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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k kInt. Cl. : A61K 38/46

11 N´ umero de publicaci´on:

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˜ ESPANA

A61K 31/395 A61K 9/52

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 93902271.1 kFecha de presentaci´on : 18.01.93 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 671 942 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 20.09.95

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54 T´ıtulo: Preparaci´ on farmac´ eutica que comprende un compuesto capaz de degradar los antibi´ oticos

β-lact´ amicos y su utilizaci´ on.

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73 Titular/es: REMEDY CONSULTING OY

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72 Inventor/es: Heino, Pekka Untamo

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74 Agente: Curell Su˜ nol, Marcelino

30 Prioridad: 17.01.92 FI 920206

Museokatu 8 FIN-00100 Helsinki, FI

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.06.99

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

ES 2 129 078 T3

01.06.99

Aviso:

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

ES 2 129 078 T3 DESCRIPCION Preparaci´on farmac´eutica que comprende un compuesto capaz de degradar los antibi´ oticos β-lact´amicos y su utilizaci´on. 5

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La presente invenci´on se refiere a la totalidad de la terapia antimicrobiana en el hombre en la que los agentes terap´euticos son los antibi´ oticos β-lact´amicos. La presente invenci´on utiliza la administraci´ on oral de enzimas para fragmentar el conjunto de antibi´ oticos β-lact´amicos terap´euticamente perjudiciales, que se acumulan en el tracto digestivo, en combinaci´on con la terapia antibi´ otica β-lact´amica, en compuestos con escasa (baja) actividad antibi´otica o sin ella, eliminando o disminuyendo de este modo los efectos microbiol´ogicos adversos que en caso contrario se manifiestan entre la flora bacteriana normal y beneficiosa del organismo, especialmente en el intestino. Los beneficios de la invenci´on pueden aprovecharse directamente con la prevenci´on convencional y los reg´ımenes de tratamiento para las enfermedades bacterianas. La invenci´on permite asimismo dosis u ´ nicas superiores o utilizar la administraci´on prolongada de antibi´ oticos β-lact´amicos en los casos en los que el tratamiento efectivo ha sido enmascarado por los efectos secundarios microbiol´ogicos del antibi´otico. La invenci´on hace tambi´en posible la terapia antimicrobiana local, por ejemplo, para la gastritis bacteriana, u ´lceras g´astricas o duodenales, utilizando la administraci´ on oral de tales antibi´ oticos β-lact´amicos que han estado limitados hasta ahora a la v´ıa de administraci´ on parenteral. De este modo, las potentes propiedades amtimicrobianas de tales antibi´oticos pueden aprovecharse de forma m´ as amplia. Los antibi´oticos β-lact´amicos son agentes antimicrobianos que destruyen las bacterias sensibles a los antibi´ oticos β-lact´amicos. Su caracter´ıstica com´ un es el anillo β-lact´amico en sus mol´eculas (I): —CH-CH– | | O==C—N— (I)

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El anillo β-lact´amico proporciona a tales compuestos la propiedad antimicrobiana que se aprovecha en el tratamiento de las enfermedades bacterianas. Todos los antibi´oticos β-lact´amicos (en lo sucesivo denominados β-LABs, AB designa antibi´ otico) descubiertos en el per´ıodo 1940-1970 pertenecen a dos tipos estructurales: la penicilina (II), en la que el anillo β-lact´amico se fusiona con un anillo tiazolid´ınico, y las cefalosporinas (III) en las que el anillo β-lact´amico se fusiona con un anillo dihidrotiazina.

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Los compuestos que se han introducido m´ as recientemente se conocen como β-LABs no cl´asicos. Incluyen los carbapenems, en los cuales el ´atomo de azufre en la posici´on 1 del n´ ucleo β-lact´amico de las penicilinas se sustituye por un a´tomo de carbono, y los monobactamos, en los que el anillo β-lact´amico no est´a fusionado en absoluto con ninguna otra estructura en anillo.

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Con la excepci´on de la bencilpenicilina, que se prepara a partir de fuentes naturales, las penicilinas destinadas a la utilizaci´on cl´ınica se derivan semisint´eticamente uniendo una cadena lateral deseada al grupo amino del a´cido 6-aminopenicil´ anico, 6-APA (IV) (documentos US 2.941.995 y US 3.499.909). Un m´etodo de preparaci´ on de la penicilina consiste en extraer penicilinas naturales producidas mediante varios hongos y eliminar entonces enzim´ aticamente las cadenas laterales no deseadas en posici´on 6 en dichas 2

ES 2 129 078 T3 penicilinas utilizando penicilin amidasas (FI 59265) para obtener 6-APA, seguido de la incorporaci´on de una nueva cadena lateral en esta posici´ on (GB 1241844).

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Las cefalosporinas se fabrican a partir del a´cido 7-aminocefalospor´ anico (V) (documento US 3.239.394), 7-ACA, un compuesto an´alogo al 6-APA, uniendo radicales requeridos al grupo amino en la posici´on 7 y a veces incluso a la cadena lateral en posici´ on 3. Los β-LABs no cl´asicos se aislan de microorganismos naturales.

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Ninguno de los compuestos anteriormente mencionados, 6-APA y 7-ACA, posee ninguna potencia antimicrobiana significativa (Korzybski y Kurylowicz 1961, Huber et al 1972). 25

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Las amidasas penicil´ınicas utilizadas en la fabricaci´ on semisint´etica de los β-LABs constituyen estructuralmente un grupo heterog´eneo de enzimas producidos por un amplio conjunto de microorganismos (documento US 3.150.059) y tambi´en por las c´elulas de mam´ıfero (documento US 3.070.511). Su caracter´ıstica com´ un es la capacidad para hidrolizar espec´ıfica y completamente como sustrato la cadena lateral de diversas penicilinas. Las cadenas laterales hidrolizadas incluyen grupos acilo en la posici´ on 6 del n´ ucleo β-lact´amico y, en el caso de las cefalosporinas, grupos acilo en la posici´on 7. Los compuestos restantes son 6-APA y 7-ACA (IV y V) con un grupo amino en posici´on 6 o´ 7, respectivamente. Para recapitular, la reacci´ on es un caso de hidr´ olisis del enlace am´ıdico de una cadena lateral unida al anillo β-lact´amico con una uni´ on am´ıdica lineal. Las amidasas penicil´ınicas se denominan tambi´en penicil´ın acilasas, amino´ acido acilasas o aminohidrolasas. La Nomenclatura Enzim´ atica Internacional sit´ ua estos enzimas en el tipo 3.5.1.11 (EC 3.5.1.11). Los β-LABs constituyen el grupo m´ as extenso de f´armacos antimicrobianos disponibles en la actualidad. Las siguientes penicilinas, entre otras, han encontrado aplicaci´ on en el tratamiento de enfermedades bacterianas. (1) bencilpenicilina (tambi´en conocida como penicilina G), (2) fenoximetilpenicilina (tambi´en conocida como penicilina V), (3) ampicilina, (4) bacampicilina (un ´ester de la ampicilina), (5) pivampicilina (un ´ester de ampicilina), (6) amoxicilina, (7) carbenicilina, (8) piperacilina, (9) feneticilina, (10), propicilina, (11) meticilina, (12) nafcilina, (13) oxacilina, (14) cloxacilina, (15) dicloxacilina, (16) flucloxacilina, (17) epicilina, (18) ciclacilina, (19) ticarcilina, (20) ternocilina, (21) aziocilina y (22) meziocilina. De entre las c´efalosporinas, por lo menos las siguientes se utilizan cl´ınicamente: (23) cefalexina, (24) cefradina, (25) cefatricina, (26) cefaclor, (27) cefroxadina, (28) cefadroxil, (29) cefaloglicina, (30) cefalotina (31) cefapirina, (32) cefacetrilo, (33) cefaloridina, (34) cefazolina, (35) cefuroxima (36) cefamandol, (37) cefoxitina, (38) ceforanida, (39) cefonicida, (40) cefotaxima, (41) ceftizoxima, (42) cefoperazona, (43) ceftriaxon, (44) cefmenoxima, (45) keftazidima, (46) cefotiam, (47) cefodizima y (48) cefixima. Adem´as, (49) imipenem de los carbapenemos y (50) aztreonam de los monobactamos se utilizan cl´ınicamente. Adem´as de los anteriores, varios β-LABs se utilizan habitualmente cl´ınicamente o est´ an sometidos a ensayos cl´ınicos. En lo sucesivo, cuando se haga referencia a uno de los compuestos anteriormente mencionados, se utilizar´a el n´ umero del compuesto que aparece entre par´entesis o su nombre, o ambos. 3

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Los β-LABs se administran bien oralmente o parenteralmente. Esto u ´ltimo incluye las v´ıas intramuscular e intravenosa. 5

La administraci´on oral puede utilizarse cuando el β-LAB de que se trata se absorbe en cantidades suficientes a partir del intestino en la circulaci´ on sangu´ınea sist´emica. De acuerdo con ello, se denominan β-LABs orales. Los siguientes de los compuestos que se relacionan anteriormente son β-LABs orales: 2-6, 9, 10, 13-18, 23-29 y 48. Los β-LABs orales pueden administrarse en la mayor´ıa de los casos parenteralmente si es necesario.

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Los β-LABs deben administrarse parenteralmente en los casos en los que el compuesto particular utilizado no se absorba suficientemente a partir del tracto gastrointestinal. Esto puede deberse a que el f´ armaco se descompone completa o parcialmente por el jugo g´ astrico secretado por el est´omago. Diversas penicilinas (1,7,8,11,12,19-22) pertenecen a esta categor´ıa. 15

Otra raz´on para la administraci´on parenteral es el hecho de que muchos β-LABs, aunque resisten al jugo g´ astrico, se absorben de forma despreciable a partir de los intestinos.

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La mayor´ıa de las cefalosporinas, carbapenemos y monobactamos constituyen tales β-LABs parenterales. Como ejemplos de los porcentajes de la absorci´ on intestinal de los β-LABs, pueden mencionarse los de la penicilina V(2), 40-60 %, ampicilina (3), 30-40 %, bacampicilina (4), superior a 95 %, amoxicilina (6), 60-70 %, feneticilina (9), 20-40 %, cefalexina (23), superior al 95 %, cefradina (24), superior al 90 %, cefaloglicina (29), 25 %, cefalotina (30), 1-3 %, cefaloridina (33), 1-4 % y otras cefalosporinas (31, 32, 34-47), imipenem (49) y aztreonam (50), 0-5 %.

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Cualquier absorci´ on gastrointestinal tiene lugar casi exclusivamente en el duodeno y en el yeyuno proximal, la cual corresponde en t´erminos de duraci´on a 1-3 horas. Esto se refleja en la emergencia del β-LAB ingerido en la circulaci´on sist´emica (plasma) en este periodo de tiempo. Dependiendo del compuesto, la concentraci´ on plasm´atica m´ axima se alcanza habitualmente en un periodo de entre 1-2 horas a partir del momento de la administraci´ on.

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Los β-LABs que han alcanzado la circulaci´on sist´emica a trav´es de la administraci´on oral o parenteral se excretan principalmente por los ri˜ nones en la orina. La excreci´on tiene lugar habitualmente de forma muy r´ apida. La semivida biol´ogica plasm´ atica, calculada a partir del tiempo de la concentraci´ on plasm´atica m´ axima, es de 0,5-2,0 h en nueve de diez β-LABs.

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En el caso de la mayor´ıa de las penicilinas, la excreci´on urinaria del antibi´ otico no alterado viene acompa˜ nada por la excreci´ on de su metabolito cuantitativamente m´ as importante, es decir un a´cido peniciloico (VI) que corresponde al derivado penicil´ınico utilizado.

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O S CH3 k / R—C—NH—CH—CH | | | | CH3 O==C NH—– CH | \ OH COOH

@@,, @

(VI)

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En este compuesto, el cual por ejemplo en el caso de la amoxicilina es el u ´ nico metabolito conocido (correspondiendo al 35 % de la dosis excretada en la orina), el anillo β-lact´amico est´ a abierto. Esto conduce a la desaparici´on de todas las importantes propiedades antimicrobianas que se han apreciado en la mol´ecula original. Lo mismo es v´alido para todos los β-LABs.

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En el hombre, la conversi´ on de las cefalosporinas a los ´acidos cefalospor´ınicos correspondientes mediante la fragmentaci´ on del anillo β-lact´amico, un proceso an´ alogo al del metabolismo penicil´ınico, es sin embargo insignificante cuantitativamente, y por ello, esta v´ıa no es importante en el metabolismo de las cefalosporinas.

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Aquellas cefalosporinas (29-32) en las que el n´ ucleo β-lact´amico transporta en la posici´ on 3 un sustituyente que contiene un enlace ´ester, se metabolizan a las correspondientes deacetil cefalosporinas mediante la fragmentaci´on enzim´atica del enlace ´ester. Las deacetil cefalosporinas se excretan en la orina junto con la cefalosporina no modificada. Estos metabolitos poseen una actividad antimicrobiana equivalente a o m´as d´ebil que la de sus compuestos parentales. Otras cefalosporinas distintas de las 29-32 no producen ning´ un metabolito urinario significativo.

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Imipenem (48) se inactiva m´ as o menos completamente mediante fragmentaci´on del anillo β-lact´amico previamente a la excreci´on urinaria del metabolito en cuesti´ on. Algunos β-LABs se excretan no alterados en la bilis en cantidad significativa, adem´ as de en la orina. Esta es la v´ıa excretora para el 20 % de la piperacilina (8), del 30-40 % del ceftriaxon (43) y superior al 80 % de la cefoperazona (42). El ceftriaxon es excepcional porque se sabe que la proporci´ on excretada en la bilis se fragmenta a metabolitos inactivos mediante la flora bacteriana normal en el tracto gastrointestinal (Therapeutic Drugs 1991). Habitualmente, la flora intestinal no fragmenta los β-LABs que penetran en el tracto gastrointestinal. Por ejemplo, en el caso de la ampicilina (3), la cual se utiliza ampliamente y desde hace mucho tiempo como un antibi´ otico que se administra por v´ıa oral, la mayor parte de la dosis se excreta sin modificar en las heces (Mandell y Sande 1990).

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Toxicol´ogicamente, los β-LABs son no t´ oxicos casi completamente, lo cual es una ventaja esencial comparado con otros antibi´ oticos que se utilizan cl´ınicamente. Adem´ as de los propios β-LABs, sus metabolitos importantes, tales como los a´cidos peniciloicos anteriormente mencionados, no son t´oxicos. 25

Sin embargo, los metabolitos de los β-LABs con un anillo β-lact´amico fragmentado pueden (a diferencia de los β-LABs intactos) dar lugar a reacciones al´ergicas en individuos susceptibles. Tales reacciones tienen lugar en el 0,7-10 % de los pacientes tratados con penicilinas. El porcentaje correspondiente para las cefalosporinas es del 0,8-7,5 %.

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En los a˜ nos 1950, en una ´epoca en la que los β-LABs que se utilizaban cl´ınicamente se limitaban a unos pocos compuestos penicil´ınicos y la reacciones al´ergicas que se encontraban en la terapia se cre´ıan debidas a la mol´ecula penicil´ınica intacta, se llevaron a cabo ensayos con un enzima, entonces conocido como penicinilasa, que fragmenta la penicilina a a´cido peniciloico. El objetivo era investigar el potencial terap´eutico de dicho enzima en el tratamiento de estos, a menudo s´ıntomas graves, utilizando la administraci´on parenteral.

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Los ensayos condujeron a resultados inconsistentes, y pronto se dejaron de realizar a causa de los efectos secundarios al´ergicos frecuentes, es decir, los mismos s´ıntomas que la terapia del ensayo pretend´ıa evitar (Hyman 1959). 40

Las manifestaciones cl´ınicas de la reacci´on al´ergica se sabe que habitualmente son causadas por complejos alerg´enicos formados en una reacci´ on entre prote´ınas nativas del organismo y n´ ucleos β-lact´amicos abiertos (por ejemplo, a´cidos peniciloicos). Actualmente no existe tratamiento farmacol´ogico causal para evitar la formaci´ on de tales complejos. 45

Como la utilizaci´on de la penicilinasa ha mostrado ser cl´ınicamente desventajosa y como no tiene, seg´ un el conocimiento habitual, fundamento farmacol´ ogico, este modo de tratamiento es desconocido en la literatura habitual y en la pr´ actica cl´ınica. 50

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Como el desarrollo y presentaci´ on de los s´ıntomas al´ergicos en los individuos susceptibles son independientes de la dosis, los antibi´oticos β-lact´amicos est´an contraindicados en estos pacientes. Aparte del grupo de pacientes anteriormente mencionado, los β-LABs pueden utilizarse solos o en combinaci´on con otros f´ armacos antimicrobianos para la mayor´ıa de las enfermedades bacterianas que tienen lugar en el hombre, la mayor parte con resultados curativos. Adem´as, todos lo individuos que reciben dosis terap´euticas de estos f´ armacos exhiben efectos secundarios microbiol´ogicos en la flora bacteriana normal de la boca, v´ıas respiratorias superiores, tracto gastrointestinal, tracto urinario, genitales y piel.

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En la presente solicitud de patente, los efectos secundarios microbiol´ogicos de los β-LABS se refieren a sus efectos indeseables sobre la flora bacteriana normal del organismo, debi´endose estos efectos a las 5

ES 2 129 078 T3 propiedades antimicrobianas cl´ınicas de estos f´armacos.

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Los efectos secundarios microbianos de β-LABs , as´ı como los de otros tipos de antibi´ oticos, pueden ser subcl´ınicos, es decir que dan lugar a s´ıntomas que no son perceptibles, o pueden manifestarse como s´ıntomas suaves o incluso fatales. Ejemplos de efectos secundarios suaves son la diarrea familiar penicil´ınica y la infecci´on de las mucosas por las levaduras, mientras que entre los efectos secundarios fatales se incluyen colitis grave causada por las cefalosporinas de espectro amplio o el carbapenem y la infecci´on f´ ungica sist´emica que se encuentra en los pacientes inmunodeprimidos. Los anteriores son ejemplos de superinfecci´on, esto es, del desarrollo de una nueva enfermedad microbiana en combinaci´on con la terapia antibi´ otica, siendo el agente causal de la nueva infecci´ on distinto del de la condici´ on original. Las superinfecciones son relativamente habituales pero potencialmente muy peligrosas, porque los microorganismos causantes, tales como enterobacterias, bacterias del g´enero Pseudomonas, estafilococos y muchos hongos microsc´ opicos, son a menudo muy resistentes a los f´ armacos antimicrobianos habitualmente disponibles. Las superinfecciones son habitualmente m´ as habituales en el intestino, especialmente en el colon, cuya abertura contiene la concentraci´on m´as grande de la flora bacteriana normal del organismo. Este u ´ ltimo hecho puede apreciarse cuando se considera que hasta un 50 % del peso seco de las heces puede estar formado por bacterias intestinales. A diferencia del intestino grueso, el intestino delgado est´ a, con la excepci´on de su extremo muy distal, desprovisto de bacterias a causa de los enzimas bacteriol´ıticos secretados por el intestino delgado. La funci´ on de la flora bacteriana fisiol´ ogica anteriormente mencionada es, adem´as contribuir a la producci´ on y absorci´ on normal de muchas sustancias traza esenciales para el hombre, ocupar sitios potenciales de crecimiento de microorganismos patog´enicos y excretar agentes qu´ımicos que inhiban el crecimiento de tales microrganismos. Respecto a los β-LABS, sus efectos microbiol´ogicos adversos en los intestinos se deben a la administraci´on oral o parenteral que pone en contacto a un conjunto del antibi´ otico particular con la flora bacteriana intestinal fisiol´ ogicamente beneficiosa. De esta forma, los β-LABs destruyen tales componentes de la flora bacteriana normal que son sensibles a su acci´on, incrementando de este modo la cantidad relativa de bacterias resistentes a estos f´armacos. Esto conduce a la alteraci´on de la ecolog´ıa microbiana intestinal fundamental y a la creaci´on de circunstancias favorables para la multiplicaci´ on y crecimiento de microorganismos patog´enicos resistentes, tales como las especies oportun´ısticas habituales de Clostridium difficile (Sawa et al., 1985). Cuanto m´ as altas son las dosis y m´as largo el per´ıodo de tratamiento, mayor es el riesgo de superinfecci´on. De todos los antibi´ oticos, la probabilidad de superinfecciones es m´axima con los β-LABs de amplio espectro, especialmente cuando se administran en combinaci´ on con otros antibi´ oticos de amplio espectro (Sande et al 1990). Es digno de menci´ on que el riesgo de superinfecciones existe incluso en el caso de administraci´on parenteral de los β-LABs e incluso si s´olo una cantidad peque˜ na del antibi´ otico se espera que difunda en el intestino. En muchos casos, el riesgo de efectos secundarios microbiol´ogicos en los intestinos y en otros lugares en el organismo evita la continuaci´on de la terapia antimicrobiana durante un periodo de tiempo suficiente. Tambi´en pone l´ımites a las dosis u ´ nicas y a la dosificaci´on total en 24 horas. Este u ´ltimo problema se ha solucionado parcialmente en la terapia oral utilizando preparaciones que son absorbidas o´ptimamente a partir de los intestinos. As´ı, la amoxicilina (6), con su mejor perfil de absorci´ on, se prefiere habitualmente respecto a la ampicilina (3) aunque ambos tienen id´enticos espectros antibacterianos. La ampicilina se ha derivado ulteriormente a formas de prof´ armaco tales como la bacampicilina (4) y la pivampicilina (5) (documento US 3.488.729). Estos ´esteres de ampicilina no poseen efecto amtimicrobiano en el intestino. Sin embargo, cuando se administran oralmente, se absorben casi completamente a partir del intestino despu´es de lo cual se hidrolizan en la circulaci´ on sist´emica a ampicilina. El efecto terap´eutico de la bacampicilina y de la pivampicilina se basa exclusivamente en la actividad antimicrobiana de la ampicilina liberada a partir de su ´ester precursor.

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Algunas bacterias de la flora col´onica normal se han encontrado capaces de degradar algunos de los β-LABs, incluyendo el ceftriaxon (43) y la cefixima (48), in vivo (Sawa et al., 1985). 6

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El documento WO 88/07865 da a conocer un enfoque por el que las bacterias col´onicas capaces de degradar algunos de los β- LABs in vitro se aislan de las heces humanas, se cultivan in vitro y se procesan en una preparaci´ on farmac´eutica administrada oralmente que contiene dichas bacterias. Este enfoque se reivindica para reducir los efectos adversos de los β-LABs sobre la flora bacteriana normal del intestino. El m´etodo se basa en bacterias vivientes con una capacidad caracter´ıstica para secretar β-lactamasa in vitro. Siempre y cuando las bacterias en cuesti´ on pueden protegerse contra la acci´ on digestiva de los jugos g´astricos e intestinales en su camino al intestino grueso, el m´etodo puede utilizarse sin duda para aumentar el contaje de dichas bacterias en el intestino grueso, en el que ya se encuentran en cantidades fisiol´ ogicas. Sin embargo, los efectos adversos de la terapia β-LAB concomitante sobre la flora bacteriana intestinal no se reducen necesariamente mediante la introducci´on de las bacterias intestinales resistentes a β-LABs. Por el contrario, un aumento en el n´ umero relativo de bacterias intestinales resistentes a β-LAB y su proliferaci´on independiente, causa una situaci´ on t´ıpica que predispone al intestino a las superinfecciones. La situaci´on se agrava ulteriormente, pues los β-LABs administrados concomitantemente destruyen a dichos organismos de la flora normal, que son sensibles al antibi´ otico. El mecanismo de acci´on de las prote´ınas enzim´aticas y la degradaci´ on in vivo de los β-LABs a la que se refiere la presente invenci´on, pueden demostrarse ambos de modo seguro, lo cual no ocurre con el documento WO 88/07865. De hecho, ceftriaxon, el antibi´ otico utilizado en los ejemplos de la solicitud de esta u ´ ltima invenci´on, se sabe que se degrada a metabolitos inactivos mediante la flora intestinal in vivo, a´ un sin adici´ on de las bacterias intestinales tal como se propone en dicha publicaci´ on (Therapeutic Drugs 1991).

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As´ı, el enfoque presentado en el documento WO 88/07865 altera las relaciones ecol´ogicas entre los microbios intestinales, mientras una soluci´on seg´ un la presente invenci´ on evita espec´ıficamente los efectos sobre la flora intestinal. La soluci´ on presentada en el documento WO 88/07865 no toma en consideraci´ on la utilizaci´on de un enzima aislado que degrade β-LAB o el hecho de que tal enzima puede aislarse a´ un a partir de otros microorganismos que las bacterias (hongos y algas) y tambi´en a partir de las c´elulas de mam´ıferos. Incluso, es posible la producci´on utilizando la ingenier´ıa gen´etica. Adem´as, es t´ecnicamente m´as simple llevar a cabo, por ejemplo, una preparaci´on ent´erica del enzima que una preparaci´on correspondiente de microbios vivos. Las dosis, actividades, pureza, etc, de las prote´ınas enzim´aticas pueden medirse de modo seguro y estandarizarse.

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Los enfoques presentados hasta ahora no han sido capaces de reducir el problema habitual asociado con β-LAB de los efectos secundarios microbiol´ogicos, el cual a trav´es de los intestinos afecta al organismo entero. La utilizaci´on siempre creciente de los β-LABs en general y de los β-LABs de amplio espectro en particular en la terapia antibacteriana, ha agravado el problema de a˜ no en a˜ no a ambos niveles, individual y de la poblaci´ on. El cambio hacia antibi´ oticos de espectro m´ as amplio se debe al hecho de que est´an aumentando las especies y cepas bacterianas resistentes a los antibi´ oticos que se encuentran en las infecciones de los lugares m´as habituales. El mecanismo principal por el cual ciertas bacterias patog´enicas desarrollan una resistencia a β-LABs es la selcci´on de bacterias que producen β-lactamasa en el paciente que sufre tratamiento. Las β-lactamasas son un grupo estructuralmente heterog´eneo de enzimas que comparte la capacidad de hidrolizar el anillo β-lact´amico de los β-LABs en el enlace am´ıdico c´ıclico, fragmentando de este modo el anillo β-lact´amico y destruyendo las propiedades antimicrobianas de la mol´ecula en cuesti´on.

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Las β-lactamasas microbianas (EC 3.5.2.6) son denominadas penicil´ın hidrolasas amido β-lact´amicas. Seg´ un el sustrato que se fragmenta m´ as activamente por β-lactamasas particulares, estos enzimas se han denominado tambi´en penicilinasas (documento US 2.982.696) o cefalosporinasas. Las dehidropeptidasas (EC 3.4.13.11) son β-lactamasas con una capacidad caracter´ıstica para hidrolizar espec´ıficamente el anillo β-lact´amico de los carbapenemos. Pueden aislarse s´olo a partir de c´elulas de mam´ıferos (Kropp et al 1982). Las β-lactamasas catalizan la conversi´on de las penicilinas espec´ıficamente a los ´acidos peniciloicos correspondientes, de las cefalosporinas a los correspondientes a´cidos cefalosporanoicos y de los carbapenemos y de los monobactamos a los compuestos correspondientes con un anillo β-lact´amico abierto. Las β-lactamasas conocidas exhiben un espectro m´as amplio de actividad hidrol´ıtica que las amida7

ES 2 129 078 T3 sas (p.3, l´ıneas 7-16). Las amidasas conocidas son capaces de hidrolizar por lo menos los compuestos siguientes: 1-3, 23, 24, 29, 30 y 33. Las β-lactamasas conocidas, sin embargo, son capaces de hidrolizar cada uno de los sustratos que se relacionan (1-50). 5

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Contrariamente a las β-lactamasas, las amidasas no han dado lugar a problemas cl´ınicos en forma de resistencia bacteriana a la vez que la terapia β-LAB. La presente invenci´on tiene como objetivo reducir los problemas microbiol´ ogicos que se encuentran en la terapia β-LAB para evitar los efectos secundarios microbiol´ogicos causados por la administraci´on oral y parenteral de β-LABs. La terapia de β-LAB se lleva a cabo tradicionalmente seg´ un el principio de la acci´ on sist´emica del f´ armaco que es independiente de si la infecci´on en s´ı misma es local o sist´emica (por ejemplo, una erupci´ on inflamada). La aplicaci´ on local a la piel no se ha aceptado a causa de su riesgo de sensibilizaci´ on.

15

Sin embargo, las β-LABs introducidas en el tracto digestivo no son localmente sensibilizantes.

20

Durante los a˜ nos recientes, la mayor´ıa de gastritis y de u ´ lceras p´epticas han mostrado estar causadas por Helicobacter pylori, una bacteria que infecta la mucosa del tracto digestivo superior. La erradicaci´ on de este organismo mediante terapia antimicrobiana ha mostrado ser m´as efectiva que cualquiera de los tratamientos previos para las condiciones anteriores. La eliminaci´on con ´exito de H.pylori ha conducido a resultados duraderos en estas enfermedades.

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La forma m´ as habitual de tratamiento actualmente es la administraci´on oral, con altas dosis y durante 14 d´ıas de amoxicilina (6) o alternativamente tetraciclina en combinaci´on con el antibi´ otico nitroimidazol y la sal de bismuto, conocida como terapia triple (Rauws y Tytgat 1960). Sin embargo, el tratamiento se asocia con una alta frecuencia de efectos secundarios que a menudo conducen a interrumpir la terapia. Las sales de bismuto, que se utilizan durante per´ıodos de 4-6 semanas, causan a veces efectos secundarios en el sistema nervioso central que pueden ser graves. Estos efectos pueden asociarse con la utilizaci´on de los antibi´ oticos de nitroimidazol.

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Los resultados que se informaron del tratamiento con amoxicilina sola (Rauws et al 1988) han sido tan buenos como los obtenidos con terapia triple. En estos estudios, la duraci´on del tratamiento (28 d´ıas) fue mucho m´ as larga que el aplicado en la terapia convencional con amoxicilina (7-10 d´ıas), que increment´o el riesgo de efectos secundarios microbiol´ogicos.

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Sin tomar en consideraci´ on si los f´armacos anteriores se utilizan solos o combinados, el resultado del tratamiento dirigido a erradicar H.pylori es habitualmente incierto, pues el riesgo o que tengan lugar actualmente efectos secundarios impide un tratamiento de suficiente duraci´ on e intensidad. Como resultados, H.pylori puede encontrarse otra vez en la mucosa g´astrica de la mitad de los pacientes cuatro semanas despu´es de la finalizaci´on del tratamiento (Iserhard et al, 1990). Seg´ un estudios in vitro, H.pylori es sensible a los siguientes β-LABs adem´as de la amoxicilina: 1,3,8,30, 34, 40, 48 y 49. Entre los u ´ltimos, 30, 34, 40 y 49 son β-LABs de amplio espectro reservadas para utilizaci´on parenteral en hospitales, y su administraci´on oral es desconocida en la pr´ actica cl´ınica. La penicilina G (1) es sensible a la acci´on de a´cidos y se descompone r´ apidamente en el est´omago. Siendo m´as f´ acilmente absorbida que la ampicilina (3), la amoxicilina se ha utilizado para la erradicaci´on de H.pylori. La bacampicilina (4), tambi´en se ha utilizado en ensayos terap´euticos, lo cual presenta una oportunidad para evaluar el papel del efecto local de β-LABs, en este caso amoxicilina, en la terapia de erradicaci´on de H.pylori. Debido a que la bacampicilina, incluso a una alta concentraci´on de ampicilina (la cual, debido a la naturaleza prof´ armaco de la bacampicilina, puede s´olo ejercer una influencia sist´emica), no ha mostrado ning´ un efecto antimicrobiano apreciable sobre H.pylori y ya que el espectro antibacteriano y la farmacocin´etica sist´emica de la ampicilina y amoxicilina son casi id´enticas (Hirschl et al., 1987), puede concluirse que a la amoxicilina tambi´en le falta un efecto sist´emico apreciable sobre esta especie bacteriana. Por tanto, los resultados positivos ganados con la amoxicilina oral en la erradicaci´ on de H.pylori pueden explicarse como un efecto t´opico de dicho β-LAB.

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La presente invenci´on pretende asimismo a reducir los efectos secundarios microbiol´ ogicos de las β-LABs en casos en los que la terapia antimicrobiana est´a dirigida localmente al tracto digestivo supe8

ES 2 129 078 T3 rior, es decir al es´ofago, est´omago y duodeno, los cuales pueden contener bacterias patog´enicas sensible a los β-LABs empleados.

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La presente invenci´on ofrece un significativo alivio de los problemas anteriormente mencionados que se encuentran en el tratamiento de las enfermedades bacterianas con los β-LABs y causados por los efectos secundarios microbiol´ogicos de dichos f´ armacos. Las preparaciones farmac´euticas orales con un patr´ on programado de liberaci´ on se refieren a formas de dosificaci´ on monol´ıticas (en forma de una part´ıcula) o de multipart´ıculas caracterizadas por la liberaci´on del ingrediente activo comprendido en un cierto y deseado sector del tracto digestivo que se han programado anteriormente en la estructura de la preparaci´ on. Las soluciones monol´ıticas incluyen el empaquetamiento de los f´ armacos en varias matrices insolubles a partir de los poros de lo cuales el ingrediente activo se disuelve a un ritmo uniforme cuando la preparaci´on se traslada a lo largo del tracto digestivo (“forma de dosificaci´on matricial”). En una soluci´ on que se parece a la anterior, el ingrediente activo se libera a trav´es de un orificio en el recubrimiento insoluble del monolito, por ejemplo, un comprimido, como resultado de la presi´ on osm´otica cuando una masa inerte que absorbe agua en el monolito se hincha (“dispositivo de bombeo osm´ otico”). Las soluciones multiparticuladas incluyen gr´ anulos revestidos con una capa resistente al jugo g´ astrico, la cual es, por ejemplo cuando el pH aumenta, fragmentada en un sector deseado del intestino, liberando el ingrediente activo comprendido (“gr´anulos ent´ericos revestidos”). Un principio similar se utiliza en el caso de liposomas resistentes al jugo g´astrico en los que puede empaquetarse un f´ armaco con el mismo prop´ osito que en las soluciones anteriores. La presente invenci´on implica la utilizaci´ on de enzimas administrados oralmente para fragmentar el conjunto adverso de β-LAB, que se acumula inevitablemente en los intestinos, en combinaci´on con la terapia β-LAB, en compuestos con poca o sin actividad antibacteriana en el intestino. Las β-lactamasas y/o amidasas o los fragmentos activos (constituye una propiedad general de los enzimas que puedan truncarse hasta cierto grado sin p´erdida de actividad; sin embargo, es requisito previo que el sitio catal´ıtico del enzima permanezca intacto) de cualquiera de estas, aislados espec´ıficamente con este prop´osito, pueden, en combinaci´ on con la terapia β-LAB, e incorpor´ andolos a preparaciones farmac´euticas estructural y funcionalmente definidas con un patr´ on de liberaci´ on programado, dejar que sean liberadas preferentemente en el duodeno y/o en el intestino delgado y/o en el intestino grueso y de este modo ponerse en contacto, como se programaron, con dicho conjunto de β-LAB en un sector deseado del canal alimentario. Las preparaciones orales de dichos enzimas pueden liberarse al intestino tambi´en protegi´endolas de los jugos g´ astricos mediante compuestos que inhiben al a´cido clorh´ıdrico y/o la pepsina. La secreci´on de a´cido clorh´ıdrico puede inhibirse por ejemplo mediante agentes bloqueantes de los receptores H2 de la histamina o mediante los denominados inhibidores de bomba prot´ onica, tal como el omeprazol. La pepsina puede inhibirse por ejemplo con pepstatin. Los enzimas pueden tambi´en protegerse del jugo g´astrico neutralizando el a´cido clorh´ıdrico con un anti´ acido; como el pH aumenta, la actividad de la pepsina tambi´en se inhibir´ a.

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Mediante la utilizaci´on de amidasas liberadas por los medios anteriores en el sector deseado del canal alimentario, las penicilinas pueden convertirse en 6-APA y las cefalosporinas en los ´acidos 7-aminocefalospor´anicos (7-ACA o compuestos con un n´ ucleo 7-ACA) sin propiedades antimicrobianas apreciables. 50

Mediante la utilizaci´on de las amidasas liberadas por los medios anteriores en el sector deseado del canal alimentario, la penicilina puede convertirse en los correspondientes ´acidos peniciloicos y las cefalosporinas en los correspondientes a´cidos cefalosporanoicos. Los carbapenemos y monobactamos se convierten del mismo modo en los compuestos correspondientes con un anillo β-lact´amico abierto. Los compuestos anteriores no exhiben actividad antimicrobiana.

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Las ventajas y beneficios de la invenci´on se producen utilizando los procedimientos que se presentan como distintivos en las reivindicaciones adjuntas.

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La aplicaci´on de la presente invenci´ on para la prevenci´ on de los efectos secundarios microbiol´ ogicos de β-LABs posee las siguientes ventajas principales respecto al estado de la t´ecnica. Debido que la actividad antimicrobiana de la fracci´ on no absorbida de una dosis de un β-LAB oral 9

ES 2 129 078 T3 e incompletamente absorbible, que posee efectos secundarios microbiol´ ogicos sobre la flora bacteriana normal del intestino, puede eliminarse parcial o completamente

5

- conjuntamente con la terapia oral convencional de β-LAB, tal como el tratamiento de infecciones respiratorias en lugares habituales e infecciones d´ermicas, se producen menos efectos secundarios microbiol´ogicos tales como diarrea debida a antibi´oticos e infecciones mucosas de levaduras, que impiden la cualidad y eficacia de la terapia, comparados con la pr´ actica cl´ınica habitual.

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- se producen dosis simples m´as altas y de 24 horas que las que previamente se han podido adoptar, tal como se requiere, en la terapia β-LAB oral. Tambi´en puede prolongarse la duraci´ on total del tratamiento, lo cual constituye una gran ventaja, por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades gastrointestinales (gastritis y u ´lceras p´epticas) causadas por H.pylori.

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- β-LABs no absorbibles, cuya utilizaci´on se ha limitado a la terapia parenteral, pueden por primera vez considerarse para la terapia oral en el tratamiento t´opico de infecciones bacterianas del tracto digestivo superior, que incluye varios grados de infecci´ on mucosa g´astrica causada por H.pylori.

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En vista de los beneficios anteriormente relacionados que aumentan el ´area de utilizaci´on de β-LABs, las condiciones gastrointestinales causadas por H.pylori pueden tratarse de forma m´ as efectiva y pueden alcanzarse resultados m´as completamente curativos utilizando s´ olo un β-LAB, produciendo todav´ıa menos efectos secundarios microbiol´ogicos que previamente.

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Utilizando un u ´nico antibi´ otico β-lact´amico se evitan naturalmente los efectos secundarios producidos por los otros agentes antimicrobianos inclu´ıdos en una terapia de combinaci´ on. A causa del riesgo de efectos secundarios, la terapia antimicrobiana de las enfermedades gastroinestinales causadas por H.pylori se ha aplicado hasta la fecha s´olo al tratamiento de las u ´lceras p´epticas, no a la gastritis, dejando tranquilos a los transportadores asintom´ aticos de H.pylori. La presente invenci´on permite que la terapia simple β-LAB se extienda a los dos u ´ ltimos grupos, en los cuales, as´ı como en el primer grupo de pacientes mencionado, tal terapia causal puede esperarse que reduzca la necesidad de medicaci´ on sintom´atica. A´ un en el caso de β-LABs administrados parenteralmente, parte de la dosis alcanza la abertura intestinal, bien mediante excreci´ on en la bilis o mediante difusi´ on a trav´es de la pared intestinal, causando efectos secundarios microbiol´ ogicos en la flora bacteriana normal.

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Como anteriormente, las propiedades antimicrobianas de dicho conjunto de β-LABs pueden ser completa o parcialmente eliminadas mediante aplicaci´on de la presente invenci´ on, 40

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- reduciendo decididamente estos efectos secundarios en la terapia β-LAB parenteral convencional, por ejemplo en el tratamiento de infecciones sist´emicas graves que necesiten dosificaciones de 24 horas muy altas, en forma de dosis divididas o de infusi´ on continua y utilizando a menudo terapias combinatorias que impliquen un gran n´ umero de efectos secundarios, y mejorando por ello el resultado del tratamiento. Debe tenerse en cuenta que - la inactivaci´on microbiol´ogica del β-LAB acumulado en el intestino solo tiene lugar despu´es de que el compuesto en cuesti´on ha ejercido su efecto terap´eutico. - los compuestos derivados de los β-LABs inactivados no son t´ oxicos

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- los compuestos anteriores se absorben mucho menos a partir del intestino que sus compuestos parentales.

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As´ı, los beneficios anteriormente mencionados que se obtienen aplicando la invenci´ on est´an disponibles sin ning´ un menoscabo de las propiedades terap´euticas de los β-LABs empleados y sin ning´ un aumento en la toxicidad cl´ınica o en la alergenicidad respecto a la que convencionalmente se asocia con la utilizaci´on del compuesto parental.

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El desarrollo qu´ımico de β-LABs dirigido a producir nuevas construcciones moleculares con espectros antimicrobianos m´as amplios y una mejor resistencia a la β-lactamasa, ha tra´ıdo desafortunadamente un incremento simult´aneo en el riesgo de efectos secundarios. Considerando los cambios de largo alcance en el ´ambito completo de la terapia antibi´ otica bas´ andose en la poblaci´ on, la resistencia bacteriana inducida por mutaciones a los β-LABs ha constituido un grave asunto en la pr´actica cl´ınica. Muchos 10

ES 2 129 078 T3 β-LABS y otros agentes antimicrobianos que fueran eficaces s´olo hace dos a˜ nos, est´an perdiendo su efecto r´ apidamente y por tanto su significado en el tratamiento de muchas enfermedades causadas por bacterias sensibles anteriormente a estos f´armacos. Esto ha sido el resultado inevitable del aumento explosivo de la utilizaci´on, a menudo indiscriminada, de los antibi´ oticos. 5

Respecto a la aplicaci´on de la presente invenci´ on a la terapia antibi´ otica utilizando β-LABs y en vista de lo que se ha expuesto anteriormente, debe tenerse en cuenta que las aplicaciones propuestas tienden a disminuir las dosis y reducir el n´ umero de distintos β-LABs e indirectamente, de otros antibi´ oticos utilizados en la terapia. 10

Como el antibi´otico se inactiva antes de que alcance el intestino grueso, la aplicaci´on de la invenci´ on no causa efectos antibacterianos que alteren la ecolog´ıa del intestino grueso. En este contexto, la invenci´on puede considerarse que posee el beneficio general de que su aplicaci´ on no deja lugar para la selecci´on de nuevas cepas de bacterias resistentes a los antibi´ oticos. 15

Verdaderamente, puede considerarse que el beneficio general m´as importante de la invenci´on consiste en el hecho de que su aplicaci´on no promueve la selecci´on de nuevas cepas patog´enicas de bacterias resistentes a los antibi´oticos. 20

25

A los procedimientos requeridos para producir el efecto reivindicado por la invenci´ on se ha hecho referencia anteriormente. La aplicabilidad de la invenci´on puede mejorarse ulteriormente de la forma siguiente: El conducto hepatopancre´ atico, que en el adulto penetra en el duodeno de 10 a 15 cm distalmente a partir del p´ıloro, secreta, especialmente despu´es de las comidas, un proenzima inactivo que se conoce como tripsin´ ogeno, al cual convierte r´ apidamente la enteroquinasa de la pared intestinal en tripsina, un enzima activo que digiere las prote´ınas en el quimo. La tripsina activa tambi´en otros enzimas digestivos responsables de fragmentar las prote´ınas; activa posteriormente al tripsin´ ogeno mismo en un procedimiento que se conoce como autocat´alisis.

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El efecto de la tripsina en el quimo es la m´ axima en el duodeno y en la secci´on proximal del intestino delgado. El enzima pierde gradualmente su actividad hacia el extremo distal del intestino delgado. La secreci´on de tripsina es m´ınima durante el ayuno. 35

Como la acci´on proteol´ıtica de la tripsina activa y de otros enzimas digestivos afecta tambi´en a cualesquiera β-lactamasas y amidasas administradas oralmente utilizadas en aplicaciones de la presente invenci´on, especialmente si los u ´ ltimos enzimas est´an programados para liberarse ya en el duodeno, es sensible a inactivar la tripsina duodenal mediante inhibidores de la tripsina.

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Entre los inhibidores conocidos de la tripsina se incluyen la α 1-antitripsina, el inhibidor de la tripsina pancre´ atica (PSTI) (FI 880017), la aprotinina (documentos US 2.890.986, EP 0 420 600 A2), tripstatina (EP 0 384 559), α2-macroglubulina, inhibidor de la tripsina de soja e inhibidor de la tripsina blanca de huevo. Cada uno de estos est´ a disponible comercialmente. Son todos estructuralmente prote´ınas.

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En una aplicaci´ on de la presente invenci´ on, se incorporan a preparaciones farmac´euticas con un patr´ on de liberaci´ on programada y se conducen al sitio ( o sitios) deseado(s) de acci´ on mediante la administraci´on oral, bien separadamente de la β-lactamasa y/o de la amidasa, o en la misma preparaci´on con estos enzimas.

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Naturalmente, los compuestos que suprimen o inhiben otros enzimas digestivos (pepsina, etc), pueden tambi´en utilizarse si es necesario.

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La funci´ on de la invenci´ on se describir´ a seguidamente con ejemplos de aplicaciones pr´acticas. Sin embargo la utilizaci´ on m´edica, los m´etodos y las preparaciones basadas en la invenci´ on no est´ an limitadas a estos ejemplos. Ejemplo 1

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La invenci´on es aplicable, por ejemplo, a la terapia antimicrobiana t´ opica para u ´lceras p´epticas y gastritis sintom´ aticas o asintom´ aticas, causadas por H.pylori, de la manera siguiente: El β-LAB utilizado en el ejemplo es ampicilina (VII) 11

ES 2 129 078 T3

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al cual se sabe que H.pylori es sensible in vitro, siendo la concentraci´on m´ınima que inhibe el 90 % de las bacterias (MIC90 ) de 0,03 µg/ml (Lambert et al 1986). Sabemos que en el hombre de s´ olo un total del 30-40 % de una dosis oral de ampicilina se absorbe en la circulaci´on sangu´ınea sist´emica, con el resto permaneciendo en el intestino. La absorci´on tiene lugar en un intervalo de alrededor de dos horas, esto es, antes de que el antibi´ otico alcance le porci´on media del intestino delgado. Una mayor parte de la dosis se excreta inalterada en las heces. La vida media de la ampicilina en la circulaci´ on sist´emica es aproximadamente de 1,5 horas. En el ejemplo, la ampicilina se administra oralmente de la forma convencional como tres o cuatro dosis diarias de 250-1000 mg cada una. Preferentemente, se toman gr´ anulos de 3-5 mm de di´ ametro en un est´ omago vac´ıo, en cuyo caso el agente es retenido en el est´omago durante 30-60 minutos. Durante este per´ıodo, cuando los gr´ anulos se disuelven, una concentraci´ on de ampicilina de 104 -105 veces el MIC para H.pylori se mantiene en la mucosa g´astrica. Sabemos que con β-LABs, dos o tres per´ıodos de 30-60 minutos diariamente durante los cuales la concentraci´ on del antibi´ otico excede al MIC, es suficiente para producir un efecto bactericida completo. Esta condici´ on se cumple evidentemente en todas las capas mucosas en el ejemplo presente, pues la mucosa g´astrica (y la duodenal) poseen s´ olo un grosor de 1 mm. De acuerdo con las caracter´ısticas distintivas de la invenci´on, la ampicilina que penetra en el duodeno a trav´es del p´ıloro ejerce su efecto terap´eutico local sobre la mucosa despu´es de lo cual se fragmenta a 6-APA (IV), el cual posee poca actividad microbiol´ ogica o al ´acido peniciloico que corresponde a la ampicilina (VI), el cual no posee en absoluto actividad antimicrobiana. Esto tiene lugar antes de que la ampicilina inalterada contacte con la flora bacteriana fisiol´ ogica del intestino delgado distal y del intestino grueso.

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La ampicilina se fragmenta mejor a VI mediante la lactamasa tipo 1-β (en forma abreviada BCI en esta solicitud de patente) producida por la cepa 569/H/9 de Bacillus cereus. El aislamiento, purificaci´ on y propiedades bioqu´ımicas de BC se han documentado (Davies y Abraham 1974), y el enzima est´a disponible comercialmente (Sigma MO, USA).

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La ampicilina se fragmenta mejor a 6-APA mediante la ampicilina acilasa (ampicilina amidasa) (en forma abreviada PMAA en esta solicitud de patente) producida por la cepa IFO 12020 de Pseudomonas melanogerum. El aislamiento, purificaci´ on y propiedades bioqu´ımicas de PMAA se han documentado (Kim y Buyn 1990).

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Las actividades enzim´aticas se expresan en unidades (U). 1U de enzima fragmenta 1 µM de su sustrato en 1 minuto.

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Con la ampicilina como su sustrato, BC I posee una actividad espec´ıfica de 2000 U/mg de prote´ına enzim´atica a una temperatura (37◦C) y pH (4,5-7,0) que corresponde a las condiciones en el duodeno y en el intestino delgado. Esto significa que 1 mg de BCI fragmenta 680 mg de ampicilina al correspondiente ´acido peniciloico por minuto. La actividad espec´ıfica correspondiente de PMAA es de 1000 U/mg, y as´ı 1 mg de esta prote´ına enzima fragmenta 340 mg de ampicilina a 6-APA por minuto en las mismas condiciones. BCI o PMAA, dependiendo de si uno desea la ampicilina inactivada al 6-APA o al VI, se administra oralmente en forma de una preparaci´ on farmac´eutica con liberaci´on programada del ingrediente activo 12

ES 2 129 078 T3 en el duodeno, donde el enzima se pone en contacto con la ampicilina simult´ aneamente presente en esta parte del tracto gastrointestinal.

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Los enzimas est´an protegidos contra la acci´ on del jugo g´ astrico a´cido mediante la llamada t´ecnica de recubrimiento ent´erico (Chambliss 1983) combinada con microencapsulaci´ on (Madan 1978). Estas t´ecnicas producen part´ıculas con un di´ ametro de 1,0-2,5 mm. Cuando tales gr´ anulos se administran oralmente, su tiempo de retenci´ on g´ astrica es del mismo orden que el de la ampicilina administrada de acuerdo con el presente ejemplo, y as´ı el enzima y la ampicilina pueden administrarse al mismo tiempo. R ) para tapizar los gr´ anulos proteicos que constiCuando se utiliza acetato de polivinilo (Colorcon tuyen una forma de realizaci´ on de la invenci´ on, dicho recubrimiento se disuelve r´ apidamente (en 5-15 minutos) cuando el pH ambiente excede de 4,7. Debido a que tal pH es t´ıpico del intestino, desde el duodeno muy proximal hacia adelante, el ingrediente activo BC I o PMAA se libera en este sector deseado del intestino y se mezcla con la ampicilina que penetra simult´ aneamente con ´el a trav´es del p´ıloro.

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Debido a que dichos enzimas est´an, despu´es de su penetraci´ on en el duodeno, en la esfera de influencia de los enzimas proteol´ıticos enzim´ aticos, es razonable protegerlos con una prote´ına que inhiba a la tripsina, pues la inactivaci´ on de la tripsina previene tambi´en la activaci´on de otros enzimas proteol´ıticos secretados por el p´ancreas. 20

En una situaci´on tal como en el presente ejemplo, con las preparaciones ingiri´endose en un est´omago vac´ıo, el tracto digestivo est´ a en un estado de ayuno, en el cual la secreci´on de los enzimas digestivos, por ejemplo, tripsina, representa s´ olo una fracci´ on (unos pocos miligramos por hora) de la que tiene lugar durante una comida completa (100-200 mg/h). 25

De las muchas prote´ınas apropiadas que inhiben a la tripsina, por ejemplo, el inhibidor de la tripsina de soja (tipo II-S, Sigma) puede utilizarse. Poni´endose en contacto con la tripsina, cada miligramo de esta prote´ına inactiva r´ apidamente 1,5-2,5 mg de tripsina. 30

Si los gr´ anulos ent´ericos revestidos que se han descrito anteriormente, administrados como una dosis u ´ nica seg´ un el ejemplo, comprenden 100 mg del inhibidor de la tripsina de soja, la cantidad de esta prote´ına liberada en el duodeno es suficiente para inactivar muchas veces a la tripsina presente en este sector intestinal.

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Si los gr´ anulos ent´ericos revestidos que se han descrito anteriormente, administrados como una dosis u ´ nica seg´ un el ejemplo, comprenden 10 mg (10.000 U) de PMAA, la cantidad de dicho enzima, el cual lleva al duodeno simult´ aneamente con la ampicilina y es capaz de fragmentar a ´esta a 6-APA, es suficiente para obtener 100 g de ampicilina inactiva microbiol´ ogicamente en un per´ıodo de tiempo de 30 minutos despu´es de su liberaci´on.

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Correspondientemente, si los gr´ anulos ent´ericos revestidos anteriormente descritos comprenden 5 mg de BC I en una dosis u ´nica, la cantidad de dicho enzima que llega al duodeno simult´ aneamente con la ampicilina y es capaz de fragmentar la ampicilina a a´cido peniciloico, es probablemente suficiente para obtener 100 g de ampicilina inactiva microbiol´ ogicamente en un per´ıodo de tiempo de 30 minutos despu´es de su liberaci´ on. A continuaci´ on se ofrecen ejemplos de las dosis y composiciones de las preparaciones farmac´euticas que constituyen formas de realizaci´ on de la presente invenci´ on.

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a) 500 mg de gr´ anulos (aprox 0,8 ml) contienen: -

Prote´ına enzim´ atica BCI Inhibidor de la tripsina de soja Sacarosa Condimentos y coloraciones Acetato de polivinilo (recubrimiento ent´erico)

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5 100 200 5 190

mg mg mg mg mg

ES 2 129 078 T3 b) 500 mg de gr´ anulos contienen: -

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PMAA Inhibidor de tripsina de soja Sacarosa Condimentos y coloraciones Acetato de polivinilo (recubrimiento ent´erico)

10 100 195 5 190

mg mg mg mg mg

Una dosis que corresponde al ejemplo a o b puede introducirse en una c´ apsula de gelatina, la cual se disuelve instant´aneamente en el est´omago, o puede administrarse como tal, por ejemplo, a partir de una bolsita monodosis, simult´aneamente con ampicilina. Ejemplo 2 En los casos en los que la parte de una dosis de β-LAB oral convencional que ser´ıa normalmente absorbida a partir del intestino a la circulaci´ on sist´emica no se desea que se fragmente, la partici´on enzim´atica puede todav´ıa llevarse a cabo en la parte no absorbida de la dosis. Esta aplicaci´ on de la invenci´ on es u ´ til en la mayor´ıa de a´reas de la terapia β-LAB oral convencional: infecciones bacterianas habituales de los o´ıdos, senos paranasales, faringe, bronquios, pulmones, tracto urinario, dermis, etc, cuando se tratan con los compuestos 2-6, 9, 10, 13-18 o 23-29. Como la acci´on microbiol´ogica de las β-LABs orales anteriores puede eliminarse con ´exito mediante una aplicaci´ on de la presente invenci´ on 3-6 horas despu´es de la administraci´on, la partici´ on de β-LAB puede llevarse a cabo lentamente, en una a tres horas, dejando que se utilicen dosis muy econ´omicas de β-lactamasa o de amidasas. En esta aplicaci´on, los gr´ anulos que contienen los enzimas activos est´an revestidos con pol´ımero a´cido metacr´ılico (Eudragit SR). Este u ´ltimo se disuelve cuando el pH ambiental excede de 7,0, y de este modo el enzima que constituye el ingrediente activo no se libera hasta que los gr´anulos alcanzan el intestino delgado distal. Esta aplicaci´ on puede combinarse, por ejemplo, con la terapia de amoxicilina para la erradicaci´on de H.pylori, un tratamiento que se ha mostrado hasta la fecha m´ as o menos ineficaz debido a los efectos secundarios microbiol´ogicos que limitan seriamente la dosificaci´on y la duraci´ on del tratamiento. A continuaci´ on se ofrecen ejemplos de las dosis y composiciones de las preparaciones farmac´euticas que forman formas de realizaci´on de la presente invenci´ on: c) 500 mg de gr´anulos contienen:

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-

Prote´ına enzim´ atica BCI Inhibidor de la tripsina de soja Sacarosa Condimentos y coloraciones Pol´ımero a´cido metacr´ılico (recubrimiento ent´erico)

5 150 150 5 190

mg mg mg mg mg

Se toman 100 mg de los gr´ anulos, por ejemplo, junto con una dosis convencional de amoxicilina, ampicilina, penicilina V, etc 50

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d) 500 mg de gr´ anulos contienen: -

PMAA Inhibidor de la tripsina de soja Sacarosa Condimentos y coloraciones Pol´ımero a´cido metacr´ılico (recubrimiento ent´erico)

10 150 145 5 190

mg mg mg mg mg

Se toman 100 mg de los gr´ anulos, por ejemplo, junto con una dosis convencional de ampicilina, penicilina V o cefaloglicina.

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ES 2 129 078 T3 Ejemplo 3

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Las aplicaciones de la invenci´on pueden utilizarse tambi´en para obtener β-LABs no absorbibles, esto es, penicilinas, cefalosporinas, carbapenemos y monobactemos administrados parenteralmente inactivos microbiol´ogicamente. El ´area de aplicaci´on cubre todas las terapias β-LAB en las cuales el antibi´otico administrado parenteralmente se difunde a trav´es de la pared intestinal o se excreta en la bilis, formando un fondo com´ un intestinal del antibi´ otico que causa efectos secundarios microbiol´ogicos, as´ı como el tratamiento t´ opico del tracto digestivo superior en el cual se administra oralmente un β-LAB principalmente parenteral.

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La cefalotina (VIII) y el imipenem, es decir, la N-formidoil tienamicina, (IX), sirve como ejemplo de esta ´area de aplicaci´on de la invenci´ on

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Se sabe que s´olo 1-3 % de una dosis oral de dichos β-LABs parenterales se absorbe. H.pylori es sensible a imipenem y cefalotina in vitro (MIC90=0,2 µg/ml), lo que hace al imipenem y a la cefalotina bien adaptados para la erradicaci´ on de H.pylori mediante administraci´on oral seg´ un la presente invenci´ on. La cefalotina puede fragmentarse a 7-ACA por ejemplo con amidasa (Cole 1969).De igual modo, la cefalotina puede fragmentarse al correspondiente a´cido cefalosporanoico con BCI, pero a´ un una actividad mayor con este antibi´otico se exhibe por la comercialmente disponible cefalosporinasa producida por la cepa 214 de Enterobacter cloacae. La actividad espec´ıfica de la u ´ ltima β-lactamasa con la cefalotina es de 50 U/mg en condiciones que corresponden a las secciones m´as bajas del tracto gastrointestinal. El imipenem puede fragmentarse al compuesto correspondiente con un anillo β-lact´amico abierto mediante la dehidropeptidasa I (DHP I) enzima aislado de las c´elulas de mam´ıfero. La DHP I renal porcina, por ejemplo, posee una actividad espec´ıfica de 90 U/mg con imipenem como sustrato (Kropp et al 1982) Seg´ un la invenci´ on, el imipenem y la cefalotina se utilizan mejor como dosis u ´nicas de 250-1000 mg para la erradicaci´ on de H-pylori mediante tratamiento local dirigido a las mucosas duodenal y g´ astrica. Como la acci´on antimicrobiana de estos dos antibi´oticos administrados oralmente no alcanza a la flora bacteriana normal del intestino hasta 3-6 horas despu´es de la administraci´on, cuando el antibi´ otico penetra en el ´area principal de distribuci´ on de la flora intestinal normal, este periodo completo est´ a disponible para la inactivaci´on enzim´atica del imipenem o de la cefalotina.

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ES 2 129 078 T3 Este periodo de tiempo puede aprovecharse mejor incorporando en la misma dosis con la preparaci´ on antibi´ otica, gr´anulos ent´ericos revestidos que liberan un enzima que inactiva al imipenem o a la cefalotina a varios pHs en el intestino. 5

Esto puede hacerse mediante la utilizaci´on simult´ anea de gr´ anulos revestidos con acetato de polivinilo (ejemplos a y b), pol´ımero a´cido metacr´ılico (ejemplos c y d) o ftalato acetato de celulosa (CAP, Eastman Kodak), que libera el ingrediente activo en distintas partes del intestino; en el duodeno (cuando el pH excede de 5,5), en el duodeno y en el intestino delgado (cuando el pH excede de 6,0) y en el intestino delgado distal (cuando el pH excede de 7,0).

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Una dosis u ´ nica de gr´ anulos ent´ericos revestidos realizados en la forma que se ha descrito anteriormente, que contienen como ingrediente activo 10 mg (500 U con cefalotina como sustrato) de β-lactamasa derivada de Enterobacter cloacae, es suficiente para fragmentar una dosis de 500 mg de cefalotina en el interior del intestino delgado antes del comienzo del intestino grueso, incluso en el caso de que s´ olo fuera activa una cent´esima parte de la prote´ına enzim´ atica.

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Correspondientemente, una dosis u ´nica de gr´ anulos ent´ericos revestidos que contienen 10 mg (es decir 900 U con imipenem como sustrato) de DHP I es suficiente para fragmentar aproximadamente un gramo de imipenem en el interior del intestino delgado, incluso en el caso de que s´ olo una cent´esima parte de la prote´ına enzim´ atica fuera activa. Los ejemplos siguientes describen la degradaci´ on de un antibi´ otico β-lact´amico a una forma inactiva en el intestino in vivo.

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Ejemplo 4 Utilizaci´on de β-lactamasa para fragmentar un antibi´ otico β-lact´amico en el intestino de la rata in vivo:

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Se investig´ o la degradaci´ on inducida por la β-lactamasa, de la ampicilina, que es un antibi´otico β-lact´ amico, en el intestino de la rata in vivo. Se inyect´ o la ampicilina en el duodeno, seguido de inyecci´on de β-lactamasa y del inhibidor de la tripsina, o veh´ıculo plano. Despu´es de 20 minutos el contenido del intestino delgado se absorbi´ o en un disco de papel. El disco se transfiri´ o entonces a agar que conten´ıa un cultivo de Staphylococcus aureus sensible a la ampicilina con objeto de encontrar si el intestino delgado conten´ıa todav´ıa ampicilina activa.

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Los animales del ensayo eran ratas machos Sprague-Dawley (Alab, Suecia) que pesaban 432-471 g. Los animales se mantuvieron en grupos de cinco en jaulas con acceso libre al agua y a trocitos de comida. Se aplic´o un ciclo est´andar de 12.12 horas de luz-oscuridad (las luces encendidas desde las 6 h am. a las 6 h pm). Las ratas se mantuvieron en ayuno durante 24 horas antes del experimento.

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Se anestesiaron los animales con hidrato de cloral (3,6 g/100 ml) a una dosis intraperitoneal de 0,85 ml/100 g. Se cort´o el peritoneo por la linea media, exponiendo el est´ omago y los intestinos. El p´ıloro y el duodeno (a 40 mm del p´ıloro) se ligaron. Se inyect´o ampicilina s´ odica (A-PEN, Orion Corporation, 10 mg en 0,10 ml de agua est´eril titulada a pH 5,5) en el duodeno en un punto a 5 mm del p´ıloro. Cinco minutos despu´es, se inyectaron bien 500 µg de β-lactamasa (tipo I:Bacillus cereus, Sigma) y 500 µg de inhibidor de tripsina (tipo II-S, soja, Sigma) en 0,10 ml de agua est´eril titulada a pH 5,5 o se inyect´ o 0,10 ml de agua en el duodeno en id´entico sitio. El peritoneo expuesto y el intestino se irrigaron con un tap´on humedecido con soluci´on fisiol´ ogica salina para evitar el desecamiento. veinte mminutos despu´es, se tom´ı con una agua para inyecciones una muestra de 150 µl del contenido duodenal, en un punto a 10 mm del ligado duodenal. Se inyect´ o la muestra en un tubo de ensayo que conten´ıa 2 ml de agua, y el on tubo se situ´ o inmediatamente en un ba˜ no de agua a 100◦C durante 5 minutos para detener la reacci´ enzim´atica. Despu´es de que el tubo se hubiera enfriado a temperatura ambiente, se a˜ nadieron 2 ml de agua agit´ andose el tubo utilizando un mezclador Vortex. Se absorbi´ o una muestra de 150 µl en un disco de papel (di´ ametro 12,7 mm) el cual se dispuso entonces en una placa de agar (fondo: Medio I Difco 6 ml; superficie: Medio I Difco 4 ml), cuya superficie se revisti´ o con Staphylococcus aureus sensible a la ampicilina (ATCC 6538p; una suspensi´ on concentrada se diluy´ o 1:10, y 8 ml de la diluci´on se utilizaron en 100 ml de agar). Cada placa de agar recibi´ o tambi´en un disco est´ andar que conten´ıa ampicilina dilu´ıda hasta la misma concentraci´ on que en la soluci´on del ensayo. Las placas se incubaron a 37◦ C durante 18 horas, y se midieron las zonas de inhibici´on alrededor de los discos. La Tabla 1 presenta los resultados para cada placa de agar. El efecto de la β-lactamasa es evidente. 16

ES 2 129 078 T3 Los discos est´andar y los discos que conten´ıan muestras de las ratas que hab´ıan recibido s´ olo la ampicilina mostraron distinta inhibici´ on del crecimiento bacteriano, mientras que los discos con las muestras de las ratas que hab´ıan recibido la β-lactamasa e inhibidor de la tripsina adem´ as de la ampicilina, no inhibieron el crecimiento bacteriano. 5

Los resultados indican que el β-LAB no absorbido puede inactivarse con β-lactamasa en un entorno intestinal in vivo. TABLA 1 10

Di´ ametros de zonas de inhibici´ on alrededor de los discos de papel A= ampicilina; B=β-lactamasa + inhibidor de tripsina

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Rata

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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

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Di´ametro de zona de Inhibici´on (mm)

Muestra

A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A A+ A

B B B B B B B B B B

Ensayo

Est´ andar

34 34 34 33 33 31 30 28 29 27

40 40 40 40 41 41 39 39 42 42 36 36 35 35 34 34 33 33 33 33

Ejemplo 5 Utilizaci´on de la amidasa para fragmentar un antibi´ otico β-lact´amico en el intestino de la rata in vivo

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De forma an´ aloga que en el Ejemplo 4, se inyectaron 10 mg de ampicilina s´odica en 0,10 ml de agua est´eril titulada a pH 5,5 en el duodeno de la rata. Adem´ as, 5 minutos despu´es se inyectaron 100 U de amidasa (ampicilina acilasa: Department of Biotechnology, Research & Development Center, KOSCO, Seoul, South Korea) derivada de la cepa IFO 12020 de Pseudomonas melanogenum y 500 µg del inhibidor de la tripsina (tipo II.S, soja, Sigma) en el duodeno en el mismo sitio. Las ratas de control solo recibieron una soluci´ on de 10 mg de ampicilina en 0,10 ml de agua est´eril (pH 5,5) seguido 5 minutos despu´es por un volumen id´entico de agua est´eril. El experimento se continu´ o entonces siguiendo el procedimiento en el Ejemplo 4, con una incubaci´ on final de los discos en la placa de agar durante 18 horas. Los resultados indican que el antibi´ otico β-lact´amico no absorbido puede fragmentarse mediante la amidasa en el intestino in vivo.

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ES 2 129 078 T3 Referencias que se citan Documentos de patente: 5

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EP 0 384 559 EP 0 420 600 A2 FI 59265 FI 880017 GB 1241 844 US 2.890.986 US 2.941.995 US 2.982.696 US 3.070.511 US 3.150.059 US 3.239.394 US 3.488.729 US 3.499.909 WO 88/7865 Otras publicaciones: Chambliss WG (1983) Pharm Technol 7, 124.

25

Cole M (1969) Biochem J 115, 733. Davies R. Abraham E (1974) Biochem J 143, 115. Hirschi A et al. (1987) Wien Klin Wsch 14, 493.

30

Huber et al. (1972) In: Flynn E. ed. Cephalosporins and Penicillins. New York: Academic Press, 27. Hyman AL (1959) JAMA 169, 593. Isarhard R et al. (1990) Hepato-Gastroenterol 37, 38.

35

Kim DJ, Buyn SI (1990) Biochim Biophys Acta 1040, 12. Korzybski T, Kurylowicz W (1961) In: Antibiotica, Jena: Veb G Fisher Verlag, 778.

40

Kropp H et al. (1982) Antimicrob Agents Chemother 22, 62. Lambert et al. (1986) Antimicrob Agents Chemother 30, 510. Madan PL (1978) Pharm Technol 2, 68.

45

Mandell GL. Sande MA (1990) in: Goodman and Gilman’s, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Edition New York: Pergamon Press, 1065. Rauws EA et al. (1988) Gastroenterol 94, 33. Rauws EA, Tytgat GNJ (1990) Lancet 335, 1233.

50

Sande et al. (1990) In: Goodman and Gilman’s, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Edition New York: Pergamon Press, 1018. 55

Sawa K et al. (1985) Chemotherapy (Tokyo) 33, Suppl. 6, 169 Therapeutic Drugs (1991), Dollery C. ed. Edinburgh: Churchill Livingstone, C 129.

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ES 2 129 078 T3 REIVINDICACIONES 1. Preparaci´ on farmac´eutica oral con un patr´ on de liberaci´ on programada, caracterizada porque comprende un compuesto que degrada un antibi´ otico β-lact´amico. 5

2. Preparaci´ on seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizada porque el compuesto que degrada el antibi´ otico β-lact´amico es o bien una β-lactamasa, es decir un enzima que hidroliza el enlace am´ıdico c´ıclico del anillo β-lact´amico, o una amidasa, es decir, un enzima que hidroliza la cadena lateral unida al anillo β-lact´amico con un enlace amida lineal, o un fragmento activo de los mismos.

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3. Preparaci´ on seg´ un las reivindicaciones 1 o´ 2, caracterizada porque comprende adicionalmente una cantidad efectiva de un antibi´ otico β-lact´amico.

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4. Preparaci´on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque comprende adicionalmente un compuesto o compuestos que inhiben la tripsina, pepsina o cualquier correspondiente sustancia digestiva, para proteger al compuesto que degrada el antibi´ otico β-lact´amico de la acci´on digestiva de la tripsina o de la sustancia equivalente en el tracto digestivo. 5. Preparaci´ on seg´ un la reivindicaci´ on 4, caracterizada porque el compuesto que inhibe a la tripsina, es una α1 antitripsina, PSTI, aprotinina, tripstatina, α2-macroglobulina, inhibidor de la tripsina de soja, o inhibidor de la tripsina blanca de huevo, o equivalente. 6. Preparaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el compuesto que degrada el antibi´ otico β-lact´amico ha sido tratado de forma que la preparaci´ on atraviese el est´omago sin liberar el compuesto, pero lo libera en cambio en una zona o zonas deseada(s) del intestino. 7. Preparaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el antibi´ otico es ampicilina o cefalotina o imipenem.

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8. Utilizaci´on de un compuesto, o de un fragmento activo del mismo, capaz de fragmentar antibi´ oticos que contienen un anillo β-lact´amico en formas inactivas o poco activas, para la fabricaci´ on de una preparaci´ on farmac´eutica oral que limite el efecto de los antibi´oticos β-lact´amicos a ciertos sectores del tracto digestivo y /o para reducir los efectos adversos de dichos antibi´oticos. 9. Utilizaci´on seg´ un la reivindicaci´ on 8, caracterizada porque el compuesto que degrada el antibi´ otico β-lact´amico es un enzima o un fragmento activo de uno de ellos. 10. Utilizaci´ on seg´ un la reivindicaci´ on 9, caracterizada porque el enzima es o bien una β-lactamasa, es decir un enzima que hidroliza el enlace am´ıdico c´ıclico del anillo β-lact´amico, o una amidasa, es decir un enzima que hidroliza la cadena lateral unida al anillo β-lact´amico con un enlace am´ıdico lineal, o un fragmento activo de los mismos. 11. Utilizaci´on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizada porque los efectos adversos de un antibi´ otico se reducen mediante la fragmentaci´on del antibi´ otico superfluo cuando pasa al duodeno al intestino delgado o al intestino grueso. 12. Utilizaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, caracterizada porque adicionalmente se utiliza un compuesto o compuestos que inhiben la tripsina, la pepsina o cualquier sustancia digestiva correspondiente para proteger el compuesto que degrada el antibi´otico β-lact´amico en el tracto digestivo.

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13. Utilizaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 para la fabricaci´ on de una preparaci´ on de un compuesto que degrada un antibi´ otico β-lact´amico para la administraci´ on, al mismo tiempo o sucesivamente en un orden apropiado y deseado, junto a, o separadamente, una preparaci´ on de un antibi´otico β-lact´amico y posiblemente una preparaci´ on que inhibe la tripsina o compuestos correspondientes.

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14. Utilizaci´on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, caracterizada porque el compuesto que degrada al antibi´ otico β-lact´amico se encuentra en una preparaci´ on con un patr´ on de liberaci´ on programada.

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15. Utilizaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14 para la fabricaci´on de una composici´ on u ´ til en el tratamiento de un sector deseado del tracto digestivo con un antibi´ otico β-lact´amico y/o para dirigir la absorci´on del antibi´otico β-lact´amico a cierto sector del tracto digestivo y/o para reducir los efectos adversos de la terapia antibi´ otica, de la cual composici´ on, cuando se administra, se libera una 19

ES 2 129 078 T3 cantidad efectiva de un compuesto que degrada un antibi´ otico β-lact´amico en un sector o sectores deseado(s) del tracto digestivo, por el cual una cantidad efectiva de un antibi´ otico β-lact´amico, cuando entra en contacto con dicho compuesto degradante del antibi´ otico β-lact´amico en el tracto digestivo, se fragmenta en un producto inactivo o con escasa actividad. 5

16. Utilizaci´on seg´ un la reivindicaci´ on 15, caracterizada porque el compuesto que degrada el antibi´ otico β-lact´amico es o bien una β-lactamasa, es decir un enzima que hidroliza el enlace am´ıdico c´ıclico del anillo β-lact´amico, o una amidasa, es decir un enzima que hidroliza la cadena lateral unida al anillo β-lact´amico con un enlace am´ıdico lineal, o un fragmento activo de los mismos. 10

17. Utilizaci´on seg´ un la reivindicaci´ on 15 o´ 16, caracterizada porque el antibi´ otico β-lact´amico es u ´ til para tratar infecciones bacterianas g´ astricas.

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18. Utilizaci´ on seg´ un cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizada porque el antibi´ otico β-lact´amico es u ´ til para el tratamiento de las infecciones g´ astricas por Helicobacter pylori.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales. Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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