19

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

A61Q 7/02 (2006.01) A61K 8/19 (2006.01) A61K 8/49 (2006.01)

ESPAÑA

12

11 Número de publicación: 2 275 356

51 Int. Cl.:

TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 99951968 .9

86 Fecha de presentación : 14.10.1999

87 Número de publicación de la solicitud: 1124531

87 Fecha de publicación de la solicitud: 22.08.2001

54 Título: Reducción del crecimiento del pelo.

30 Prioridad: 27.10.1998 US 179267

73 Titular/es: The Gillette Company

Prudential Tower Building Boston, Massachusetts 02199, US

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

01.06.2007

72 Inventor/es: Styczynski, Peter y

Ahluwalia, Gurpreet, S.

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Elzaburu Márquez, Alberto

ES 2 275 356 T3

01.06.2007

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. Pº de la Castellana, 75 – 28071 Madrid

ES 2 275 356 T3 DESCRIPCIÓN Reducción del crecimiento del pelo. 5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

La invención se refiere a la reducción del crecimiento del pelo en mamíferos para propósitos cosméticos. Una función principal del pelo de los mamíferos es proporcionar protección ambiental. Sin embargo, esta función se ha perdido prácticamente en los seres humanos, en los que el pelo se mantiene o elimina de varias partes del cuerpo esencialmente por razones cosméticas. Por ejemplo, se prefiere generalmente mantener el pelo sobre el cuero cabelludo pero no sobre la cara. Se han empleado varios procedimientos para eliminar el pelo no deseado, que incluyen afeitado, electrolisis, cremas de depilado o lociones de depilado, ceras, depilado y antiandrógenos terapéuticos. Estos procedimientos convencionales generalmente tienen inconvenientes asociados con ellos. El afeitado, por ejemplo, puede causar heridas y cortes, y puede originar una percepción de un aumento en la velocidad de crecimiento de nuevo del pelo. El afeitado, puede también dejar una barba incipiente indeseada. La electrolisis, por otra parte, puede mantener un área tratada libre de pelo por periodos prolongados de tiempo, pero puede ser cara, dolorosa, y algunas veces deja cicatriz. Las cremas de depilado, aunque muy eficaces, típicamente no se recomiendan para uso frecuente debido a su alto potencial de irritabilidad. La cera y la depilación pueden causar dolor, molestia, y mala eliminación del cabello corto. Finalmente, los antiandrógenos, que se han usado para tratar el hirsutismo femenino, pueden tener efectos secundarios indeseados. Se ha descrito previamente que el ritmo y tipo de crecimiento del pelo puede alterarse aplicando inhibidores de ciertas enzimas a la piel. Estos inhibidores incluyen inhibidores de 5-alfa reductasa, ornitina descarboxilasa, S-adenosilmetionina descarboxilasa, gamaglutamil transpeptidasa, y transglutaminasa. Véase, por ejemplo, Breuer et al., documento de patente de los Estados Unidos Nº. 4.885.289; Shander, documento de patente de los Estados Unidos Nº. 4.720.489; Ahluwalia, documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.095.007; Ahluwalia et al., documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.096.911; Shander et al., documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.132.293, documento de patente internacional WO 96/26712, que describe un método de inhibir el crecimiento del pelo de un mamífero aplicando una composición dermatológicamente aceptable que contiene un supresor no esteroídico de la angiogénesis. La fosfatasa alcalina es una metaloenzima de zinc de amplia distribución que se cree que contribuye al mantenimiento de la homeostasis celular. Aunque la función precisa de la fosfatasa alcalina en el mantenimiento de la homeostasis celular permanece sin aclarar, se han sugerido numerosas actividades fisiológicas para esta enzima. Tales actividades incluyen controlar los niveles de fosfato inorgánico, regular el transporte del fosfato inorgánico, actuar como una proteína de unión de calcio y una ATPasa magnésica de calcio, y funcionar como una fosfatasa fosfoproteica específica de tirosina. En adición a su actividad enzimática, las concentraciones de fosfatasa alcalina se han usado como marcadores de diagnóstico en la evaluación clínica de numerosas enfermedades. Por ejemplo, la fosfatasa alcalina se usa como un indicador no específico para cáncer para caracterizar los caminos de resorción del hueso en individuos susceptibles a osteoporosis. Se han clonado y secuenciado cuatro genes de fosfatasa alcalina. En adición, sus localizaciones cromosómicas han sido determinadas y se ha estudiado la regulación de estos genes. Las fosfatasas alcalinas humanas están codificadas por una familia de genes que incluyen cuatro loci. Al extremo del largo cromosoma 2, bandas q34-q37, están agrupados tres genes de fosfatasa alcalina específica de tejido: intestinal, de placenta, y de célula germinal. Un gen de fosfatasa alcalina no específica de tejido se localiza al extremo del brazo corto del cromosoma 1, bandas p36.1-p34. La homología de la secuencia de aminoácidos para las enzimas específicas de tejido es 90-98%, mientras que la forma no específica es solamente de 50-60% de homología con cualquiera de las formas específicas. La fosfatasa alcalina humana exhibe una característica única no vista en la fosfatasa alcalina de especies inferiores (procariotas), inhibición no competitiva por ciertos L-aminoácidos (Millan, Clinica Chimica Acta. 209:123-129, 1992). Por ejemplo, triptófano, fenilalanina y leucina inhiben la forma específica de tejido de la fosfatasa alcalina en una forma estereoselectiva en la que solamente la forma L es activa. La L-homeoarginina actúa como un inhibidor de la forma no específica de tejido de la fosfatasa alcalina en varias especies. La invención se refiere a la reducción del crecimiento del pelo indeseado de mamíferos (incluyendo el ser humano), particularmente el crecimiento del pelo estimulado por andrógenos, mediante la aplicación sobre la piel de una composición que incluye un inhibidor de la fosfatasa alcalina en una cantidad eficaz para reducir el crecimiento del pelo. El crecimiento del pelo indeseado que se reduce puede ser crecimiento de pelo normal, o crecimiento de pelo ocasionado por un trastorno por enfermedad o anormal. Otras características y ventajas de la invención pueden ser aparentes por la descripción de las realizaciones preferidas aquí, y de las reivindicaciones. La composición preferida incluye al menos un inhibidor de la fosfatasa alcalina en un vehículo aceptable en dermatología y/o cosmética. La composición puede ser un sólido, semisólido, o líquido. La composición es un producto 2

ES 2 275 356 T3 cosmético en forma de, por ejemplo, ungüento, loción, espuma, crema, gel, o solución hidroalcohólica. La composición puede también estar en forma de preparación para afeitado o una loción para después del afeitado. El vehículo mismo puede ser inerte o puede poseer beneficios cosméticos en si mismo. 5

10

15

20

25

30

35

40

Los inhibidores de la fosfatasa alcalina usados en el método cosmético de la invención son tetramisol([±]-2,3,5,6tetrahidro-6-fenil-imidazol[2,1-b]tiazol]), ortovanadato, levamisol (L[-]-2,3,5,6-tetrahidro-6-fenil-imidazo[2,1-b]tiazol]) y las sales de los compuestos anteriores, nitrato de vanadio, y nitrato de galio. La composición puede incluir más de un inhibidor de la fosfatasa alcalina. Además, la composición puede incluir uno o más de otros tipos de agentes reductores del crecimiento del pelo, tales como aquellos descritos en el documento de patente de los Estados Unidos Nº.4.885.289, documento de patente de los Estados Unidos Nº. 4.720.489; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.132.293; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.096.911; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.095.007; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.143.925; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.328.686; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.440.090; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.364.885; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.411.991; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.648.394; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.468.476; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.475.763; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.455.608; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.674.477; documento de patente de los Estados Unidos Nº. 5.728.736; documento de patente de los Estados Unidos Nº.5.652.273: documento de patente internacional WO 94/27586; documento de patente internacional WO 94/27563; y documento de patente internacional WO 98/03149. La concentración del inhibidor de la fosfatasa alcalina en la composición puede variarse dentro de un amplio intervalo hasta una solución saturada, preferiblemente de 0,1% a 30% en peso o aún mayor; la reducción del crecimiento del pelo aumenta a medida que la cantidad de inhibidor aplicado aumenta por unidad de área de la piel. La cantidad máxima eficazmente aplicada está limitada solamente por la velocidad a la que el inhibidor penetra la piel. La cantidad eficaz puede estar en el intervalo, por ejemplo, de 10 a 3.000 microgramos o más por centímetro cuadrado de piel. Los vehículos pueden formularse con emolientes líquidos o sólidos, disolventes, espesantes, humectantes y/o polvos. Los emolientes incluyen alcohol estearílico, aceite de visón, alcohol cetílico, alcohol oleico, laurato de isopropilo, polietilenglicol, aceite de oliva, gel de petróleo, ácido palmítico, ácido oleico, y miristato de miristilo. Los disolventes pueden incluir alcohol etílico, isopropanol, acetona, dietilenglicol, etilenglicol, dimetilsulfóxido, y dimetilformamida. La composición también puede incluir componentes que aumenten la penetración de los inhibidores de la fosfatasa alcalina en la piel y/o el lugar de acción. Ejemplos de aumentadores de la penetración incluyen urea, propan-2-ol, éteres de polioxietileno, terpenos, ácidos grasos cis (ácido oleico, ácido palmitoleico), acetona, dimetilsulfóxido de laurocaprama, 2-pirrolidona, alcohol oleico, 3-estearato de glicerilo, colesterol, éster isopropílico del ácido mirístico, y propilenglicol. La composición también puede formularse para proporcionar un depósito dentro o sobre la superficie de la piel para proporcionar una liberación lenta continua del inhibidor. La composición también puede formularse para evaporarse lentamente de la piel, permitiendo al inhibidor tiempo extra para penetrar la piel. Lo siguiente son ejemplos de composiciones que incluyen un inhibidor de la fosfatasa alcalina.

45

Ejemplo 1 Una composición que contiene 10% en peso de tetramisol en un vehículo que contiene 68% de agua, 16% de etanol, 5% de propilenglicol, 5% de dipropilenglicol, 4% de alcohol bencílico, y 2% de carbonato de propileno. 50

Ejemplo 2 Una composición que contiene 1% en peso de ortovanadato sódico en un vehículo que contiene 68% de agua, 16% de etanol, 5% de propilenglicol, 5% de dipropilenglicol, 4% de alcohol bencílico, y 2% de carbonato de propileno. 55

Ejemplo 3

60

Una composición que contiene 10% en peso de tetramisol en un vehículo que contiene 80,84% de agua, 4,24% de estearato de glicerilo, 4,09% de 100-estearato de polietilenglicol, 3,05% de alcohol cetearílico, 2,5% de ceteareth-20, 2,22% de aceite mineral, 1,67% de alcohol de esterilo, y 0,56% de dimeticona. Ejemplo 4

65

Una composición que contiene 1% en peso de ortovanadato sódico en un vehículo que contiene 80,84% de agua, 4,24% de estearato de glicerilo, 4,09% de 100-estearato de polietilenglicol, 3,05% de alcohol cetearílico, 2,5% de ceteareth-20, 2,22% de aceite mineral, 1,67% de alcohol de esterilo, y 0,56% de dimeticona.

3

ES 2 275 356 T3 Ejemplo 5

5

10

15

20

Uno cualquiera o más de los ejemplos previos en combinación con uno o más de los aumentadores de la penetración siguientes: 2% de urea, polioxietilen-4-lauril éter (Brij-30; Laureth-4), 3-hidroxi-3,7,11-trimetil-1,6,1-dodecatrieno (nerolidol) y/o ácido cis-9-octadecenoico (ácido oleico). La composición debería ser aplicada tópicamente en un área seleccionada del cuerpo en la cual se desea reducir el crecimiento del pelo. Por ejemplo, la composición puede aplicarse a la cara, particularmente en el área de la barba de la cara, por ejemplo, la mejilla, cuello, el labio superior, y el mentón. La composición puede usarse también con otros métodos de eliminación del pelo incluyendo afeitado, depilación con cera, depilación mecánica, depilación química, eliminación del pelo por electrolisis y asistido por láser. La composición puede aplicarse también a las piernas, brazos, torso o sobacos. La composición es particularmente adecuada para reducir el crecimiento del pelo indeseado en la mujer. En seres humanos, la composición debería aplicarse una o dos veces al día, o incluso más frecuentemente, para alcanzar una reducción perceptible en el crecimiento del pelo. La percepción del crecimiento reducido del pelo podría ocurrir tan pronto como en 24 ó 48 horas (por ejemplo, entre intervalos normales de afeitado) después del uso o podría llevar, por ejemplo, tres meses. La reducción del crecimiento del pelo se demuestra cuando, por ejemplo, la velocidad del crecimiento del pelo se lentifica, la necesidad de eliminarlo se reduce, el sujeto percibe menos pelo en el sitio tratado, o cuantitativamente, cuando el peso del pelo eliminado (o sea la masa de pelo) se reduce. Prueba del hámster sirio dorado

25

30

35

40

Los hámsteres sirios dorados machos se consideran modelos aceptables para el crecimiento del pelo de la barba humana ya que muestran órganos del flanco ovalados, uno en cada lado, cada uno alrededor de 8 mm de diámetro mayor. Estos órganos producen pelo fino de color claro típico del pelaje animal que se encuentra en el cuerpo. Como respuesta a los andrógenos los órganos del flanco producen pelo grueso basto oscuro similar al pelo de la barba humana de los hombres. Para evaluar la eficacia de una composición que incluye un inhibidor de la fosfatasa alcalina, se depilan los órganos del flanco de un grupo de hámsteres aplicando un depilador químico basado en el tioglicolato (Surgex) y/o se afeitan. A un órgano de cada animal se le aplica 10 µl de vehículo solo una vez al día, mientras que se aplica al otro órgano de cada animal la misma cantidad de vehículo que contiene un inhibidor de la fosfatasa alcalina. Después de trece aplicaciones (una aplicación por día cinco días a la semana), se afeitan los órganos del flanco y se pesa la cantidad de pelo recuperado (masa de pelo) de cada uno. Se calcula la reducción en porcentaje de crecimiento del pelo substrayendo el valor de la masa de pelo (mg) del lado tratado con el compuesto de prueba del valor de la masa de pelo del lado tratado con el vehículo; el valor delta obtenido se divide a continuación por el valor de la masa de pelo del lado tratado con vehículo, y el número que se obtiene se multiplica por 100. La prueba descrita anteriormente se describirá aquí como “la prueba del hámster sirio dorado”. Las composiciones preferidas proporcionan una reducción del crecimiento del pelo de al menos de alrededor del 15%, más preferiblemente de al menos de alrededor del 30%, y lo más preferible de al menos de alrededor del 50%, cuando se ensayan en la prueba del hámster sirio dorado. Los ejemplos 1 y 2 (descritos anteriormente) se ensayaron en la prueba del hámster sirio dorado; los resultados se proporcionan en la Tabla 1: TABLA 1

45

50

55

60

65

Prueba del crecimiento del folículo piloso humano Se aislaron folículos pilosos humanos en fase de crecimiento (anagen) de tejidos de levantamientos faciales bajo un microscopio de disección usando un escalpelo y pinzas de relojero. Se cortó la piel en tiras finas exponiendo de 23 filas de folículos que podían ser diseccionados fácilmente. Se pusieron los folículos en 0,5 ml de medio de Williams E (Life Technologies, Gaithesburg, MD) suplementado con 2 mm de L-glutamina, 10 µg/ml de insulina, 10 ng/ml de hidrocortisona, 100 unidades de penicilina, 0,1 mg/ml de estreptomicina y 0,25 µg/ml de amfotericina B. Se incubaron los folículos en placas de 24 pocillos (1 folículo/pocillo) a 37º C en una atmósfera de 5% de CO2 y 95% de aire. Los folículos pilosos se registraron por video en las placas de 24 pocillos con el microscopio de disección con una potencia de 20x. Típicamente se realizaron registros iniciales en el día 0 (el día en que se pusieron los folículos en cultivo) o el día 1, y de nuevo en los días 7 o 8. Se estimó la longitud de los folículos pilosos usando un sistema de análisis de imagen (Computer Eyes and NIH Image).

4

ES 2 275 356 T3 Inhibición del crecimiento del pelo humano

5

Con estos agentes se inhibió la velocidad de crecimiento del folículo piloso humano, cuantificada por la longitud del folículo piloso, en una forma dependiente de la dosis. El tetramisol causó una inhibición de 42±5% de crecimiento del pelo a una dosis de 0,5 mM, y el ortovanadato sódico causó una inhibición de 58±8% de crecimiento del pelo a una concentración de 0,1 mM. Los resultados se dan en la Tabla 2. TABLA 2

10

15

20

25

Actividad de la fosfatasa alcalina

40

Se midió la actividad de fosfatasa alcalina usando un kit comercializado por Sigma Chemical Company. Se homogenizaron órganos enteros del flanco de hámsteres o folículos pilosos humanos separados en un tampón de Trissacarosa, pH 7,5, usando un politrón. Se centrifugó el homogenato a 12.000 x g durante 5 minutos en una microcentrífuga, y el sobrenadante se usó como la fuente de enzima. Se añadió el sobrenadante (0,1 ml) a una mezcla de reacción que contenía 0,5 ml de sustrato (fosfato de p-nitrofenol) y 0,5 ml de tampón de reacción (ambos reactivos contenidos en el kit). Se añadieron los inhibidores en un volumen de 0,1 ml. Se usó agua como control negativo. Se incubaron las mezclas de reacción durante 30 minutos a 37º C. Las mezclas de reacción se transfirieron entonces a un tubo que contenía 10 ml de NaOH 0,05 N. Se midió la absorbancia a una longitud de onda de 410 nm. Se añadió ácido clorhídrico concentrado (0,2 ml) a cada tubo y se mezclaron en los tubos. Se midió de nuevo la absorbancia a 410 nm. Los valores de la absorbancia de la segunda medida se sustrajeron de la primera medida para dar la actividad de la fosfatasa alcalina normalizada. Se optimizó la prueba con relación a la concentración de proteína (se encontró actividad lineal entre 10 y 100 µg proteína/mezcla de reacción).

45

Usando extractos de folículo piloso de los órganos del flanco del hámster se determinó que a medida que la proteína total añadida a la mezcla de reacción enzimática se aumenta de 0,01 µg hasta 0,1 microgramos/reacción la actividad enzimática aumenta de forma lineal. De forma parecida, cuando se aumenta el tiempo de reacción del ensayo de 5 minutos hasta 90 minutos, el producto de la reacción enzimática formado aumenta linealmente.

30

35

50

55

Se determinó también que las preparaciones enzimáticas de folículo de hámster o de folículos pilosos de seres humanos cuando son expuestas a concentraciones mayores de inhibidor enzimático fueron inhibidas en una forma dependiente de la concentración. Se determinó la concentración del inhibidor que ocasiona una reducción del 50% en la actividad enzimática (IC50 ) por medio de las curvas de actividad enzimática frente a la concentración de inhibidor. El inhibidor tetramisol produjo valores de IC50 de 125 µmolar y 340 µmolar para las enzimas del folículo piloso de hámster y del folículo piloso humano, respectivamente. El inhibidor ortovanadato sódico produjo valores de IC50 de 40 µmolar y 75 µmolar para las enzimas del folículo piloso de hámster y del folículo piloso humano, respectivamente. Los resultados se dan en la Tabla 3. TABLA 3

60

65

Otras realizaciones están incluidas en las reivindicaciones.

5

ES 2 275 356 T3 REIVINDICACIONES

5

10

1. Un método cosmético de reducir el crecimiento del pelo en mamíferos inhibiendo la acción de la fosfatasa alcalina que comprende seleccionar un área de la piel en la que se desea reducir el crecimiento del pelo y aplicar a dicha área de la piel una composición dermatológicamente aceptable que comprende un inhibidor de la fosfatasa alcalina seleccionado de tetramisol, ortovanadato, levamisol, y las sales de los compuestos anteriores, nitrato de vanadio o nitrato de galio en una cantidad eficaz para reducir el crecimiento del pelo. 2. El método de la reivindicación 1, en donde dicho inhibidor comprende el tetramisol, y sales del mismo. 3. El método de la reivindicación 1, en donde dicho inhibidor comprende el ortovanadato, y sales del mismo. 4. El método de la reivindicación 1, en donde dicho inhibidor comprende el levamisol, y sales del mismo.

15

5. El método de la reivindicación 1, en donde dicho inhibidor comprende el nitrato de vanadio. 6. El método de la reivindicación 1, en donde dicho inhibidor comprende el nitrato de galio.

20

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la concentración de dicho inhibidor de dicha composición está entre 0,1% y 30%. 8. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composición proporciona una reducción en el crecimiento del pelo de al menos 30% o al menos 50% cuando se ensaya en la prueba del hámster sirio dorado.

25

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde se aplica el inhibidor a la piel en una cantidad de 10 a 3.000 microgramos de dicho inhibidor por centímetro cuadrado de piel. 10. El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho mamífero es un ser humano.

30

35

11. El método de la reivindicación 10, en donde dicha área de la piel está en la cara, pierna, brazo, sobaco o torso del ser humano. 12. El método de la reivindicación 10 o 11, en donde la composición se aplica al área de la piel junto con el afeitado. 13. El método de la reivindicación 1, en donde dicho crecimiento de pelo comprende el crecimiento de pelo estimulado por los andrógenos.

40

45

14. El método de la reivindicación 1, en donde la composición incluye además un segundo componente que causa también una reducción en el crecimiento del pelo. 15. El uso de un inhibidor de la fosfatasa alcalina seleccionado de tetramisol, ortovanadato, levamisol, y las sales de los compuestos anteriores, nitrato de vanadio o nitrato de galio para la fabricación de un medicamento para inhibir el crecimiento de pelo de los mamíferos. 16. El uso según la reivindicación 15, en donde dicho inhibidor es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2-6.

50

55

60

65

6