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FACULTAD DE ESTOMATOLOGÍA

AT O

LO

G

IA

-B

IB LI

O

ESCUELA DE ESTOMATOLOGÍA

TE CA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

M

“Efecto antibacteriano in vitro de un enjuague bucal

TO

a diferentes concentraciones a base de extracto

DE

ES

etanólico de Stevia rebaudiana sobre el crecimiento

TA D

de Streptococcus mutans ATCC 25175” Becerra Quiroz, Layla Marinés

ASESORA: Dra. Teresa E. Ríos Caro.

FA

CU L

AUTORA:

TRUJILLO – PERÚ 2016

1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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DEDICATORIA

TE CA

A mi confidente y soporte en adversidades, Dios, por guiar mi camino de tu mano haciéndome sentir que nunca estoy sola, enseñándome que todo

O

es posible con un corazón humilde, permitiendo que llegue hasta este

IB LI

momento tan importante de mi formación profesional.

-B

A mi querida mami: LUCINDA CHACÓN ROMERO, considerada por

LO

G

sapiencia.

IA

todos los que te queremos como nuestro pilar, por tu amor infinito y gran

AT O

A mis queridos padres: GLADIS Y ANTONIO. Por darme la vida y estar conmigo en todo momento, por su apoyo, comprensión y enseñarme que

TO

M

los sueños pueden ser más que eso.

ES

A mis lindas hermanitas: CINTHYA Y KIARA, cómplices y amigas;

DE

mosqueteras en la vida ―una para y todas para una‖.

TA D

A mi querida tía: HAYDEÉ, a quien considero como una madre y amiga,

FA

CU L

por compartir momentos significativos y tu disposición para escuchar y aconsejar a esta señorita de ―locas ideas‖.

A mi pequeña, SOFIA EMILIA, por tener esa inocencia que nos saca más de una sonrisa y llena nuestras vidas de mucha felicidad.

2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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AGRADECIMIENTOS ―Donde hay fe hay amor, donde hay amor hay paz, donde hay paz esta

TE CA

Dios y donde está Dios no falta nada‖. Mi agradecimiento será infinito hacia ti y sobre todas la cosas, por darme lo más hermoso, mi familia.

O

A mis padres GLADIS Y ANTONIO, la vida no me alcanzará para

IB LI

retribuirles todo cuánto me ha sido dado, a ustedes les debo mi formación

-B

en principios y valores como persona. Los quiero mucho; en cada

IA

elección y decisión son sus palabras las que me hace continuar con

LO

G

coraje y perseverancia este arduo, pero gratificante camino.

AT O

A mis hermanitas CINTHYA, KIARA, y demás familiares; por depositar su

M

confianza en mi persona.

TO

A la Dra. TERESA RÍOS CARO, por su gentileza, dedicación y excelencia

paciencia brindados.

DE

ES

como mi asesora en la realización de este trabajo. Por su tiempo y

TA D

A las Dras. ELVA MEJÍA RÍOS Y MARILÚ SOTO VÁSQUEZ, por su

FA

CU L

paciencia, amabilidad, empeño y disposición para la ejecución del presente trabajo.

A LUIS MIGUEL, por ser la persona maravillosa que eres y además de ello, ser mi amigo. Destino o casualidad fueron los que permitieron encontrarnos para compartir esta carrera, que es nuestra pasión.

3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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RESUMEN Objetivo: El presente estudio de tipo experimental, tuvo como objetivo

TE CA

determinar la actividad antibacteriana in vitro de un enjuague bucal a base de extracto etanólico de hojas de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus

O

mutans ATCC 25175.

IB LI

Materiales y método: Los extractos se obtuvieron a partir de hojas frescas de Stevia rebaudiana, para luego ser agregado con solventes en

-B

la elaboración de un enjuague bucal a seis concentraciones en etanol de

IA

70° y seis concentraciones en etanol de 30°. La concentración inhibitoria

LO

G

mínima se obtuvo por el método de dilución en caldo y agar y para el

AT O

efecto bactericida se empleó la técnica de difusión de discos de Kirby y Bauer.

M

Resultados: El análisis estadístico permitió seleccionar a la CMI en 1,07

TO

mg/mL en el enjuague a base de extracto de Stevia rebaudiana en etanol

ES

de 70° y la concentración de 2,14 mg/mL, en etanol de 30° (p> 0.05).

DE

Mientras la CMB en 75mg/mL en el enjuague bucal trabajado en etanol de

TA D

70° y siendo estadísticamente nulo en etanol de 30° (p< 0.01). Conclusión: El enjuague bucal a base extracto etanólico de Stevia

CU L

rebaudiana posee efecto antibacteriano sobre Streptococcus mutans

FA

ATCC 25175. Palabras clave: Bactericida, Stevia, antiséptico bucal, Streptococcus mutans.

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ABSTRACT

TE CA

Objective: This experimental study, aimed to determine the antibacterial activity in vitro of a mouthwash based ethanol extract of leaves of Stevia

O

rebaudiana on Streptococcus mutans ATCC 25175.

IB LI

Materials and Methods: The extracts were obtained from fresh leaves of Stevia rebaudiana, before being added solvent in the preparation of a

-B

mouthwash to six concentrations of ethanol 70 ° and six concentrations of

IA

ethanol 30 °. The minimum inhibitory concentration was obtained by the

LO

G

broth dilution method and agar and the bactericidal effect diffusion

AT O

technique of Kirby and Bauer disc was used.

Results: statistical analysis allows to select the MIC 1.07 mg / mL based

M

on the rinse extract Stevia rebaudiana in ethanol 70 ° and the

TO

concentration of 2.14 mg / mL in ethanol 30 ° (p> 0.05). While the WBC

ES

75mg / mL in the mouthwash worked in ethanol 70 ° and being statistically

DE

null in ethanol 30° (p 200 UFC

CMB

≥ 8 mm

IB LI

O

TE CA

EFECTO ANTIBACTERIANO

G

Concentración Mínima Inhibitoria (CMI)

LO

-

IA

-B

< 8 mm

AT O

Conceptual: Fue interpretada como la mínima concentración del enjuague bucal a base de

M

extracto

que

inhibe

el

crecimiento

del

ES

TO

microorganismo después de su incubación.

FA

CU L

TA D

DE

Operacional: La definición coincidió con la conceptual al ser valorada mediante el número obtenido en mg/ mL del enjuague bucal a diferentes concentraciones a base de extracto etanólico pretendió

de

Stevia apreciar

rebaudiana

donde

crecimiento

se del

Streptocococcus mutans menor a 200 UFC.33

49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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-

Concentración Mínima Bactericida (CMB) Conceptual: Fue interpretada como la mínima

TE CA

concentración del enjuague bucal a diferentes concentraciones a base del extracto donde se

IB LI

inhibición mayor a 8 mm.33

O

pretendió apreciar el diámetro del halo de

-B

Operacional: Para efectos de la investigación la

IA

definición coincidió con la conceptual al ser

G

valorada mediante el

valor numérico obtenido

LO

midiendo el halo de inhibición y escoger la

AT O

concentración del enjuague bucal a diferentes

M

concentraciones a base de extracto etanólico de

ES

TO

Stevia rebaudiana en mg/ mL.

DE

2.7 Análisis estadístico e interpretación de datos: Para analizar la información se aplicó el ANVA de un Diseño

TA D

Completamente Aleatorizado, con 3 repeticiones por cada

FA

CU L

concentración. Para determinar cuál es la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB), se hizo uso de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey usando el software SPSS 18.0, con un nivel de significancia del 5% (p < 0.05).

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III. RESULTADOS El presente estudio de tipo experimental in vitro, tuvo como

TE CA

objetivo determinar el efecto antibacteriano in vitro de un enjuague bucal a diferentes concentraciones a base de extracto etanólico de

O

Stevia rebaudiana sobre una muestra de 86 placas con el inóculo

IB LI

Streptococcus mutans ATCC 25175, al análisis de los datos se

-B

encontraron los siguientes resultados:

IA

La acción inhibitoria del enjuague bucal a base de extracto

G

etanólico de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC

LO

25175, se presentó a partir de la concentración de 1,07mg/mL en

AT O

el enjuague trabajado en etanol de 70°

y a partir de

la

M

concentración de 2,14 mg/mL, en el enjuague trabajado en etanol

TO

de 30°. TABLA 01.

ES

La acción bactericida del enjuague bucal a base de extracto

DE

de etanólico de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans

TA D

ATCC 25175, se presentó a partir de la concentración de 75 mg/mL en el enjuague a base de extracto trabajado en etanol de

CU L

70° mientras que fue estadísticamente nula en etanol de 30°.

FA

TABLA 02.

51 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

TE CA

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TABLA 01

-B IB LI

O

Determinación de concentración mínima inhibitoria (CMI) de un enjuague bucal a diferentes concentraciones sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, usando extracto etanólico de Stevia rebaudiana en OH 30° Y 70°.

OH 70°

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0

Desv. estándar

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0

TO

0.0

ES

0.0 ±

M

Media

Media ± DE

5.00% 10.00% 25.00% 50.00% 75.00%

LO

4.28% 10.70% 21.40% 32.10% 42.80% 1.07%

AT O

2.14%

G

IA

OH 30°

Control B

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

4760.5

109

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

753.1

0.0

0.0 ±

0.0

DE

(OH)

Control A

AD

Prueba entre OH

CU

LT

Prueba entre concentración

Control B : Solo bacteria

FA

Control A : Contiene solo excipientes

152 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

TE CA

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O

TABLA 02

-B IB LI

Determinación de susceptibilidad de Streptococcus mutans ATCC 25175 frente al enjuague bucal a diferentes concentraciones (CMB), usando extracto etanólico de Stevia rebaudiana en OH 30° Y 70°.

OH 70°

IA

OH 30°

Media

6.0

6.0

6.0

7.9

7.9

Desv. estándar

0.0

0.0

0.0

1.4

0.7

6.7 ± 0.9

75.00%

Clorhexidina 0.12%

6.0

6.0

6.0

8.4

10.8

11.8

26.4

0.6

0.0

0.0

0.0

0.7

0.9

1.9

5.1

c

d

6.9

8.2 ± 2.6

a

LT

a

b

b

c

a

a

a

b

CU

a

AD

Prueba entre concentración Prueba Duncan*

10.00% 25.00% 50.00%

DE

Prueba entre OH

5.00%

ES

Media ± DE (OH)

1.07%

AT O

10.70% 21.40% 32.10% 42.80%

M

4.28%

TO

2.14%

LO

G

Indicador

FA

*: Dos concentraciones con la misma letra no difieren estadísticamente en cada OH

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IV. DISCUSIÓN

TE CA

La microflora oral es un complejo ecosistema que contiene una amplia variedad de especies microbianas, el concepto actual

O

contempla en la patogénesis de la caries dental a microorganismos

IB LI

que incluyen Lactobacillus acidophilus, Actinomyces spp y Streptococcus mutans como el agente más importante asociado a El

reconocimiento

de

la

importancia

-B

ella12.

de

estos

IA

microorganismos en el inicio y progresión de la caries, conduce a

LO

G

tomar medidas dirigidas a la disminución de estas bacterias en la

AT O

cavidad oral.

M

La humanidad tiene una marcada preferencia hacia los

TO

alimentos dulces y con base en ello es que actualmente se

ES

promociona el uso edulcorantes naturales quienes producen las mismas sensaciones que el azúcar. Entre los edulcorantes no

DE

nutritivos destacan: la Sacarina, Aspartame, Sucralosa, Ciclamato,

TA D

Acesulfame K, Neotamo, Alitamo, Xylitol, Sorbitol y recientemente se ha incorporado a la Stevia rebaudiana bertoni, cuyo sabor es lo

CU L

más parecido al azúcar, distinguiéndose de los edulcorantes

FA

artificiales por no tener sabor metálico y no ser cancerígeno 30, 45. En tal sentido el presente estudio fue realizado con la finalidad de determinar la efectividad in Vitro de un enjuague bucal a base de extracto etanólico de Stevia rebaudiana a diferentes

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concentraciones, sobre el crecimiento de una cepa estándar de Streptococcus mutans ATCC 25175 para el control de la caries

TE CA

dental. Los resultados muestran que el enjuague bucal en estudio a

ciento

efectivos para

el control

del

IB LI

30° son ciento por

O

diferentes concentraciones, tanto en alcohol de 70° como en el de

Streptococcus mutans ATCC 25175 (p 0.05). Resultados similares

-B

fueron encontrados por Pérez S48, 2013, usando extracto etanólico

IA

de Stevia rebaudiana en un estudio in vitro con las mismas

LO

G

concentraciones.

AT O

De este modo es notoria la capacidad antibacteriana del

M

enjuague bucal a base de extracto etanólico de Stevia rebaudiana

TO

bertoni para el control del microorganismo, la cual puede ser

ES

atribuida y/o asociada a los componentes químicos principales obtenidos de las hojas de Stevia que contienen glucósidos de

DE

esteviol de los cuales destacan con un 95% el esteviósido y el

TA D

rebaudiósido

beneficioso

A, para

cuyas la

propiedades

salud

han

sistémica

demostrado

como

ser

antioxidante,

CU L

quimioprotectora, antiinflamatoria, digestiva, vasodilatadora y

FA

recientemente para la salud oral frente a diversos microorganismos pues pasa por el cuerpo sin producir ningún tipo de efecto tóxico, es decir, este producto sería seguro para su uso en embarazadas, adultos y niños con restricciones de edad28, 33,

36, 49

. Inclusive se

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puede pensar en un sinergismo entre estos glucósidos y sus metabolitos secundarios para producir tal efecto, no obstante aún no se han reportado trabajos donde se aíslen y estudien de

TE CA

manera particular.

O

Por otro lado, los saborizantes, conservantes y preservantes

IB LI

como lauril éter sulfato de sodio (tensioactivo o detergente), sorbitol y glicerina (sustancias humectantes), además de alcohol

-B

96° quienes acompañan su composición podrían ejercer un papel

G

IA

coadyuvante en su efecto antibacteriano.

LO

En términos generales los edulcorantes naturales están

AT O

ganando terreno debido a los múltiples beneficios que se les ha

M

observado; no obstante, con los antecedentes existentes, se

TO

puede postular a este edulcorante como un potencial complemento

ES

terapéutico en la atención odontológica, con su posible uso como enjuague bucal en el control de la caries sobre Streptococcus

DE

mutans como agente patógeno principal, bajo restricciones en la

TA D

edad y sobre todo en pacientes que presenten condiciones de

FA

CU L

obesidad, diabetes e hipertensión.59 Este estudio ha evidenciado

que el enjuague bucal a

diferentes concentraciones a base de extracto etanólico de Stevia

rebaudiana es efectivo sobre este microorganismo a partir de la concentración de 1,07 mg/mL y 2,14 mg/mL trabajado en etanol de 70° y 30° respectivamente (p 0.05).

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Al respecto, estos resultados se soportan con los estudios realizados por Pérez Guevara S48, quién demostró el efecto antibacteriano in vitro, del extracto etanólico de Stevia rebaudiana Streptococcus

mutans

ATCC

25175,

donde

las

TE CA

sobre

concentraciones mínimas inhibitorias del extracto fueron de 1,07

O

mg/ml en el extracto trabajado en etanol de 70° y 4,28 mg/mL en

IB LI

extracto trabajado en etanol de 30°; y las concentraciones mínimas

-B

bactericidas fueron de 10mg/mL en los enjuagues a base de

IA

extracto trabajados en etanol de 70° y 42,8 mg/mL en etanol de

LO

G

30°.

AT O

Vitery Sapuyes G. et al 49. en 2010, demostraron la actividad antibacteriana de la Stevia rebaudiana contra del Streptococcus

M

mutans y el Lactobacillus acidophilus, a través de un estudio in

TO

vitro utilizando la técnica de difusión en Agar Mueller Hinton,

ES

evidenciando efecto inhibitorio en su crecimiento.

DE

Por otro lado, la concentración mínima bactericida del

TA D

enjuague bucal utilizado en este estudio, que mostró ser efectiva sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, fue de 75 mg/mL en los

CU L

enjuagues a base de extracto trabajados en etanol de 70°, por lo

FA

que se podría inferir que a mayor concentración del extracto etanólico en el enjuague, mayor es su efecto bactericida; mientras que fue estadísticamente nula en etanol de 30°.

57 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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Estos resultados difieren con los encontrados por Gamboa F45. et al. En Colombia en 2012, demostraron la actividad antimicrobiana in vitro de 5 extractos: hexano, metanol, etanol,

TE CA

acetato de etilo y cloroformo obtenidos a partir de hojas de Stevia

rebaudiana Bertoni sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 por

O

método de difusión en pozo, obtuvieron halos de inhibición de

IB LI

10.0, 9.3, 9.0, 10.0, 12.0 en mm para 30 mg / ml, 120mg / ml, 120

-B

mg / ml, 60 mg / ml y 60 mg / ml de cada extracto respectivamente.

IA

Así mismo, Vitery Sapuyes G. et al 49. en 2010. demostraron

LO

G

la actividad antibacteriana de la Stevia rebaudiana contra del

AT O

Streptococcus mutans y el Lactobacillus acidophilus, a través de un estudio in vitro, formándose halos de inhibición en promedio de

M

14,5 mm con el S. mutans y de 15,5 mm contra el L. acidophilus a

ES

estadística.

TO

una concentración de 50 mg/ml soportado por la prueba

DE

En el presente estudio se realizó un control positivo

TA D

utilizando Clorheridina al 0.12 %, quién demostró su efectividad como Gold Estándar en el control de la microflora oral y para tal

CU L

caso, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, al no observarse

FA

crecimiento del microorganismo y tener la capacidad de producir halos de inhibición de 14.25 mm. La mayor actividad antibacteriana frente a Streptococcus

mutans ATCC 25175 se obtuvieron con los extractos en etanol de

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70°, éstos resultados están de acuerdo con los de MohammadiSichani, (2012). Entre los cuatro extractos de Stevia rebaudiana, los extractos de acetona (28,7 ± 2,8) y etanol mostraron

TE CA

significativamente (p