona (MPA) en la conversión de E1 S a E2 en las líneas celulares de cáncer de mama humano dependientes de hormonas MCF-7 y T-47D. Los valores de la CI50 corresponden al 50% de inhibición de la conversión de E1 S en E2 y se determinaron utilizando análisis de regresión no lineal.

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ES 2 269 999 T3 REIVINDICACIONES 5

1. Utilización de una combinación de estrógeno y norgestimato o norelgestromina en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en un método de prevención del cáncer de mama a la vez que proporciona terapia de sustitución hormonal, que comprende la etapa de administración continua a una mujer post-menopáusica o deficiente en estrógenos con necesidad de tal terapia, de una combinación de una cantidad de estrógeno eficaz para sustitución hormonal y de una cantidad protectora del endometrio eficaz y de una cantidad protectora de la mama eficaz de norgestimato o norelgestromina.

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2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la etapa de administración de manera continua a una mujer post-menopáusica o deficiente en estrógenos con necesidad de tal terapia, comprende un ciclo de unidades de dosificación separadas adaptadas para la administración oral diaria consecutiva durante la duración del ciclo. 15

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3. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la etapa de administración de manera continua a una mujer post-menopáusica o deficiente en estrógenos con necesidad de tal terapia comprende uno o más parches transdérmicos adaptados para la administración consecutiva durante la duración del ciclo. 4. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la etapa de administración de manera continua a una mujer post-menopáusica o deficiente en estrógenos con necesidad de tal terapia comprende uno o más anillos vaginales adaptados para la administración consecutiva durante la duración del ciclo.

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