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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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k 2 133 401 kInt. Cl. : A61K 31/195

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 93914126.3 kFecha de presentaci´on : 25.05.93 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 669 824 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 06.09.95

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54 T´ıtulo: Utilizaci´ on de f´ armacos cardiot´ onicos e inhibidores de s´ıntesis del ´ oxido n´ıtrico para mitigar

la hipotensi´ on patol´ ogica.

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73 Titular/es: BOARD OF REGENTS, THE

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72 Inventor/es: Kilbourn, Robert G.;

30 Prioridad: 29.05.92 US 890430

UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM Office of General Council, 201 West 7th Street Austin, Texas 78701, US CORNELL RESEARCH FOUNDATION, INC.

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

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45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

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16.09.99

Aviso:

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Gross, Steven S. y Griffith, Owen W.

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74 Agente: Urizar Anasagasti, Jos´ e Antonio

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION Utilizaci´on de f´ armacos cardiot´ onicos e inhibidores de s´ıntesis del ´oxido n´ıtrico para mitigar la hipotensi´ on patol´ ogica. Antecedentes de la invenci´ on La presente invenci´on se refiere al empleo de un compuesto farmac´eutico para aliviar la hipotensi´ on producida por la producci´ on de o´xido de nitr´ ogeno. En 1980, Furchgott y Zawadski (Nature 288:373-376, 1980) demostraron que puede estimularse a las c´elulas endoteliales que revisten los vasos sangu´ıneos para generar una sustancia que relaja al m´ usculo liso vascular; es decir, que produce vasodilataci´on. Como quiera que la naturaleza qu´ımica de esta sustancia era completamente desconocida, se le denomin´ o simplemente factor relajante derivado del endotelio (EDRF).Hoy d´ıa, se acepta ampliamente que muchas sustancias naturales que act´ uan como vasodilatadores fisiol´ ogicos intervienen en la totalidad o en parte de su acci´on al estimular la formaci´on de EDRF. Entre estas sustancias figuran acetilcolina, histamina, bradiquinina, leucotrienos, ADP, ATF, sustancia P, serotonina, trombina y otras. Aunque la vida activa extraordinariamente corta del EDFR (varios segundos) obstaculiza los esfuerzos que hay que realizar para identificar qu´ımicamente esta mol´ecula, en 1987 varios laboratorios apuntaron que el EDRF podr´ıa ser el ´oxido n´ıtrico (NO-), que se descompone espont´ aneamente en nitrato y en nitrito. Un problema fundamental para aceptar esta hip´ otesis del NO- era el de que no se conoc´ıan sistemas en los mam´ıferos que contuvieran una v´ıa enzim´atica que pudiera sintetizar NO- y, adem´ as, se desconoc´ıa un probable precursor de la s´ıntesis del NO-. Despu´es de observar que la metil-L-arginina NG (L-NMA) podr´ıa inhibir la s´ıntesis EDRF/NO vascular inducida por acetilcolina e histamina y que la s´ıntesis EDRF/NO podr´ıa restablecerse mediante la adici´on de un exceso de L-arginina, se propuso que la arginina era el precursor fisiol´ ogico de la bios´ıntesis EDRF/NO (Sakuma y col.,PNAS 85:86648667, 1988) y, casi simult´ aneamente, se inform´ o de la existencia adicional de esta propuesta. Posteriormente, se demostr´o que la inhibici´ on de la s´ıntesis de EDRF/NO en cobayas anestesiados elevaba la tensi´on sangu´ınea, lo que suger´ıa que EDRF/NO- era un importante regulador fisiol´ ogico de la tensi´on sangu´ınea (Aisaka y col., BBRC 160:881-886, 1989). A pesar de las muestras acumuladas en apoyo de la s´ıntesis del NO-, los expertos en la materia consideran que pueden estar presentes otros ´oxidos de nitr´ ogeno y que pueden resultar activos para reducir la tensi´ on sangu´ınea. Dentro de esta especificaci´ on, se considera que el acr´onimo NO- representa al o´xido n´ıtrico y a los dem´as ´oxidos de nitr´ ogeno vasoactivos adicionales. Tambi´en se demostr´o que las c´elulas macr´ofagas “se activan” con un tratamiento durante 12-36 horas con interferon gamma, endotoxina bacteriana y diversas citoquinas. Esta “activaci´ on” va asociada a la iniciaci´ on de la destrucci´ on de c´elulas tumorales y a la generaci´ on de nitrito y de nitrato a partir de L-arginina. 2

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Igualmente, se observ´o que los macr´ofagos activados producen NO- a partir de la L-arginina (lo mismo que las c´elulas endoteliales) y que este NO- reacciona despu´es con ox´ıgeno para formar m´as metabolitos de nitr´ ogeno oxidado que parecen ser fisiol´ogicamente inertes (Stuehr y col., J. Exp.Med. 169:1011-1020, 1989). La enzima responsable de la s´ıntesis del NO-(s´ıntesis del´oxido n´ıtrico) ha sido caracterizada parcialmente por algunos de los actuales inventores (Stuehr y col. BBRC 161:420-426, 1989) y act´ ua oxidando al grupo amino terminal de la arginina, lo que conduce a la producci´ on de NO- y citrulina. En la actualidad, se cree que el NO- derivado de la macrofagia es un importante agente tumoricida y bactericida. Como quiera que la endotoxina bacteriana, el interfer´ on-gamma y otras citoquinas pueden desencadenar la generaci´ on de NO- por c´elulas macr´ofagas, se deduce de esto que: 1) la generaci´on de NO- por c´elulas endoteliales, puede estimularse con est´ımulos similares y 2) elchoque s´eptico (es decir, la vasodilataci´on sist´emica inducida por endotoxina bacteriana) puede ser el resultado de la activaci´ on masiva de bios´ıntesis de NO-. La especulaci´on de que esta u ´ ltima hip´ otesis era correcta se reforz´o por un informe anterior de que los niveles de nitrato urinario se elevan considerablemente cuando se trata a ratas con endotoxina bacteriana (Wagner y col.,PNAS 80:45184521, 1983). Como se sabe perfectamente, las citoquinas ocasionan alteraciones morfol´ogicas y funcionales en las c´elulas endoteliales a las que se denomina “activaci´on celular endotelial”. Unos mediadores inmunes concretos tales como el factor de necrosis tumoral (TNF), la interleuquina-l (IL1) y el interfer´ on-gamma (IFN o I) parecen inducir unas formas diferentes, pero parcialmente superpuestas de activaci´on celular endotelial que incluyen un incremento de la actividad procoagulante (Bevilaqui y col., PNAS 83:4533-4537, 1986), la producci´ on de PGI2 (Rossi, Science 229, 174, 1985), la expresi´on de ant´ıgeno HLA (Pober y col., J.Immunol.138:3319-3324, 1987) y mol´eculas por adherencia de linfocitos (Cavender y col., J.Immunol. 138:2149-2154, 1987). Aun cuando se ha dicho que estas citoquinas ocasionan hipotensi´ on, hemorragia vascular e isquemia, los mecanismos subyacentes de vasoactividad alterada no est´an claros (Goldblum y col., Infect. Immun. 57: 1218-1226, 1989; Tracey y col., Science 234:470, 1986). Un mediador potencial de la vasoactividad alterada en el EDRF. En los estudios cl´ınicos y sobre animales (Dvorak y col.,, J. Nat’l. Canc.Inst. 81:497-502, 1959) efectuados sobre los efectos de los modificadores de la respuesta biol´ ogica, una toxicidad limitadora de las dosis han sido la hipotensi´ on y las p´erdidas vasculares. La dobutamina como f´ armaco cardiot´ onico se ha utilizado, adem´as del tratamiento normal, para tratar a los pacientes de choque s´eptico y los resultados obtenidos demuestran que la dobutamina no aumenta significativamente la tensi´on arterial media; pero s´ı aumenta el suministro y el consumo de ox´ıgeno (Vincent y col. 1990, Critical Care Medicine 18: 689-693). Kilbourn y col. describen una disminuci´ on de

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la tensi´on sangu´ınea y de la producci´ on card´ıaca en perros tratados con endotoxina o IL.l (BBRC 178:823-829, 1991; JNCI 1992, en prensa). La administraci´ on de NG-metil-L-arginina (NMA) restablece parcialmente la tensi´on sangu´ınea; pero disminuye tambi´en la capacidad card´ıaca. Este resultado ha sido confirmado recientemente por Klabunde y col. (Klabunda BBRC 178:11351140, 1991). Otros estudios demuestran que la NMA reduce la capacidad card´ıaca en animales normales (no tratados con endotoxina), efecto que se incrementa con dosis mayores de NMA (Kilbourn y col. BBRC 178:823-829, 1991; Klabunde y col. Eur.J.Pharm-199:51-59, 1991). La patente US 5 028 627 describe el tratamiento del choque s´eptico con arginina NG-sustitu´ıda o con arginina NG,NG- disustitu´ıda. Resumen de la invenci´ on La presente invenci´on suministra una composici´on farmac´eutica que comprende dobutamina y arginina L-NG sustitu´ıda o L-arginina NG, NG-disustitu´ıda para el tratamiento del choque s´eptico y el empleo combinado de dobutamina y de L-arginina NG-sustitu´ıda o de L-arginina NG, NG-disustituda para la preparaci´ on de un medicamento a utilizar para el tratamiento del choque s´eptico. Aun cuando, preferentemente, la administraci´on del compuesto farmac´eutico o de los medicamentos es intravascular, otras v´ıas de administraci´on parenteral tales como la inyecci´on intraperitoneal, intramuscular o subd´ermica, pueden resultar u ´ tiles. Adem´as, en ciertas condiciones cl´ınicas, la administraci´ on enteral o t´ opica de productos an´ alogos a la arginina, tambi´en puede resultar beneficiosa. La composici´on farmac´eutica o el medicamento que contenga arginina de NG-sustitu´ıda o arginina NG, NG-disustitu´ıda, puede administrarse a un animal que posiblemente desarrolle o experimente hipotensi´ on sist´emica inducida por NO-. Los an´ alogos a la arginina de la presente invenci´on son, preferentemente, de la configuraci´ on L e incluyen sales adicionales farmac´euticamente aceptables acordes con los tratamientos previstos. El empleo especial de la composici´on farmac´eutica o del medicamento de la presente invenci´on est´a indicado para la profilaxis o el tratamiento de la hipotensi´ on sist´emica inducida en un paciente por tratamiento quimioter´apico con factor de necrosis tumoral, interleuquina-2 o ambos. En este aspecto, la invenci´ on incluye la utilizaci´on de arginina NG-sustitu´ıda o de arginina NG, NG-disustitu´ıda. Un aspecto importante de la presente invenci´on es la composici´on farmac´eutica o medicamentosa de la misma para el tratamiento de un animal que padece hipotensi´ on sist´emica debida a endotoxina; es decir, el choque s´eptico. Aun cuando la profilaxis resulta aqu´ı menos pr´ actica, el tratamiento es esencial y comprende la administraci´on intravascular a dicho animal hipotenso de una cantidad terap´euticamente efectiva de dobutamina y NG-metil-L-arginina, NG-amino-Larginina o NG-nitro-L-arginina y similares. El choque s´eptico es un estado que supone una amenaza vital y que se debe a la exposici´on a endotoxina bacteriana, manifest´ andose en colapso

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cardiovascular puesto de manifiesto con la liberaci´on de citoquinas tales como el factor de necrosis tumoral. Algunas de estas citoquinas pueden dar lugar a la liberaci´ on de sustancias vasoactivas. En el presente estudio, la administraci´ on de endotoxina bacteriana a perros produce una disminuci´ on de la resistencia vascular perif´erica y una ca´ıda de la tensi´ on de la sangre arterial. La resistencia vascular y la tensi´on arterial sist´emica se normalizan despu´es de administrar un f´ armaco cardiot´ onico como la dobutamina y NG-metil-Larginina, un inhibidor potente y selectivo de la s´ıntesis del ´oxido n´ıtrico. Estos hallazgos indican que la superproducci´ on de o´xido n´ıtrico contribuye de forma importante al choque endot´ oxico; pero, adem´ as, ponen tambi´en de manifiesto, por primera vez, la utilidad de la dobutamina en combinaci´ on con inhibidores de la s´ıntesis del ´oxido n´ıtrico en el tratamiento del choque endot´ oxico. Los an´alogos a la arginina NG-sustitu´ıda de la configuraci´ on L para las aplicaciones que se describen aqu´ı, incluyen NG-amino-L-arginina, NGnitro-L-arginina, NG-etil-L-arginina, NG-propilL-arginina o NG-butil-L-arginina y otros similares; pero igualmente pueden utilizarse otros an´ alogos a la arginina de este tipo o de otros tipos afines que inhiban la s´ıntesis del NO-. Unas cantidades terap´euticamente efectivas de los an´alogos a la arginina sustitu´ıdos o disustitu´ıdos, inhiben la producci´ on en el animal o en el paciente de ´oxido n´ıtrico a partir de la arginina, evitando sus efectos hipotensos. El tratamiento con inhibidor de producci´ on de NO- de un paciente hipotenso va acompa˜ nado de cantidades terap´euticamente eficaces del f´armaco inotr´ opico dobutamina. La dobutamina, medicamento cardiot´onico, es normalmente una mezcla rac´emica que ejerce poco efecto sobre la resistencia vascular perif´erica. La vasoconstricci´on inherente al receptor alfa-1 del is´ omero dobutamina (-) se contrarresta aparentemente por la actividad antagonista del receptor alfa-1 del is´ omero dobutamina (+).Ambos is´ omeros son agonistas receptores beta, resultando m´as eficaz el is´omero (+) como consecuencia de los efectos inotr´opicos y cronotr´ opicos. La s´ıntesis del ´oxido n´ıtrico productor de la hipotensi´ on puede estar inducida directa o indirectamente, por lo menos, por uno de los IFN, TNF, IL-1, IL-2 y endotoxina. En una de las realizaciones, estos an´alogos disponen, preferentemente, de sustituyentes alquilo elegidos del grupo formado por metilo, etilo, propilo y butilo. Los an´ alogos pueden incluir sustituyentes alquilo derivados elegidos del grupo formado por hidroxialquilo, carboxialquilo y aminoalquilo. Los an´alogos a la arginina utilizables en la pr´ actica de la presente invenci´on incluyen tambi´en arginina con, por lo menos, un sustituyente NG escogido del grupo formado por alquilo, hidroxialquilo y alquenilo. La cantidad terap´euticamente eficaz de an´ alogos a la arginina de la presente invenci´ on es una cantidad suficiente para impedir la producci´ on de ´oxido n´ıtrico a partir de la arginina, de forma que, en combinaci´on con la dobutamina, se evite una hipotensi´ on indeseable que invierta y reduzca la capacidad card´ıaca. El o´xido n´ıtrico se degrada r´ apidamente en iones de nitrito y de nitrato en 3

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presencia de ox´ıgeno y, como quiera que los nitritos se oxidan “in vivo” en nitrato, los nitratos pueden determinarse cl´ınicamente para indicar la producci´ on de o´xido n´ıtrico. Cuando se trata de administrar intravascularmente a un perro una cantidad terap´euticamente eficaz de la NG-metil-L-arginina (NMA), esta cantidad oscilar´a entre 1 mg/kg y 100 mg/kg aproximadamente. Para un ser humano, la dosis apropiada de NMA y/o de otros antagonistas de la arginina deber´ a oscilar entre 0,1 mg/kg y 100 mg/kg. aproximadamente. La dobutamina, con una vida en circulaci´ on relativamente corta, deber´ a infundirse por v´ıa intravascular en dosis que oscilen entre 2.5 y 20 ug/kg/min aproximadamente. Breve descripci´ on de los dibujos La fig. 1A muestra la tensi´ on media en la sangre arterial de un perro anestesiado con pentobarbital tratado con NMA y dobutamina; la fig. 1B muestra la capacidad card´ıaca en un perro anestasiado tratado con NMA y dobutamina; la fig. 2 muestra la tensi´ on media en la sangre arterial de un perro anestesiado tratado con dobutamina solamente, y las figs. 3A a 5 muestran el efecto de la dobutamina y de la NMA en perros endotox´emicos. Descripci´ on de las realizaciones preferentes Uno de los objetos de la presente invenci´ on, es el tratamiento eficaz de compuestos farmac´euticos y medicamentos a utilizar en el choque s´eptico. Este tratamiento comprende la administraci´on concomitante de dobutamina y de NGsustituida arginina o de NG, NG-disustitu´ıda arginina. La NG-sustitu´ıda arginina es la NG-metilL-arginina. Estos productos, cuando se administran conjuntamente, dan lugar a una sorprendente elevaci´on de la tensi´on sangu´ınea sinerg´ıstica. El choque s´eptico es un estado de amenaza vital que resulta de la exposici´ on a la endotoxina bacteriana y se manifiesta por colapso cardiovascular. La respuesta a la endotoxina se pone de manifiesto con la liberaci´ on de citoquinas tales como el factor de necrosis tumoral y la interleuquina-1 que ocasionan la inducci´ on de una isoforma de s´ıntesis del ´oxido n´ıtrico que produce cantidades patol´ ogicas de o´xido n´ıtrico (NO).Mediante experimentos “in vitro” con c´elulas endoteliales tratadas con citoquina se demuestra que, una vez iniciada, la producci´ on de NOpuede persistir incluso despu´es de la supresi´ on del est´ımulo inductor. Los inventores presentes han demostrado que unos inhibidores de la bios´ıntesis del NO-, tales como la NMA, pueden invertir r´ apidamente la hipotensi´ on en perros tratados con TNF,IL-1 o endotoxina. Los efectos antihipotensos se incrementan con la administraci´ on simult´anea de dobutamina, un agente inotr´ opico. Como quiera que la mortalidad m´axima a causa del choque s´eptico se produce en las primeras 2448 horas, la inhibici´on del mediador vasoactivo final del choque endot´ oxico presenta unas ventajas te´oricas sobre los procedimientos que utilizan antagonistas receptores IL-1 o anticuerpos contra la endotoxina y/o TNF. Los experimentos que se indican a continuaci´on describen elempleo de NG-metil-L-arginina, 4

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un agente anti-hipotenso, con dobutamina (Dobutrex, Eli Lilly), un agente que estimula las contracciones cardiacas, para elevar la tensi´on sangu´ınea. La invenci´ on y el descubrimiento constituyen un nuevo procedimiento de empleo de la dobutamina, toda vez que, por s´ı misma, la dobutamina ejerce poco efecto sobre la tensi´on sangu´ınea. Ello no obstante, cuando se emplea en combinaci´ on con la NMA, los dos productos act´ uan sinerg´ısticamente para elevar la tensi´ on sangu´ınea. No se conoce completamente el mecanismo de esta acusado efecto vasopresor de la combinaci´ on de estos dos productos. Se ha conseguido una mejora sobre el empleo independiente de cada producto porque la NG-metil-L-arginina invierte la baja tensi´on sangu´ınea debida a la sepsis o a la hipotensi´ on inducida por la citoquina en aproximadamente 50-90 %, seg´ un la gravedad del colapso cardiovascular. La adici´on de dobutamina aumenta los efectos anti-hipotensos de la NMA y se traduce en una funci´ on cardiovascular m´ as plenamente eficaz. La administraci´ on de una combinaci´ on de NMA y de dobutamina a perros normales se traduce en una elevaci´on masiva de la tensi´on sangu´ınea (350/220 mm Hg), mientras que ninguno de los dos productos utilizado independientemente elevada la tensi´on m´ as de 10-15 mm (generalmente, 130-140/90-100 mm Hg). Esto demuestra que existe una actividad sinerg´ıstica entre los dos f´ armacos que no se presenta cuando los mismos se utilizan independientemente. En la fig. 1A, el animal fu´e pre-tratado con 100 mg de indometacina i.v. para evitar la s´ıntesis de la prostaciclina y este tratamiento no ejerci´o efecto alguno en la producci´ on de o´xido n´ıtrico. Luego de una hora de mediciones de la l´ınea de base, el animal recibi´ o NMA (20 mg/kg), registr´ andose un ligero aumento de la tensi´on sangu´ınea. Veinte minutos despu´es se administr´o dobutamina (10 ug/kg/min), observ´ andose un acusado incremento de la tensi´on sangu´ınea que volvi´o a ser normal despu´es de interrumpir la dobutamina. En la fig. 1B la capacidad card´ıaca inicial (l´ınea de base) fu´e dd 2,71, que aument´ o a 1,30 despu´es de administrar NMA. Esta disminuci´ on de la capacidad card´ıaca se invirti´o casi completamente por la administraci´ on de 10 ug/kg/min de dobutamina (capacidad card´ıaca = 2,61). Este efecto se invirti´o con la interrupci´ on de la dobutamina dando lugar a una disminuci´ on de la capacidad card´ıaca hasta el nivel observado despu´es de administrar NMA. En las figs. 1, 2 y 3 se describen ciertas observaciones experimentales que respaldan esta invenci´on. En las figs. 1A y 1B puede verse el registro de la tensi´on sangu´ınea de un perro normal que ha sido anestesiado con pentobarbital y entubado. A este perro anestesiado le fu´e administrada indometacina al comienzo de cada experimento para inhibir la s´ıntesis de la prostaciclina. La administraci´on de dobutamina en dosis de hasta 10 ug/kg/min, no alter´ o la tensi´on arterial media (V. la fig. 2). El animal recibi´ o una sola dosis i.v. de 20 mg/kg de NMA (exclusivamente NMA, 1a¯ flecha), registr´ andose un aumento de la tensi´ on sangu´ınea de solamente 12 mm Hg.

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La combinaci´on de NMA y dobutamina (Dobutrex, una marca registrada) se tradujo en unn acusado aumento de la tensi´on y la administraci´on de Dobutrex a raz´ on de ug/kg/min combinada despu´es de administrar la NMA (20 mg/kg), aument´ o la tensi´ on en 121 mm Hg (2a ¯ flecha). Despu´es, se interrumpi´ o la infusi´ on de Dobutrex y la tensi´on volvi´o a alcanzar la l´ınea de base. La dobutamina por s´ı sola no ejerci´o un efecto significativo sobre la tensi´ on residual ante la ausencia de NMA (Fig. 2). En un experimento aparte, se trat´ o a un perro con endotoxina (LPS) (100 ug/kg), observ´ andose que la tensi´ on disminu´ıa en 121,5 mm Hg a 23,3 mm Hg (Fig. 3A). En la fig. 3A, un perro anestesiado ha recibido 100 mg. de indometacina para inhibir la prostaciclina y durante 20 minutos se midi´ o la tensi´on media de la sangre arterial en la l´ınea de base. Durante un periodo de 20 minutos, se administr´ o endotoxina (lipopolisac´ arido LPS) a raz´on de 100 ug/kg y 40 minutos despu´es del comienzo de la infusi´on de endotoxina, se comprob´ o que disminu´ıa la tensi´on. La NMA se administr´ o mediante p´ıldoras i.v. (40 mg/kg) dando lugar a un aumento de 49,3 mm Hg en la tensi´ on, la cual se increment´o con la administraci´on de 2,5 ug/kg/min de dobutamina a un nivel de 91 mm Hg (un aumento de 67,7 mm Hg). La administraci´ on de NMA trajo como resultado un aumento de la tensi´ on (Delta=49,6 mm Hg; 2a¯ flecha). Este efecto anti-hipotenso se increment´ o significativamente con la co-administraci´on de 2,5 ug/kg/min de Dobutrex (Delta= 67,7 mm Hg; fig. 3A, 2a¯ flecha). Nuevas subidas de los niveles de Dobutrex solamente sirvieron para aumentar la MAP (tensi´ on arterial media) a un m´ aximo de 91 mm. Hg. La administraci´on de NMA exclusivamente produjo una reducci´ on de la capacidad card´ıaca (Fig. 1B), reducci´ on que se invirti´o mediante la administraci´on de dobutamina (10 ug/kg/min). En animales endotox´emicos hipotensos se observ´o una reducci´ on de la capacidad cardiaca antes de la administraci´on de NMA. Esta baja capacidad cardiaca se aument´ o ligeramente despu´es de administrar NMA (Fig. 3B). La administraci´ on de dobutamina aument´ o la capacidad cardiaca en funci´ on de la dosis efectu´ andose una inversi´ on casi completa de la baja capacidad cardiaca con 20 ug/kg/min de dobutamina (110 minutos, fig. 3B). En la fig. 3B se midi´ o la capacidad cardiaca antes de administrar la endotoxina (LPS), registr´ andose una disminuci´ on 40 minutos despu´es del comienzo de la infusi´ on de LPS. Esta disminuci´on de la capacidad cardiaca se invirti´ o con dobutamina en funci´ on de la dosis, de tal manera que la administraci´ on de dobutamina a raz´ on de 20 ug/kg/min, invirti´ o casi completamente la capacidad cardiaca con la endotoxina y la NMA. En un estudio, no se observ´ o incremento de la tensi´on sangu´ınea en animales que hab´ıan recibido 10 o 20 ug/kg/min de dobutamina exclusi-

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vamente (no reproducido o reproducido anteriormente en la fig. 2 de la solicitud de la patente original). La administraci´ on de NMA di´ o lugar a un aumento en funci´ on de la dosis de la tensi´ on. La co-administraci´ on de dobutamina a raz´ on de 10 ug/kg elev´ o significativamente la tensi´ on observada con NMA solamente. Esta mejora se acentu´ o con dosis m´as elevadas de dobutamina (20 ug/kg/min). Estos resultados indican que los incrementos de la tensi´on que se producen como resultado de la administraci´ on de NMA mejoran significativa e inesperadamente con la dobutamina de una forma superior al efecto que se consigue con cada f´ armaco por separado. Adem´as, esta mejora se consigue de una forma en funci´ on de la dosis (respecto a la dobutamina) en una escala relevante con dosis cl´ınicas farmacol´ogicamente aceptables. Los datos experimentales se reproducen en las figs. 4 y 5. La fig. 4 muestra los cambios de la tensi´on arterial media (mm Hg) en perros que han recibido diferentes dosis de NMA sola o de NMA combinada con dobutamina a raz´ on de 10 o de 20 ug/kg/min. Para medir la respuesta a las dosis de la tensi´ on con diferentes dosis de NMA, se administr´ o ´esta en dosis incrementales de 5 mg/kg hasta alcanzar un plat´ o de la tensi´on sangu´ınea (c´ırculos abiertos, NMA solamente). Esta respuesta a la dosis se repiti´ o en presencia de 10 ug/kg/min (cuadrados abiertos) o de 20 ug/kg/min (tri´ angulos abiertos) de dobutamina. La fig. 5 muestra la respuesta de la tensi´on sangu´ınea de un perro endotox´emico hipotenso a la NMA y a la dobutamina. Este gr´ afico reproduce la tensi´on arterial media de un perro al que se administr´ o una dosis de endotoxina (LPS) de 50 ug/kg, seguida de NMA y dobutamina. La tensi´on en la l´ınea de base fu´e de 100.6 mm Hg inmediatamente antes del comienzo de la infusi´on de LPS. Despu´es de la infusi´ on de la endotoxina, se observ´ o que el aumento transitorio de la tensi´on hab´ıa disminuido a 48,0 mm Hg. En este momento, se administraron dos dosis sucesivas de NMA que no produjeron efecto sobre la bajada de la tensi´on. Esta, result´ o ser de 29,8 mm Hg inmediatamente antes de comenzar la infusi´on de dobutamina (10 ug/kg/min). La administraci´ on de dobutamina ocasion´ o una inversi´ on de la hipotensi´on, increment´ andose la tensi´on sangu´ınea a 148,4, lo que supone un notable aumento neto de 118,6 mm Hg. Estas cifras suministran una prueba adicional de que la NMA y la dobutamina combinadas mejoran significativamente el efecto anti-hipotenso, toda vez que el m´aximo incremento de la tensi´on sangu´ınea observado hasta la fecha en animales endotox´emicos hipotensos en respuesta a la NMA exclusivamente ha sido de un aumento de la MAP de 47,8 mm Hg (Kilbourn y col. BBRC 172, 11321138, 1990).

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REIVINDICACIONES 1. Compuesto farmac´eutico que contiene dobutamina y L-arginina LG-sustitu´ıda o Larginina NG, NG-disustitu´ıda, para el tratamiento del choque s´eptico. 2. Compuesto farmac´eutico seg´ un la reivindicaci´on 1, en el que la L-arginina NG-sustitu´ıda es la NG-metil L-arginina. 3. Compuesto farmac´eutico seg´ un las reivindicaciones 1 ´o 2, que se presenta en una forma id´ onea para administraci´ on intravenosa. 4. Preparado combinado de dobutamina y L-arginina NG sustitu´ıda o L-arginina NG, NGdisustitu´ıda, para uso simult´ aneo, por separado o sucesivo para el tratamiento del choque s´eptico. 5. Preparado seg´ un la reivindicaci´ on 4, en el que la L-arginina NG-sustitu´ıda es NG-metil-L-

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arginina. 6. Preparado seg´ un la reivindicaci´ on 4, que se presenta en una forma id´ onea para administraci´ on intravenosa. 7. Utilizaci´on combinada de dobutamina y L-arginina NG-sustitu´ıda o L-arginina NG, NGdisustitu´ıda, para preparar un medicamento a emplear para el tratamiento del choque s´eptico. 8. Utilizaci´on seg´ un la reivindicaci´ on 7, en la que la utilizaci´on es simult´ anea, independiente o sucesiva. 9. Utilizaci´on seg´ un las reivindicaciones 7 u 8, en la que la L-arginina NG-sustitu´ıda en NGmetil L-arginina. 10. Utilizaci´ on seg´ un una de las reivindicaciones 7 a 9 en la que el medicamento se presenta en una forma id´ onea para administraci´ on intravenosa.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

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Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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