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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL Semestre octubre 2014 – marzo 2015 1. INTRODUCCIÓN Las prácticas de laboratorio son un elemento fundamental del aprendizaje de las ciencias, considerando la naturaleza teórico – práctica de las mismas. El trabajo práctico constituye una experiencia vivencial que interioriza de mejor manera y más perecederamente los conocimientos promoviendo una enseñanza activa, participativa e individualizada y que además favorece que el estudiante desarrolle habilidades y se familiarice con el manejo de técnicas, instrumentos y aparatos La microbiología es una ciencia relativamente reciente con respecto a otras ramas de la biología, en este curso práctico de microbiología general se pretende que el alumno se inicie en el conocimiento de la biología básica de los microorganismos en su características nutricionales, morfológicos y que adquiera habilidades necesarias para su manipulación en el laboratorio ya que al iniciar su experiencia en el manejo de los microorganismo es importante una serie de recomendaciones relacionadas con reglas generales de laboratorio y procedimientos que el estudiante debe aprender para que manipule adecuadamente los microorganismos y garantizar su seguridad, la de sus compañeros y del medio ambiente. Las prácticas que se desarrollarán según la presente guía están orientadas a fortalecer el logro del resultado de aprendizaje de la asignatura de microbiología general lo cual a su vez aporta al perfil de egreso al promover con la práctica que el alumno sea capaz de “describir los procesos generales microbiológicos y con ello contribuir a los estomatológicos que es un aporte fundamental para el resto de asignaturas pre y profesionales de la Carrera de Odontología. 2. INSTRUCCIONES GENERALES 1. La presente guía debe llevarse a todas las prácticas de laboratorio. 2. En cada sesión de laboratorio se explicará brevemente la práctica siguiente. 3. Es obligación del estudiante hacer buen uso de los materiales y equipos de la facultad destinados para las prácticas. 4. El estudiante deberá traer su material de trabajo según la práctica planificada. 5. Al finalizar la práctica, el material de la facultad debe ser devuelto al docente, se verificará que se encuentre en perfecto estado y limpio. En el caso de daño de materiales o equipos por parte de un estudiante o todo el grupo de trabajo, el docente responsable de la dependencia notificará a el/la decana/o para evaluar la situación y determinar las acciones a seguir. 6. Terminada las actividades se verificará la limpieza de los mesones o espacios designados para la práctica. 7. El estudiante que no porte el equipo de protección especificado por el docente (mandil, gafas, mascarillas, guantes, etc), no podrá acceder a la práctica. 8. Antes de usar los equipos, deberá revisar el procedimiento de uso y al final llenar el registro de constancia de uso (bitácora). 9. Ante cualquier accidente o eventualidad con equipos o insumos deberá acudir inmediatamente al docente para tomar las medidas de contingencia. 10. No deberá sacar del laboratorio ningún equipo, medios o cultivos microbianos. 11. Evitar la acumulación sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la práctica de laboratorio. Colocar todos los objetos personales( libros, mochilas, etc)en la zona especificada por el profesor. 12. Se prohíbe ingerir y o almacenar cualquier tipo de alimento dentro del laboratorio. 13. Se prohíbe fumar y aplicarse cosméticos o tocarse la cara con las manos o algún otro objeto. 14. Se deberá lavar las manos meticulosamente con jabón líquido y agua antes de cualquier práctica e inclusive al salir del laboratorio por periodos cortos de tiempo. 15. Se prohíbe el uso de teléfonos celulares durante la práctica. 16. Por seguridad no deberá pipetear oralmente ningún tipo de cultivo microbiano, esta actividad deberá realizarse con pipetas accionadas de manera mecánica o automática

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tratando de evitar la formación aerosoles. 3. DESARROLLO DE LAS PRÁCTICAS

PRÁCTICA No. 1 TEMA: NORMAS DE SEGURIDAD – BIOSEGURIDAD. OBJETIVO: Socializar las normas de seguridad y bioseguridad del laboratorio en base al Manual de Seguridad – Bioseguridad de la Facultad de Odontología orientado a minimizar los riesgos de accidentes durante las prácticas. CONTENIDO: Bioseguridad La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas y de los equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, estudiantes, del área de laboratorio y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos. Agentes Biopeligrosos Son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos podemos citar: bacterias, virus, hongos, parásitos, productos recombinantes, alergenos, priones, etc. Riesgo Microbiológico El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad práctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulación de cultivos de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y pueden llegar a provocar una infección si no son manipulados adecuadamente. Para que se produzca un accidente por un agente biológico deben estar presente básicamente 4 elementos: un huésped susceptible, un agente infeccioso, una concentración suficiente de éste y una ruta de transmisión adecuada; siendo este último punto el que mejor se puede controlar en el laboratorio. Vías de Infección Los microorganismos pueden ingresar al organismo a través de: la boca, los pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vías de contaminación más frecuentes en el laboratorio se dan a través de:  La boca: Comer, beber y fumar en el laboratorio. Realizar transferencias con pipetas sin utilizar ningún tipo de protección. Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos o utensilios contaminados (lápices, bolígrafos, etc.).  La piel: Inoculación accidental con una aguja hipodérmica u otros instrumentos punzantes o de vidrio. Cortaduras o rasguños.  Los ojos: Salpicaduras de materiales infecciosos. Transferencia indirecta de microorganismos a través de los dedos contaminados.  Los pulmones: Inhalación de microorganismos transportados por el aire (aerosoles). En el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Odontología estamos seguros que comprendiendo y teniendo conocimiento de todos estos posibles riesgos, aprendiendo y ejecutando las técnicas adecuadas, contribuiremos con una parte importante e integral del proceso de educación, así como también a reducir el número de accidentes en el laboratorio y en futuras actividades fuera de él. EVALUACIÓN: Seminario sobre el manual de seguridad y bioseguridad de la facultad de odontología y el contenido de la práctica Numero 1

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PRÁCTICA No. 2 TEMA: MICROSCOPIA OBJETIVO: Conocer las partes y funcionamiento del microscopio así como tomar conocimiento del cuidado, manejo y utilidad del microscopio en el Laboratorio de Microbiología. INTRODUCCIÓN: La gran mayoría de los organismos unicelulares son imperceptibles para el ojo humano, y para observarlos es esencial el microscopio. El uso de este dispositivo es indispensable en el Laboratorio de Microbiología para el estudio de la morfología y estructura de los microorganismos. Además de la ampliación de la imagen, en microscopía, hay que tener en cuenta otros factores como: el contraste y la resolución. Los objetos deben poseer un cierto grado de contraste con su medio circundante para poder ser observados a través del microscopio. Por ello es que la mayoría de los organismos necesitan ser previamente teñidos para poder distinguirlos del medio (tinciones simples). Para contrastar o realzar de forma específica distintas características morfológicas o estructurales se emplean tinciones diferenciales. Estas técnicas tienen un gran interés en la identificación y clasificación de las bacterias. La tinción diferencial más utilizada es la tinción de Gram. Otras tinciones de gran importancia son las que diferencian bacterias “ácido- alcohol resistentes”, las que diferencian estructuras significativas como las esporas o la tinción negativa de cápsulas. RESULTADO DE APRENDIZAJE: Conoce las partes, funcionamiento y utilidad del microscopio MATERIALES Y REACTIVOS: 1. Microscopio óptico 2. Placas preparadas con tinsión diferencial ( suministra el docente) CONTENIDO DE LA PRÁCTICA: Si bien es cierto ninguno de los materiales que se van a utilizar en las prácticas de microbiología general denotan alguna peligrosidad siempre se debe tomar en cuenta las normas y disposiciones que se den en clase para evitar accidentes o contratiempos en la práctica como ejemplo: 1) No se deben tocar nunca las lentes con las manos, sino con pañuelos especiales para lente. 2) No dejar nunca una preparación sobre la platina cuando no esté usando el microscopio. 3) Para cambiar el objetivo, utilice siempre el revólver. 4) Después de utilizar el objetivo de inmersión límpielo. En caso de que el aceite se haya secado, avise al docente para limpiarlo con xilol. 5) No fuerce nunca los dispositivos giratorios del microscopio (macro y micrométricos, platina, revólver y condensador). 6) No cambie nunca de objetivo mientras está observando a través del ocular. 7) Cuando finalice el trabajo ponga el objetivo de menor aumento en posición de observación. 8) Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión de práctica. 9) Siguiendo las indicaciones para el manejo del microscopio: a) Observar un examen en fresco de microorganismos

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b) Observar preparaciones coloreadas suministradas por el catedrático. 10) Dibujar lo observado EVALUACIÓN: Se evaluará en base al informe presentado por cada alumno 1) Siguiendo las indicaciones para el manejo del microscopio: a) Observar preparaciones coloreadas suministradas por el catedrático. b) Dibujar lo observado BIBLIOGRAFÍA:   

Manual de prácticas de microbiología básica, 2001, Evangelina Olivas E. Prácticas de laboratorio y Aula, primera edición, 2003, Dr Federico Rubio, Madrid Manual de practicas de laboratorio de biología general, primera edición 2014, Jorge Arturo Rodriguez Jimenez, San Jose Costa Rica

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PRÁCTICA No. 3 TEMA: PREPARACION, FIJACION Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS OBJETIVO: Conocer las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico y la importancia de las tinciones simples en la caracterización morfológica de estos microorganismos. INTRODUCCIÓN: Debido al pequeño tamaño de la mayoría de microorganismos se necesita para su estudio un microscopio óptico para hacer la descripción morfológica, en la observación de las células vivas es limitado el microscopio óptico de campo claro debido a que las células son incoloras y dan paso a una gran cantidad de luz, la observación de frotis teñidos es recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente en la cual se fijan y tiñen los microorganismos de acuerdo a la cantidad de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se realizan diferentes tipos de tinciones simple, diferencial, negativa y selectiva. Los frotis de cultivos líquidos se fijan con alcohol para evitar residuos del medio, los de colonia de medios solidos se fijan generalmente con calor después de la fijación los frotis son teñidos con diferentes colorantes sintéticos derivados de anilina, los colorantes más utilizados son sales formadas por iones coloridos cargados conocidos como cromóforos por ejemplo azul de metileno. RESULTADO DE APRENDIZAJE: Prepara y tiñe placas de microorganismos, observa al microscopio MATERIALES Y REACTIVOS: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Microscopio óptico compuesto Porta objetos (2) Lámpara para alcohol Marcador indeleble Toallas desechables, campos, papel absorbente Cultivos proporcionados por el docente Asa de siembra

CONTENIDO DE LA PRÁCTICA: Si bien es cierto ninguno de los materiales que se van a utilizar en las prácticas de microbiología general denotan alguna peligrosidad siempre se debe tomar en cuenta las normas y disposiciones que se den en clase para evitar accidentes o contratiempos en la práctica: 1. Lavar perfectamente los porta objetos, secarlos con papel y etiquetarlos 2. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama hasta que se ponga al rojo vivo 3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra de microorganismos sean destruidos 4. Colocar en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mescla una pequeña muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones dadas por el docente 5. Se extiende suavemente en el portaobjetos y se deja secar al ambiente 6. Se fija con calor de la lámpara para alcohol pasando el frotis rápidamente de dos a tres veces por la flama sin dejarla quemar 7. Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para comprobar que no hubo sobrecalentamiento Tinción simple

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1. Cubrir el frotis con dos gotas de azul de metileno durante 30 segundos a un minuto 2. Eliminar el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente o con la ayuda de una piceta con agua destilada 3. Dejar secar al aire Observación al microscopio 1. Siguiendo las indicaciones de la practica 2 EVALUACIÓN: Se evaluará en base al informe presentado por cada alumno 1. Reportar las observaciones en el microscopio mediante gráficos 2. Comparar sus observaciones con las reportadas en la literatura, ver diferencias y similitudes. BIBLIOGRAFÍA:     

María de los Angeles Aquiahuatl Ramos, Manual de prácticas de laboratorio de microbiología general, primera edición, 2004, Mexico D.F Washington Yépez Plascencio, Manual de Bacteriología práctica, primera edición, 2007, Guayaquil Carlos Gamazo, Manual Practico de Microbiologia, tercera edición, 2005, Mexico D.F Manual de practicas de laboratorio de biología general, primera edición 2014, Jorge Arturo Rodriguez Jimenez, San Jose Costa Rica Carlos Gamazo, Microbiología basada en la experimentación, primera edición, 2013

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PRÁCTICA No. 4 TEMA: TINCION DIFERENCIAL DE GRAM OBJETIVO: Clasificar algunas especies bacterianas en gram positivas o gram negativas de acuerdo a la tinción gram, mediante esto comprenda la importancia que tienes estas tinciones para la caracterización e identificación de la bacterias. INTRODUCCIÓN: La técnica gram es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, el método se fundamenta en el hecho de que el colorante primario cristal violeta tiñe por igual a todas las bacterias pero la combinación con el colorante es más permanente en las gram positivas. Para establecer la diferenciación en estos dos grupos se aplica un disolvente del colorante primario que no tiene efecto sobre los microorganismos que lo retienen, pero lo elimina de aquellos que no tienen la capacidad de retenerlo quedando, por lo tanto decoloradas por lo que es necesario tratarlos con otro colorante llamado secundario como la safranina. Este no modifica el color de los primarios que habían retenido el color. RESULTADO DE APRENDIZAJE: Clasifica algunas especies bacterianas en gram positivas o gram negativas de acuerdo a la tinción gram . MATERIALES Y REACTIVOS: 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13.

Microscopio óptico compuesto Lámpara para alcohol Agua destilada Cultivos proporcionados por el docente Asa de inoculación Marcador indeleble Toallas desechables, campos, papel absorbente Cristal violeta Safranina Lugol Solución de alcohol – acetona

CONTENIDO DE LA PRÁCTICA: Si bien es cierto ninguno de los materiales que se van a utilizar en las prácticas de microbiología general denotan alguna peligrosidad siempre se debe tomar en cuenta las normas y disposiciones que se den en clase para evitar accidentes o contratiempos en la práctica: 1. Frotis envase a la practica 3 2. Cubrir el frotis con dos gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto 3. Lavar cuidadosamente el frotis con agua de llave o destilada para eliminar el exceso de colorante 4. Sacudir un poco y sin dejar secar cubrir el frotis con dos gotas de lugol 5. Lavar cuidadosamente el frotis con agua 6. Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante dejando que escurra hasta que no fluya más tintura 7. Lavar inmediatamente con agua 8. Aplicar dos gotas de safranina durante 30 segundo 9. Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel, dejar secar al aire 10. Observar al microscopio en base a la practica 2 EVALUACIÓN: Se evaluará en base al informe presentado por cada alumno 1. Reportar las observaciones en el microscopio mediante gráficos 2. Comparar sus observaciones con las reportadas en la literatura, ver diferencias y similitudes.

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BIBLIOGRAFÍA:    

Manual de prácticas de microbiología básica, 2001, Evangelina Olivas E. Prácticas de laboratorio y Aula, primera edición, 2003, Dr Federico Rubio, Madrid Manual de practicas de laboratorio de biología general, primera edición 2014, Jorge Arturo Rodriguez Jimenez, San Jose Costa Rica Carlos Gamazo, Microbiología basada en la experimentación, primera edición, 2013

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PRÁCTICA No. 5 TEMA: METODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS OBJETIVO: Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para la obtención de cultivos puros de bacterias. INTRODUCCIÓN: Las bacterias deben ser cultivadas en medios de cultivo de laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar sus actividades metabólicas. Un medio de cultivo es una solución acuosa de diferentes compuestos que contienen todos los elementos indispensables que requieren los microorganismos para crecer, generalmente las bacterias son inoculadas o introducidas en medios líquidos (caldos) o solidificados con agar para su propagación y conserva miento así como para estudiar sus características de crecimiento. Es importante recordar que la inoculación de los microorganismos en los medios de cultivo siempre debe realizarse en zona aséptica cerca de un mechero y en una cámara de flujo laminar, condiciones que limitan la presencia de microorganismos indeseables o contaminantes. Los cultivos puros están formados por un solo tipo de microorganismo y son indispensables para conocer las características morfológicas, propiedades de tinción, actividad bioquímica, patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e identificación de especies microbianas. El aislamiento de cultivos microbianos pueden realizarse por métodos de dilución, en medios solidos por estría, en placa o en medios líquidos, en el primer caso cada célula bacteriana que se separa dará origen a una población que formara una colonia característica visible a simple vista CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Existen diversas clasificaciones de los medios de cultivo: se abocará a dos de uso práctico, una de acuerdo a su composición y la otra de acuerdo a su uso en el laboratorio: A) Clasificación de los medios de cultivo de acuerdo a su composición: + Sintéticos. Son aquellos medios preparados con alta pureza y en los cuales la composición se conoce en forma precisa. Su uso es muy definido, por ejemplo medios para ensayo de vitaminas o para enriquecimiento. + No sintéticos. Estos se preparan a partir de una gran variedad de productos crudos como son extractos de carne, extractos de levaduras, hidrolizados proteicos (peptonas) etc. y aunque se conoce cuáles son los ingredientes, estos pueden variar ligeramente, por ejemplo el contenido de aminoácidos entre la carne de un animal y otro. B) Clasificación de los medios de acuerdo a su uso en el laboratorio ~ Medios de cultivo de uso general. En este grupo se encuentran los medios que contienen los nutrientes básicos y no contienen sustancias inhibitorias por lo que en ellos pueden crecer una gran variedad de heterótrofos. Entre estos medios tenemos Agar de soya y tripticaseína, agar de Müller Hinton, agar nutritivo, etc. ~ Medios de cultivo diferencial. Este tipo de medios es usado para distinguir entre diferentes tipos de bacterias. Usualmente contienen colorantes o indicadores de pH que darán un color característico a las colonias o viraran el color del medio de cultivo de acuerdo al microorganismo que se trate. Un medio puede ser diferencial y selectivo al mismo tiempo. ~ Medios de cultivo selectivos. Este es un medio nutritivo al que se le añaden productos que actúan como agentes inhibitorios, de tal manera que sólo permiten el crecimiento de cierto grupo de microorganismos. Se usan para aislar organismos particulares e inhibir el crecimiento de los no deseados. Entre los medios selectivos y diferenciales tenemos: Agar de MacConkey el cual contiene una mezcla de sales biliares que inhiben a los microorganismos Grampositivos, además de lactosa y como indicador rojo de fenol para distinguir las bacterias que fermentan la lactosa de las que no lo hacen.

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Agar EMB (Eosina azul de metileno) mediante el azul de metileno y la eosina inhibe los organismos Grampositivos. Al mismo tiempo, al igual que el Agar de MacConkey, permite diferenciar bacterias que fermentan la lactosa y/o a la sacarosa de las que no lo hacen. El Agar de sal y manitol, por su alto contenido de NaCl (7.5%) inhibe a las bacterias que no lo toleran, al mismo tiempo con el indicador rojo de fenol sirve para detectar la fermentación del manitol. Se utiliza para el aislamiento y diferenciación del género Staphylococcus. RESULTADO DE APRENDIZAJE: Aisla bacterias en medios de cultivo sólido para la obtención de ceparios cultivos puros de bacterias. MATERIALES Y REACTIVOS: 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Lámpara para alcohol Agua destilada Agar sangre (2) traen los estudiantes Asa de inoculación Marcador indeleble Toallas desechables, campos, papel absorbente

CONTENIDO DE LA PRÁCTICA: Si bien es cierto ninguno de los materiales que se van a utilizar en las prácticas de microbiología general denotan alguna peligrosidad siempre se debe tomar en cuenta las normas y disposiciones que se den en clase para evitar accidentes o contratiempos en la práctica: 1. El profesor proporciona cultivos puros de staphylococcus aureus, streptococcus mutans 2. En la parte posterior y exterior de la caja dividirán en cuatro cuadrantes tomar una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocular la muestra haciendo 4 – 5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la caja, cerrar la caja 3. Flamear el asa de inoculación y hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas 4. Rosar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estrías y hacer un segundo grupo de estrías en el segundo grupo como en el caso anterior 5. Repetir el procedimiento 4 y 5 en el tercer cuadrante y al efectuar la siembra en el último cuadrante no se deberá flamear el asa de siembra y se hará una estría más abierta (simple) 6. Este procedimiento se repetirá en cada una de las cajas Petri traídas por el estudiante, con los cultivos puros proporcionados por el profesor EVALUACIÓN: Se evaluará en base al informe presentado por cada alumno Reportar las observaciones macroscópicas mediante gráficos Nota: La descripción colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios: Forma: Circular, irregular, o rizoide Borde: Entero, lobulado, aserrado Superficie: Lisa o rugosa Aspecto de la colonia: Humeda, seca, butirosa Elevacion: Convexa, plana, hundida Luz trasmitida: Traslucida, opaca Luz reflejada: Brillante, mate Consistencia: Dura, blanda, mucoide Comparar su observaciones con las reportadas en la literatura, ver diferencias y similitudes. BIBLIOGRAFÍA:    

Manual de prácticas de microbiología básica, 2001, Evangelina Olivas E. Prácticas de laboratorio y Aula, primera edición, 2003, Dr Federico Rubio, Madrid Manual de practicas de laboratorio de biología general, primera edición 2014, Jorge Arturo Rodriguez Jimenez, San Jose Costa Rica Carlos Gamazo, Microbiología basada en la experimentación, primera edición, 2013

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PRÁCTICA No. 6 TEMA: METODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE HONGOS OBJETIVO: Conocer las técnicas de cultivo y manipulación de diferentes tipos de hongos, que el estudiante conozca las principales características morfológicas (macroscópica y microscópica) de los hongos. INTRODUCCIÓN: Los hongos son organismos eucarióticos de mayor tamaño que las bacterias, se distinguen de otras eucariotas por ser inmóviles y de las algas y plantas por carecer de pigmentos. Son de nutrición heterótrofa es decir dependen de nutrientes orgánicos que son solubilizados por sistemas enzimáticos específicos, estos organismos pueden ser unicelulares (levadura) o multicelulares (filamentosos) sin embargo también existen hongos di mórficos patógenos dependiendo de condiciones ambientales como la temperatura. El principal mecanismo de reproducción de los hongos es asexual por fragmentación de hifas vegetativas o por la producción de abundantes esporas en conidióforos y esporangioforos, Se estima que puede haber 1.5 millones de especies de hongos de las cuales se han descrito más de 205.000 y de estas solo se conocen 150 especies patógenas para el hombre y otras tantas para plantas y animales. Es de gran importancia conocerlas por los beneficios que proporciona el hombre porque utilizan materia orgánica muerta, se pueden utilizar como agentes de biodegradación de compuestos recalcitrantes en procesos de bioremediación

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Cultiva hongos y reconoce las principales características morfológicas (macroscópica y microscópica) MATERIALES Y REACTIVOS: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

Lámpara para alcohol Microscopio óptico Agua destilada Agar sabouraud (2) trae el estudiante CHROMagar (2) trae el estudiante Asa de inoculación Marcador indeleble Toallas desechables, campos, papel absorbente Incubadora Autoclave Cámara de flujo laminar KOH

CONTENIDO DE LA PRÁCTICA: Si bien es cierto ninguno de los materiales que se van a utilizar en las prácticas de microbiología general denotan alguna peligrosidad siempre se debe tomar en cuenta las normas y disposiciones que se den en clase para evitar accidentes o contratiempos en la práctica: 1. El profesor proporciona cultivos con aspergillus niger y cándida albicans 2. El estudiante inoculara cada una de las sepas en cajas de Petri con los dos medios de cultivos CHROMagar y sabouraud en base a la práctica de siembra (5) 3. La descripción macroscópica de cada especie en los dos medios de cultivo y la observación microscópica la hará realizando la técnica del KOH que se usa sola o adicionando tinta como azul de metileno 4. Colocar una gota de KOH sobre la lámina de portaobjetos 5. Adicionar la muestra a examinar 6. Cubrir con la laminilla

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7. Calentar suavemente a la llama sin dejar hervir 8. Observar al microscopio con objetivo 10x y 40x 9. Si el material es muy denso se puede disgregar presionando la laminilla con el borrador de un lápiz, ayuda también a separar las células EVALUACIÓN: Se evaluará en base al informe presentado por cada alumno 

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Reportar las observaciones macroscópicas y microscopicas mediante gráficos Nota: La descripción colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios: Forma: Circular, irregular, o rizoide Borde: Entero, lobulado, aserrado Superficie: Lisa o rugosa Aspecto de la colonia: Humeda, seca, butirosa Elevacion: Convexa, plana, hundida Luz trasmitida: Traslucida, opaca Luz reflejada: Brillante, mate Consistencia: Dura, blanda, mucoide. Describir: Coloración al usar CHROMagar Observación microscópica con lente de 10 y 40 Comparar sus observaciones macroscópicas y microscópicas con las reportadas en la literatura, ver diferencias y similitudes.

BIBLIOGRAFÍA:     

Manual de prácticas de microbiología básica, 2001, Evangelina Olivas E. Prácticas de laboratorio y Aula, primera edición, 2003, Dr Federico Rubio, Madrid Manual de practicas de laboratorio de biología general, primera edición 2014, Jorge Arturo Rodriguez Jimenez, San Jose Costa Rica Carlos Gamazo, Microbiología basada en la experimentación, primera edición, 2013 Teresa Mier, Hongos microscópicos saprobios y parasitos, métodos de laboratorios, primera edición, 2002, Mexico D.F

Elaborado por: Juan Viteri FIRMA: ………………………………………………………

Revisado por: Roberto Romero (COORDINADOR) FIRMA: ………………………………………………………

Aprobado por: Dr. Jorge Naranjo (SUBDECANO) FIRMA: ………………………………………………………