100 TEST KIT 05475

March 2004

Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England

DR1108A

SALMONELLA

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Kit de Prueba para Salmonella 100 de Oxoid DR1108A

Introducción El género Salmonella abarca más de 2.400 serotipos capaces de producir gastroenteritis infecciosa aguda, a menudo asociada con intoxicaciones alimentarias. Dado que muchas especies de Salmonella infectan a animales domésticos de forma clínica o subclínica, los casos de intoxicación alimentaria por Salmonellasuelen provenir de fuentes animales. En contraste, S. typhi y S. paratyphi únicamente infectan a seres humanos, con la producción de fiebre entérica. La Salmonella con frecuencia se halla presente en cantidades pequeñas en una muestra dada, junto con otras enterobacterias. Se utilizan medios de enriquecimiento y/o selectivos para fomentar el crecimiento de Salmonella, tales como el Medio Rappaport, caldos para inducir la motilidad (p.ej., caldo M), y medios que contengan selenita (RV-CM669, RVS-CM0866), citrato de deoxicolato (DCACM0035) o bismuto-sulfito.1,2 Indicaciones El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid es una prueba de aglutinación de látex rápida y simple para la identificación tentativa de Salmonella en cultivos selectivos y/o de 11

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enriquecimiento. La utilización de la tecnología látex hace que este test sea más sensible que los métodos de aglutinación directa. Así, el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid permite identificar Salmonella al menos 24 horas antes que con las técnicas convencionales. El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid es particularmente útil en el screening de cultivos, teniendo en cuenta el alto valor predictivo de un resultado negativo. Al someter muestras clínicas a screening, estas características permiten una más rápida adopción de decisiones terapéuticas. El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid resulta ideal para someter a screening muestras de la industria de la alimentación, donde la rápida obtención de resultados permite minimizar los retrasos asociados con las pruebas rutinarias para la detección de contaminación por Salmonella.

Fundamento de la prueba Se preparan antisueros polivalentes contra una amplia gama de antígenos flagelares de Salmonella, para recubrir las partículas de látex. Al mezclarse con una suspensión que contenga Salmonella con estos antígenos, las partículas de látex se aglutinan rápidamente, formando aglomerados visibles. El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid detecta la mayoría de las especies comunes de 12

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Salmonella, incluyendo S. typhimurium y S. enteritidis. Con el fin de minimizar las reacciones cruzadas con otra enterobacteria, se retiran los anticuerpos contra los principales antígenos somáticos durante la preparación de los antisueros. Por consiguiente, la prueba para Salmonella desarrollada por Oxoid reacciona ante todo con antígenos flagelares, si bien el reactivo reaccionará igualmente con las especies S. pullorum y S. gallinarum, carentes de motilidad. Materiales suministrados Los reactivos suministrados se hallan destinados para diagnóstico in vitro solamente.

Reactivo látex para Salmonella: Partículas de látex revestidas de antisuero de conejo contra antígenos de Salmonella, con 0,02% mertiolato como conservante, 5.0ml Suero fisiológico isotónico al 0,85%; conservante: azido sódico al 0,1%, 5ml Tarjetas de reacción desechables Palillos de mezclado desechables

Requerimientos adicionales Pipetas Pasteur

Almacenamiento El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid debe almacenarse a 2-8ºC. No congelar. El kit no debe utilizarse más allá de la fecha de 13

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caducidad impresa en el exterior del embalaje de cartón.

Precauciones 1. Deben tomarse las precauciones necesarias al trabajar con patógenos potenciales. 2. No aspirar oralmente con la pipeta. 3. Los reactivos y materiales desechados deberán pasar por autoclave antes de su eliminación 4. Evitar contaminaciones cruzadas de soluciones o muestras. 5. No utilizarse más allá de la fecha de caducidad impresa en el exterior del embalaje de cartón. 6. Comprobar que la tarjeta reactiva se encuentra limpia y seca antes de usar. 7. El suero fisiológico isotónico se conserva con azido sódico, que puede formar compuestos potencialmente explosivos al entrar en contacto con tuberías de cobre o de plomo. Al desechar el reactivo, aclarar con agua abundante, con el fin de evitar la acumulación de azido. Instrucciones de uso Dejar que los reactivos del Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid alcancen temperatura ambiente antes de usar. 14

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Especimenes El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid puede aplicarse a medios sólidos o caldos selectivos y/o de enriquecimiento. El procedimiento recomendado para unas prestaciones óptimas del kit se detalla a continuación: Muestras de comida:

Homogeneizar en 225 ml de Caldo de Resucitación (p.ej., BPW-CM509 (ISO)) Incubar a 35ºC durante 18 horas

o

a) 1 ml en 10 ml Caldo Selectivo (p.ej., MKTTn-CM1048+SR0181 o Caldo ManitolSelenita-CM399) b) 1 ml en 100 ml (ó 0.1 ml en 10 ml) de Caldo Rappaport (p.ej., RV- CM669, RVSCM0866) Incubar a 35ºC durante 18 horas Subcultivar 1 ml en 10 ml caldo M 15

ES Incubar a 35ºC durante 6 horas Mezclar y evaluar con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid. Controles Se deberán realizar los siguientes controles en cada día de uso del kit. 1. Reactivo Control Añadir una gota del reactivo látex para Salmonella de Oxoid a una gota de suero fisiológico en el mismo círculo de la tarjeta reactiva; mezclar durante dos minutos y observar la posible aglutinación. No debería producirse aglutinación. Si este control muestra aglutinación, probablemente el reactivo látex o el suero fisiológico se encuentren contaminados y deberán desecharse. 2. Control Positivo Preparar una suspensión homogénea de una especie conocida de Salmonella sobre una tarjeta reactiva. Observar la posible formación de autoaglutinación durante dos minutos. En caso de que no se produzca autoaglutinación, añadir una gota del reactivo látex del Kit de Prueba 16

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para Salmonella de Oxoid al mismo círculo, y mezclar con un palillo de mezclar. Tras 30 segundos, evaluar la posible aparición de aglutinación, lo cual indicaría una reacción positiva.

Realización de la prueba A. Método para evaluar caldos 1. Mezclar el caldo de cultivo, invirtiendo cuidadosamente, y retirar una gota de cultivo con una pipeta Pasteur. 2. Depositar una sola gota de caldo de cultivo dentro de un círculo de la tarjeta reactiva. 3. Mezclar suavemente el reactivo látex para Salmonella de Oxoid por inversión cuidadosa y añadir una gota al caldo sobre la tarjeta. EL CUENTAGOTAS NO DEBERÁ ENTRAR EN CONTACTO CON LA GOTA DE CULTIVO. Mezclar bien utilizando un palillo de mezclado limpio o asa de inoculación. Agitar suavemente la tarjeta reactiva 2 ó 3 veces. No hace falta agitar durante mucho tiempo la tarjeta. 4. Examinar la posible aparición de aglutinación en un plazo máximo de 2 minutos. 5. Una vez terminada la lectura, desechar las tarjetas reactivas usadas en un medio desinfectante adecuado. 17

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Nota: Al someter a prueba polvos alimenticios cultivados en caldos de enriquecimiento selectivos, deberá asegurarse que el producto alimenticio a solas en caldo de enriquecimiento no produce aglutinación inespecífica. Colocar una gota de producto alimenticio sobre una tarjeta reactiva. Detectar cualquier aglutinación o aglomeración, que sería indicativo de autoaglutinación. Tales productos no pueden evaluarse mediante el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid.

B. Método de identificación en medio sólido selectivo 1. Colocar una tarjeta reactiva sobre el banco de trabajo. 2. Añadir una gota de suero fisiológico al interior de un círculo de la tarjeta reactiva. 3. Mediante un palillo o asa de inoculación, emulsificar la colonia a estudiar en una gota de suero fisiológico, para producir una suspensión espesa y uniforme. Las suspensiones deberán prepararse a partir de colonias con morfología semejante a especies de Salmonella. 4. Examinar la suspensión con el fin de identificar posibles aglutinaciones o agregaciones, que serían indicativas de autoaglutinación. Si la suspensión 18

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permanece homogénea, proceder con el paso 5. (Ver limitaciones de uso, punto l.) 5. Mezclar suavemente el reactivo látex para Salmonella de Oxoid por inversión y añadir una gota a la suspensión de suero fisiológico. EL CUENTAGOTAS NO DEBERÁ ENTRAR EN CONTACTO CON LA SUSPENSIÓN DEL ORGANISMO. Mezclar el reactivo látex y la suspensión del organismo con un palillo de mezclado limpio durante 30 segundos, agitando suavemente la tarjeta reactiva 2-3 veces. No hace falta agitar durante mucho tiempo la tarjeta. Examinar la posible aparición de aglutinación en un plazo máximo de 2 minutos. 6. Una vez terminada la lectura, desechar las tarjetas reactivas usadas en un medio desinfectante adecuado.

Interpretación La aglutinación en un plazo de dos minutos constituye un resultado positivo e indica la presencia de Salmonella en la muestra. Se requiere cautela al evaluar caldos de cultivo, con el fin de no interpretar como reacción de aglutinación la adherencia del látex a materia en forma de partículas. La ausencia de aglutinación indica que el cultivo de prueba carece de Salmonella. 19

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Limitaciones de uso 1. Se sabe que las cepas rugosas de Salmonella producen autoaglutinación inespecífica en suero fisiológico a solas, y por tanto no pueden ser evaluadas con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid. 2. Algunas cepas carentes de motilidad pueden no detectarse con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid. 3. Algunos organismos oxidasa-positivos pueden dar falsos positivos. 4. Cultivos viejos de Enterobacteriaceae en gradientes de agar nutriente pueden producir aglutinación inespecífica, mientras que cultivos viejos de Salmonella pueden dar falsos negativos. Se deberán preparar subcultivos frescos para ensayar con el kit. 5. La identificación con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid es de carácter tentativo, y los resultados positivos deberán confirmarse mediante el subcultivo de caldos, con pruebas de identificación adicionales y serotipado en cultivos puros.

Prestaciones Centro 1 Se caracterizaron plenamente a 561 aislados de Salmonella por serotipado. Todos estos 20

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organismos, así como 359 aislados en representación de 13 bacterias diferentes no pertenecientes a Salmonella, fueron cultivados antes de ser evaluados con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid, en un laboratorio independiente. Los resultados se muestran a continuación: Confirmado +

Salmonella -

Total

Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid + 561 0 10

349

571

349

Total 561

359

920

El Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid ofrece una sensibilidad del 100%, con una especificidad del 97,2%. El valor predictivo de un resultado positivo era del 98,2%, frente al 100,0% en el caso de un resultado negativo.

Centro 2 Un total de 64 muestras de comida con sospecha de contaminación por Salmonella fueron evaluados para detectar la posible presencia de Salmonella, en un laboratorio de higiene alimentaria. Se incubó la comida homogeneizada durante 18 horas en Caldo de Resucitación, seguido de 18 horas en caldo de enriquecimiento selectivo (cistina-manitol21

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selenita o caldo Rappaport). Los caldos se subcultivaron en placas con agar selectivo durante 24-68 horas. Las colonias de morfología compatible con Salmonella fueron evaluados con el Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid, o mediante pruebas bioquímicas clásicas y serotipado. Los resultados se muestran a continuación: Salmonella confirmado +

Kit de Prueba para Salmonella de Oxoid + 53 0

y serotipado

0

con pruebas bioquímicas % Sensibilidad

% Especificidad

100% 100%

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El valor predictivo tanto de resultados positivos como de resultados negativos es del 100%.

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