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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 248 100

51 Int. Cl. : A61K 7/48

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ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 00954477 .6

86 Fecha de presentación : 11.07.2000

87 Número de publicación de la solicitud: 1198221

87 Fecha de publicación de la solicitud: 24.04.2002

54 Título: Composiciones para el cuidado de la piel.

30 Prioridad: 30.07.1999 GB 9918030

73 Titular/es: UNILEVER N.V.

Weena 455 3013 AL Rotterdam, NL

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

16.03.2006

72 Inventor/es: Barrett, Karen E.;

Green, Martin, R.; Hu, Heng-Long; Parmar, Preyesh; Powell, Jonathan R. y Rawlings, Anthony V.

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Carpintero López, Francisco

ES 2 248 100 T3

16.03.2006

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 248 100 T3 DESCRIPCIÓN Composiciones para el cuidado de la piel. 5

Campo de la invención Esta invención se refiere a composiciones tópicas para una aplicación sobre piel humana y a su uso en la mejora del estado y aspecto de la piel.

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Antecedentes de la invención

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La piel está sometida a un deterioro debido a trastornos dermatológicos, agresiones ambientales (viento, aire acondicionado y calefacción) o al proceso normal de envejecimiento (cronoenvejecimiento), que puede verse acelerado por la exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En los últimos años, la demanda por composiciones cosméticas y procedimientos cosméticos para mejorar el aspecto y estado de la piel ha crecido considerablemente. Los consumidores buscan cada vez más productos cosméticos “anti-edad” que traten y retrasen lo signos visibles del crono y fotoenvejecimiento en la piel tales como arrugas, líneas, flacidez, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento.

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Con frecuencia, los consumidores también buscan en los productos cosméticos otros beneficios, aparte del antienvejecimiento. El concepto de “piel sensible” también ha hecho aumentar la demanda del consumidor por productos cosméticos que mejoren el aspecto y estado de la piel sensible, seca y/o con escamas, y que calmen la piel enrojecida y/o irritada. Los consumidores también desean productos cosméticos que tengan un efecto de control de la grasa y el sebo. A muchas personas les preocupa el grado de pigmentación de su piel. Por ejemplo, personas con manchas o pecas de envejecimiento pueden desear que tales manchas pigmentadas sean menos pronunciadas. Otros pueden desear reducir el oscurecimiento de la piel causado por una exposición a la luz solar o aclarar el color natural de su piel. Han sido numerosos los intentos por satisfacer estas necesidades, desarrollando productos que reducen la producción de pigmentos en los melanocitos. Sin embargo, las sustancias identificadas hasta el momento tienden a producir efectos laterales no deseados, p.ej., irritación cutánea. Por consiguiente, tales sustancias no son aptas para un uso cosmético o sólo pueden ser aplicadas a una concentración en la que su efecto de aclaramiento de la piel es menor del deseado. Se puede considerar la utilización de una combinación de diferentes sustancias aclaradoras de la piel para reducir los efectos laterales adversos, pero existe un riesgo sustancial que consiste en que, al utilizar tal combinación, el aclaramiento de la piel se vea también reducido debido a efectos competitivos. Por lo tanto, existe una necesidad por mejorar la eficacia de los productos cosméticos aclaradores de la piel, particularmente, de manera que no irriten la misma.

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El documento J07277939 describe una composición para el cuidado de la piel destinada a mejorar el envejecimiento y la inflamación de la piel que contiene (A) Flor de Manita y (B) al menos un agente activo seleccionado entre desoxigenadores, antioxidantes, activadores celulares, antiinflamatorios, inhibidores de la tirosinasa y agentes que conservan la humedad de la piel. Entre las numerosas opciones de ingredientes descritos como componente B están quercetina, quercitolina, catequina, ácido gálico, ácido gamma linolénico y ácido eicosapentaenoico. El documento J05271046 describe una composición para aclarar la piel que contiene un ácido graso no saturado con 18 a 22 átomos de carbono y dos o más enlaces no saturados, tal como ácido linoleico y araquidónico, y un polifenol.

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El en documento EP A 0709084 se describe el uso de aceites ricos en ácido petroselínico como agente hidratante en composiciones para el cuidado de la piel. 55

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Se conoce el uso de ácidos grasos, incluyendo el ácido petroselínico, en formulaciones cosméticas para el tratamiento del cabello. El documento EP-A-116439 describe tónicos para el cabello que incluyen ácidos grasos (tales como el ácido petroselínico) para tratar la caspa y aliviar los picores, así como para estimular el crecimiento del cabello. Sin embargo, la técnica anteriormente tratada no revela la combinación sinérgica específica del ácido petroselínico con un compuesto fenólico ni el uso de tal combinación específica para el tratamiento de arrugas, piel sensible, piel seca, control de la secreción de aceite/sebo o aclaramiento de la piel. Actualmente, hemos descubierto que es posible obtener un tratamiento y una prevención eficaces de las condiciones normales pero cosméticamente no deseables de la piel debidas al cronoenvejecimiento o fotoenvejecimiento, tales como arrugas, líneas, flacidez, hiperpigmentación y manchas de envejecimiento, a través de la aplicación de composiciones cosméticas en la piel que comprenden un ácido graso específico (ácido petroselínico y/o derivados del mismo) en combinación con un compuesto fenólico. Hemos descubierto también que el uso de tales composiciones cosméticas proporciona ventajosamente otros beneficios en el cuidado de la piel además del antienvejecimiento, tales como el alivio de la piel sensible y/o irritada, el control de la secreción de grasa/sebo y el aclaramiento de la piel. 2

ES 2 248 100 T3 Resumen de la invención Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una composición tópica que comprende: 5

(a) ácido petroselínico y/o derivados del mismo; (b) un compuesto fenólico y/o mezclas de los mismos; y (c) un vehículo dermatológicamente aceptable.

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De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento cosmético para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado entre: tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; estimulación de la deposición de colágeno en la piel, estimulación de la producción de decorina en la piel, aumento de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo, comprendiendo el procedimiento la aplicación en la piel de una composición tópica como la anteriormente descrita. La presente invención abarca también el uso de las composiciones de la invención para proporcionar al menos uno de los beneficios en el cuidado de la piel seleccionado entre tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, piel envejecida y/o fotodañada; estimulación de la deposición de colágeno en la piel, estimulación de la producción de decorina en la piel, aumento de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo. Según todavía otro aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de ácido petroselínico y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico y/o mezclas de los mismos en una composición cosmética tópica para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado entre tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, piel envejecida y/o fotodañada; estimulación de la deposición de colágeno en la piel, estimulación de la producción de decorina en la piel, aumento de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo. Las composiciones, los procedimientos y los usos de la invención proporcionan de este modo beneficios anti-edad que resultan en la potenciación de una piel suave y flexible con una elasticidad mejorada y una aparición reducida o retardada de arrugas y envejecimiento, mejorando el color de la misma. Se consigue una mejora general en el aspecto, la textura y el estado, en concreto, con respecto al resplandor, la claridad y el aspecto general joven de la piel. Las composiciones, los procedimientos y los usos de la invención también son beneficiosos para aliviar y calmar la piel sensible y/o irritada, para aclarar la piel y para controlar la secreción de grasa/sebo. Por lo tanto, la presente invención proporciona ventajosamente un amplio rango de beneficios para el cuidado de la piel.

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El término “tratamiento” como se utiliza aquí engloba la reducción, el retraso y/o la prevención de las condiciones de la piel normal arriba mencionadas tales como piel con arrugas, envejecida y/o fotodañada, y/o irritada, y generalmente la mejora de la calidad de la piel, así como de su aspecto y textura mediante la prevención o reducción de irritación y arrugas, y el aumento de la flexibilidad, firmeza, suavidad y elasticidad de la piel. Las composiciones, los procedimientos y los usos según la invención pueden ser útiles para el tratamiento de la piel que ya está arrugada, envejecida, fotodañada o irritada, o para el tratamiento de la piel joven en la prevención o reducción de los cambios no deseados arriba mencionados producidos por el proceso normal de envejecimiento o fotoenvejecimiento. Descripción detallada de la invención

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Ácido petroselínico El ácido petroselínico (en lo sucesivo, denominado AP) es un ácido graso de cadena larga (C18 ) monoinsaturado, que tiene la fórmula CH3 (CH2 )10 CH=CH(CH2 )4 COOH. 55

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La invención incluye además derivados del ácido libre que comprenden así restos de ácido petroselínico. Los derivados preferidos incluyen aquéllos que derivan de la sustitución del grupo carboxílico del ácido, tales como ésteres (p.ej., ésteres de triglicéridos, ésteres de monoglicéridos, ésteres de diglicéridos, fosfoésteres), amidas (p.ej., derivados de la ceramida), sales (p.ej., sales de metales alcalinos o de metales de tierra alcalina, sales de amonio); y/o aquéllos que derivan de la sustitución de la cadena de carbonos C18 , tales como derivados alfa hidroxílicos y/o beta hidroxílicos. En el caso de los derivados de ésteres de triglicéridos, se incluyen todos los isómeros posicionales de los sustituyentes del AP del esqueleto del glicerol. Los triglicéridos deben contener al menos un resto de AP. Por ejemplo, de las tres posiciones esterificables del esqueleto de glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden ser esterificadas con AP, y mediante otro lípido en la posición 3 o como alternativa, el esqueleto de glicerol podría ser esterificado mediante AP en las posiciones 1 y 3 con otro lípido en la posición 2. 3

ES 2 248 100 T3 Los aceites ricos en triglicérido con ácido petroselínico son, por tanto, también aptos para el uso en la presente invención. Tales aceites están comercialmente disponible e incluyen aceite de semilla de perejil, aceite de semilla de zanahoria, aceite de hinojo, aceite de semilla de chirivía, aceite de semilla de cilantro, aceite de semilla de perifollo, aceite de alcaravea y aceite de semilla de apio. 5

Cuando se utiliza el término “ácido petroselínico” o “AP” en esta memoria se ha de entender que también quedan incluidos los derivados del mismo que comprenden restos de AP. El término “restos de AP” se refiere a la porción o las porciones acilo grasas de AP de un derivado del AP. 10

Para utilizar el AP según la presente invención debe estar presente en la composición tópica en una cantidad eficaz. Normalmente, la cantidad total del activo está presente en una cantidad entre el 0,0001% y el 50% en peso de la composición. Más preferiblemente, la cantidad es del 0,01% al 10%, y lo más preferible es que sea del 0,1% al 5% con el fin de maximizar los beneficios a un coste mínimo.

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Compuestos fenólicos

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Los compuestos fenólicos se pueden dividir en al menos 10 clases diferentes en función de su estructura química básica. Los compuestos incluyen fenoles simples (C6 ), benzoquinonas (C6 ), ácidos fenólicos (C6 -C1 ), acetofenonas (C6 -C2 ), ácidos fenilacéticos (C6 -C2 ), ácidos hidroxicinámicos (C6 -C3 ), fenilpropenos (C6 -C3 ), cumarinas, isocumarinas (C6 -C3 ), cromonas (C6 -C3 ), naftoquinonas (C6 -C4 ), xantonas (C6 -C1 -C6 ), estilbenos (C6 -C2 -C6 ), flavonoides (C6 C3 -C6 ), lignanos, neolignanos (C6 -C3 )2 y ligninos (C6 -C3 )n . El término flavonoides representa un grupo muy amplio de compuestos constituidos por dos anillos aromáticos unidos mediante una unidad de tres carbonos, p.ej., C6 -C3 -C6 . La familia de los flavonoides incluye flavonoles monoméricos de isoflavonoides, dihidroflavonoides, catequinas, epicatequinas (p.ej., lauronas), leucoantocianadinas, proantocianadinas, antocianadinas, flavonas, flavononas, chalconas, dihidrochalconas, isoflavonas, neoflavonas, auronas, flaván-3-ols, flavón-3-ols y antrocianinas. El término “isoflavanoides” también incluye isoflavonas, pterocarpanos, isoflavononas, retenoides, isoflavanos e isoflavanoles.

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Los compuestos fenólicos preferidos para su utilización en las composiciones de la presente invención son los flavonoides, que incluyen flavononas tales como naringenina; flavonoles, tales como quercetina, catequina (p.ej., galato de epigalocatequina, EGCG); isoflavonoides, tales como daidzeína, genisteína, licetina; y también ácidos fenólicos, tales como ácido gálico y polifenoles del té verde.

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La quercetina, naringenina, daidzeína, genisteína, EGCG y los polifenoles de té verde se pueden obtener de Sigma. También son aptos para su uso en la presente invención los extractos de plantas que contienen compuestos fenólicos. Por ejemplo, rutina, onagra, cebolla, especies cítricas que contienen quercetina y naringenina, soja, que contiene daidzeína y genisteína, y variedades del té verde, tales como la Camellia sinensis y assamica, que contienen EGCG y polifenoles del té verde.

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Los compuestos fenólicos o las mezclas de los mismos se emplean en la composición de la invención en una cantidad del aproximadamente 0,01% al aproximadamente 10%, preferiblemente, en una cantidad del aproximadamente 10% al aproximadamente 1%, siendo la cantidad más preferible del aproximadamente 0,1% al aproximadamente 5%. 45

Vehículo dermatológicamente aceptable

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La composición utilizada según la invención también comprende un vehículo dermatológicamente o cosméticamente aceptable que actúa como diluyente, dispersante o vehículo para los agentes activos. El vehículo puede comprender materiales comúnmente empleados en los productos destinados al cuidado de la piel tales como agua, emolientes líquidos o sólidos, aceites de silicona, emulgentes, solventes, humectantes, espesantes, polvos, propelentes y similares. El vehículo normalmente formará del 5% al 99,9%, preferiblemente, del 25% al 80% en peso de la composición, y puede, en ausencia de otros adyuvantes cosméticos, formar el resto de la composición.

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Materiales beneficiosos y adyuvantes cosméticos para la piel opcionales Además de los agentes activos, también se pueden incluir otros activos beneficiosos específicos de la piel tales como pantallas solares, agentes de aclaramiento cutáneo o agentes de bronceado cutáneo. El vehículo puede incluir además adyuvantes tales como antioxidantes, perfumes, opacificantes, conservantes, colorantes y tampones.

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Preparación, forma, uso y envasado del producto

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Para preparar la composición tópica utilizada en el procedimiento de la presente invención, se puede emplear el procedimiento habitual de preparación de productos para el cuidado de la piel. Los componentes activos son generalmente incorporados en un vehículo dermatológica o cosméticamente aceptable de un modo convencional. Los componentes activos pueden ser primero adecuadamente disueltos o dispersados en una parte de agua u otro solvente o líquido por incorporar en la composición. Las composiciones preferidas son emulsiones de aceite en agua o de agua en aceite o de agua en aceite en agua. 4

ES 2 248 100 T3

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La composición puede estar en la forma de los productos convencionales para el cuidado de la piel tales como crema, gel o loción, cápsula o similares. La composición también puede estar en forma de un llamado producto “wash-off”, p.ej., un gel de baño o de ducha, que posiblemente contenga un sistema de administración para los agentes activos que promueva la adherencia a la piel durante el aclarado. Lo más preferible es que el producto sea un producto sin necesidad de aclarado; un producto para aplicarlo sobre la piel que no requiere una etapa de aclarado poco después de su aplicación sobre la piel. La composición puede envasarse de cualquier manera apta, tal como en un tarro, una botella, un tubo, un envase de bola o similares, del modo convencional. También está previsto que las composiciones de la invención puedan envasarse como un envase de dos composiciones por separado, una con ácido petroselínico y la segunda con compuesto fenólico, para ser aplicadas sobre la piel simultanea o consecutivamente. La composición según la invención también puede estar formulada en una forma apta para la ingestión oral, tal como una cápsula, un comprimido o similares.

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El procedimiento de la presente invención puede llevarse a cabo una o más veces al día sobre la piel que requiera el tratamiento. La mejora en el aspecto de la piel normalmente será visible pasados de 3 a 6 meses, en función del estado de la piel, la concentración de los componentes activos utilizados en el procedimiento de la invención, la cantidad de composición utilizada y la frecuencia con la que se aplique. En general, se aplica una pequeña cantidad de composición, por ejemplo de 0,1 a 5 ml, sobre la piel desde un recipiente o aplicador apto y se extiende y/o frota sobre la piel con las manos o los dedos o un dispositivo apto. A continuación, se puede realizar una etapa opcional de aclarado, dependiendo de si la composición es formulada como un producto sin necesidad de aclarado o como un producto con necesidad de aclarado. Para hacer más fácilmente comprensible la presente invención, se proporcionan los siguientes ejemplos, únicamente a modo de ilustración. Ejemplos

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Ejemplo 1 Procedimiento para medir la síntesis de procolágeno I y decorina en fibroblastos dérmicos humanos Preparación de un medio acondicionado para fibroblastos dérmicos

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Se sembraron fibroblastos primarios de prepucio humano del paso 2 (P2) en placas de 12 pozos a 10.000 células/ cm2 , y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono y 4% de oxígeno en un medio de Eagles modificado por Dulbeccos (DMEM, Dulbeccos Modified Eagles Medium) complementado con un 10% de suero de becerro fetal. Tras este período, se lavaron las células con medio DMEM libre de suero y luego se incubaron en un medio DMEM libre de suero fresco durante 60 horas más. Luego se volvieron a lavar las monocapas de fibroblastos con DMEM libre de suero. Se añadieron los reactivos de análisis y los controles de vehículo a las células por triplicado en un volumen final de 0,4 ml/pozo de DMEM libre de suero fresco y se incubaron durante 24 horas más. El medio acondicionado para fibroblastos fue bien inmediatamente analizado o congelado de inmediato en nitrógeno líquido y almacenado a -70ºC para su posterior análisis. Luego se procedió al recuento de células y, posteriormente, a la estandarización al número de células de los datos procedentes de un análisis de transferencia en mancha. Ejemplo 2

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Análisis de transferencia en mancha para las proteínas procolágeno I y decorina en un medio acondicionado para fibroblastos dérmicos Varias muestras del medio acondicionado para fibroblastos dérmicos tratados con vehículo (como control) o reactivos de análisis fueron complementadas con ditiotreitol 20 mM (dilución 1:10 de solución madre 200 mM) y un 0,1% de dodecilsulfato de sodio (dilución 1:100 de un 10% de solución madre), se mezclaron bien y luego se incubaron a 75ºC durante 2 minutos. Se generó un estándar para el análisis mediante la dilución en serie de medio limpio acondicionado para fibroblastos procedente de fibroblastos sembrados a 10.000 células/cm2 en un matraz de 175 cm2 y mantenidos en medio DMEM libre de suero como se describe anteriormente. Luego, se aplicaron las muestras de análisis por triplicado a una lámina prehumedecida de membrana de transferencia Immobilon-P con el aparato Bio-Dot de 96 pozos de Bio-Rad, según lo descrito en las instrucciones de los fabricantes. Se aplicaron aproximadamente 200 µl de medio por pozo. Se dejó filtrar el medio a través de una membrana sometida a gravedad (30 minutos), tras lo cual la membrana fue lavada dos veces con PBS (200 µl). Se dejaron filtrar estos lavados con PBS a través de una membrana bajo gravedad (2 x 15 minutos). Se enchufó luego el aparato Bio-Dot a un distribuidor de vacío, y se llevó a cabo un tercer y último lavado con PBS bajo succión. Se desarmó el aparato, se retiró la membrana y se cortó rápidamente como se requiere antes de ser colocada en tampón de bloqueo durante toda la noche a 4ºC. Se bloquearon las membranas preparadas para el análisis de decorina con un 3% (p/v) de BSA/0,1% (v/v) de Tween 20 en PBS, mientras que las destinadas al análisis del procolágeno I fueron bloqueadas con 5

ES 2 248 100 T3 un 5% (p/v) de leche en polvo desgrasada/0,05% de Tween 20 en PBS. Al día siguiente, se sondaron las membranas con dilución 1:10000 de anticuerpos primarios de bien procolágeno I humano (MAB1912; monoclonal de rata; Chemicon Int. Inc., Temecula, CA) o decorina humana (policlonal de conejo; Biogenesis) durante 2 horas a la temperatura de la habitación. 5

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Las membranas fueron posteriormente lavadas con TBS/0,05% de Tween 20 (3 x 5 minutos) y luego se incubaron con dilución 1:1000 de fragmentos F(ab’)2 de anti-rata o anti-conejo 125 I-conjugados (Amersham) como se requiere durante 1 hora a la temperatura de la habitación. A continuación, se volvieron a lavar las bandas de Immobilon con TBS/Tween 20 (3 x 5 minutos) antes de dejarlas secar en aire a la temperatura de la habitación. Se envolvieron las membranas secas en celofán y se expusieron a una criba de almacenamiento de fósforo de Molecular Dynamics durante 16-18 horas. Transcurrido este tiempo, la criba expuesta fue escaneada por un phosphorimager (Phosphorimager SF de Molecular Dynamics) utilizando el programa ImageQuant®. Se evaluó la intensidad de la transferencia mediante un análisis de imágenes asistido por ordenador, utilizando las herramientas de cuantificación de ImageQuant®, estandarizada al número de células, y se determinaron los efectos de varios reactivos de análisis sobre la síntesis de decorina y procolágeno I con respecto a un valor control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias. Ejemplo 3

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Análisis

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La siguiente tabla 1 indica el efecto sinérgico del ácido petroselínico en combinación con los compuestos fenólicos galato de epigalocatequina (EGCG), ácido gálico, diadzeína, genesteína, quercetina sobre la síntesis de procolágeno I y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en las que fueron aplicados los agentes activos. Con el fin de normalizar los resultados, los efectos de las sustancias de análisis fueron determinados en función de un valor control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias. Las concentraciones de reactivos utilizadas en las pruebas no influyeron en la viabilidad de las células. Las diferencias en los porcentajes para el ácido petroselínico 0,01 micromolar observadas entre los experimentos reflejan la variación normal entre experimentos, incluyendo la que surge debido al uso de líneas celulares distintas. TABLA 1

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Tratamiento Control (Vehículo)

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Procolágeno I

Decorina

100

100

0,01 µM de AP

93,7%

0,005 µg/ml de EGCG

118,4%

0,01 µM de AP + 0,005 µg/ml de EGCG

140,5%

0,01 µM de AP

91,6%

0,05 µg/ml de EGCG

111,7%

0,01 µM de AP + 0,05 µg/ml de EGCG

131,2%

0,01 µM de AP

102,7%

0,5 µg/ml de EGCG

120,2%

0,01 µM de AP + 0,5 µg/ml de EGCG

155,9%

0,01 µM de AP

100,9%

0,001 µg/ml de ácido gálico

96,6%

0,01 µM de AP + 0,001 µg/ml de ácido gálico

129,2%

0,01 µM de AP

90,94%

100,3%

0,01 µM de daidzeína

96,04%

92,83%

0,01 µM de AP + 0,01 µM de daidzeína

132,3%

136,29%

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ES 2 248 100 T3 TABLA 1 (continuación) Tratamiento 5

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Procolágeno I

Decorina

100

100

0,01 µM de AP

117,34%

95,08%

1 µM de genisteína

101,74%

99,75%

0,01 µM de AP + 1 µM de genisteína

130,23%

125,41%

Control (Vehículo)

0,01 µM de AP

93,97%

1 µM de quercetina

97,60%

0,01 µM de AP + 1 µM de quercetina

109,19%

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Los resultados de la tabla 1 indican que la combinación de ácido petroselínico con un compuesto fenólico regula sinérgicamente la síntesis de procolágeno I y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos. 25

El nivel de decorina en la piel está asociado con la mejora del estado y aspecto de la misma. El aumento del nivel de decorina en la piel es importante para un depósito controlado y correcto del colágeno en la misma, algo que se asocia con numerosos beneficios, tales como eliminación de arrugas y reparación dérmica de la piel fotodañada. Ejemplo 4

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Este ejemplo demuestra el efecto sinérgico de la combinación específica de ácido petroselínico y un compuesto fenólico en la reducción de la respuesta inflamatoria de los fibroblastos dérmicos. Análisis de PGE2 y MAIC de fibroblastos

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La producción de moléculas de adhesión intracelular (MAIC) y prostaglandinas E2 (PGE2 ) por parte de los fibroblastos de piel humana puede ser inducida mediante el PMA (forbol miristato acetato) de estímulo inflamatorio. El PMA representa un factor de estrés externo que induce al estrés oxidativo y a respuestas inflamatorios en células. Este modelo se utiliza para modelizar la inflamación in vivo.

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Se sembraron fibroblastos primarios de prepucio humano de paso 2 (P2) en placas de 96 pozos a 10.000 células/pozo, y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono en un medio de Eagles modificado por Dulbeccos (DMEM) complementado con un 10% de suero de becerro fetal. Las sustancias de análisis indicadas en la siguiente tabla 2 fueron añadidas a un medio de células frescas (DMEM, complementado con un 10% de suero de becerro fetal) a una concentración final de dimetilsulfoxida y etanol menor del 1%, por triplicado, y se incubaron durante 24 horas más. Se añadió forbol miristato acetato (PMA) (Sigma) 10 nM al medio, y se incubaron las células durante 24 horas más. El control únicamente contenía el vehículo. No contenía ningún compuesto de análisis ni ningún PMA. Los fibroblastos/el medio fueron entonces analizados como se describe abajo, congelados de inmediato en nitrógeno líquido y almacenados a -70ºC para su posterior análisis. Luego se procedió al recuento de células y, posteriormente, a la estandarización al número de células de los datos procedentes de un análisis de transferencia en mancha.

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Análisis de prostaglandina E2 (PGE2 )

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Se tomaron volúmenes de 50 µl de medio de cultivo para el análisis de la PGE2 tras agitar cuidadosamente la placa de cultivo. Los niveles de PGE2 del medio fueron determinados con un equipo de inmunoanálisis para PGE2 Biotrak (Amersham, RU). El análisis se basa en la competición entre la PGE2 sin etiquetar de la muestra y una cantidad fija de PGE2 etiquetada de peroxidasa de rábano picante para una cantidad limitada de anticuerpo específico de la PGE2 fijado. La determinación de las concentraciones de PGE2 de la muestra sin etiquetar se realizó según una curva estándar que fue obtenida al mismo tiempo.

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Análisis de MAIC-1

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Se desecharon los medios y se lavaron las células con PBS de Dulbecco. Se añadieron 150 µl de 0,1% de Triton X-100 (Sigma) a las células lavadas durante 3 minutos para extraer la MAIC de la membrana celular. Se transfirieron los extractos a tubos de centrifugación tipo Eppendoff y se centrifugaron a 1.000 xg durante 2 minutos para eliminar los restos celulares. Para el análisis de MAIC se utilizó un volumen de 100 µl de sobrenadante. La MAIC-1 soluble fue evaluada con un equipo de análisis inmunoenzimométrico comercialmente disponible (R&D Systems). Las concentraciones de MAIC-1 de las muestras fueron determinadas con respecto a una curva estándar paralela. 7

ES 2 248 100 T3 En la siguiente tabla 2, se resumen los resultados obtenidos a partir de los análisis de PGE2 y MAIC. TABLA 2 5

Tratamiento

% de inhibición de los niveles de PGE2 en fibroblastos

% de inhibición de la producción de MAIC en fibroblastos

100

100

Control 10

PMA + AP 1 nM

15

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PMA + EGCG 10 µM

14,4

PMA + AP 1nM + EGCG 10 µM

56,1

PMA + quercetina 10 µM

27,8

PMA + AP 1 nM + quercetina 10 µM

48,3

20

25

30

35

40

PMA + AP 1 nM

27,26

25,91

PMA + genisteína 1 µM

86,16

30,59

PMA + AP 1 nM + genisteína 1 µM

51,98

63,79

Los resultados anteriores muestran que las células desafiadas con un estímulo inflamatorio tal como el PMA (forbol miristil acetato) causan un aumento de la respuesta inflamatoria medida mediante la producción de prostaglandina E2 (PGE2 ). La combinación específica de ácido petroselínico y compuesto fenólico reduce sinérgicamente la respuesta inflamatoria medida mediante la producción de PGE2 . Los resultados demuestran así que la combinación específica de los activos pertenecientes al alcance de la presente invención muestra inesperadamente una actividad intiinflamatoria sinérgica. Los resultados anteriores también demuestran que las células desafiadas con PMA originan un aumento en la producción de MAIC. El tratamiento de las células con una combinación de ácido petroselínico y compuesto fenólico disminuye sinérgicamente la producción de molécula de adhesión intracelular (MAIC), que es otro marcador de la inflamación. Estos resultados también muestran por tanto que las combinaciones específicas de los activos pertenecientes al alcance de la presente invención muestran una buena y sorprendente actividad antiinflamatoria sinérgica. Ejemplo 5

45

La siguiente formulación describe una crema de aceite en agua apta para los procedimientos y usos según la presente invención. Los porcentajes indicados están en peso de composición. % en peso

% en peso

% en peso

4

4

4

1,15

2

3

Polifenoles del té verde

0

2

0

EGCG

0

0

1

0,5

0

0

Brij 56*

4

4

4

Alfol 16RD*

4

4

4

Trietanolamina

0,75

0,75

0,75

Butano-1,3-diol

3

3

3

Goma xantana

0,3

0,3

0,3

Aceite mineral 50

Ácido petroselínico (triglicérido) ex Elysion

55

Quercetina 60

65

8

ES 2 248 100 T3 (Continuación)

5

% en peso

% en peso

% en peso

qs

qs

qs

0,01

0,01

0,01

Hasta 100

Hasta 100

Hasta 100

Perfume Hidroxitolueno butilado

10

Agua Brij 56* es cetil alcohol POE (10) Alfol 16RD es cetil alcohol

15

Ejemplo 6 La siguiente formulación describe una crema emulsión según la presente invención.

20

25

30

Nombre químico completo o nombre de la CTFA

Nombre comercial

% en peso

% en peso

% en peso

Aceite de semilla de cilantro ex Loders Croklaan (triglicérido de AP en un 60-75% del total de ácidos grasos)

2,0

3

1,5

Ácido gálico

1

0

0

Genisteína

0

2

Diadzeína

0

0

1,5

EDTA de disodio

Sequesterene Na2

0,05

0,05

0,05

Silicato de aluminio de magnesio

Veegum Ultra

0,6

0,6

0,6

Metil parabeno

Methyl Paraben

0,15

0,15

0,15

Simeticona

DC Antifoam Emulsion

0,01

0,01

0,01

Butileno glicol 1,3

Butylene Glycol 1,3

3,0

3,0

3,0

Hidroxietilcelulosa

Natrosol 250HHR

0,5

0,5

0,5

Glicerina, USP

Glycerine USP

2,0

2,0

2,0

Goma xantana

Keltrol 1000

0,2

0,2

0,2

Trietanolamina

Triethanolamine (99%)

1,2

1,2

1,2

Ácido esteárico

Pristerene 4911

3,0

3,0

3,0

Propil parabeno NF

Propylparaben NF

0,1

0,1

0,1

Gliceril hidroestearato

Naturechem GMHS

1,5

1,5

1,5

Estearil alcohol

Lanette 18 DEO

1,5

1,5

1,5

Isostearil palmitato

Protachem ISP

6,0

6,0

6,0

Octanoato alcoholes (C12 -C15 )

Hetester FAO

3,0

3,0

3,0

Dimeticona

Silicone Fluid 200 (50 cts)

1,0

1,0

1,0

Colesterol NF

Cholesterol NF

0,5

0,5

0,5

35

40

45

50

55

60

65

9

ES 2 248 100 T3 (Continuación)

5

Nombre químico completo o nombre de la CTFA

Nombre comercial

% en peso

% en peso

% en peso

Estearato de sorbitán

Sorbitan Stearate

1,0

1,0

1,0

Hidroxitolueno butilado

Embanox BHT

0,05

0,05

0,05

Acetato de tocoferilo

Vitamin E Acetate

0,1

0,1

0,1

Estearato PEG-100

Myrj 59

2,0

2,0

2,0

Estearoil lactilato de sodio

Pationic SSL

0,5

0,5

0,5

Ácido hidroxicaprílico

Hydroxycaprylic Acid

0,1

0,1

0,1

Alfa-bisabolol

Alpha-bisabolol

0,2

0,2

0,2

q. s. Hasta 100

q. s. Hasta 100

q. s. Hasta 100

10

15

20

Agua, DI

25

30

Ambas composiciones tópicas anteriores del ejemplo 5 y 6 proporcionan un tratamiento cosmético eficaz para mejorar el aspecto de la piel arrugada, envejecida, fotodañada y/o irritada, cuando se aplica sobre piel normal que se ha deteriorado por el envejecimiento o fotoenvejecimiento, o cuando se aplica sobre piel joven, para ayudar a prevenir y retrasar tales cambios de deterioro. Las composiciones también son eficaces para calmar la piel irritada, acondicionar la piel seca, aclarar el color de la piel y reducir la secreción de grasa y sebo. Las composiciones pueden ser procesadas de un modo convencional.

35

40

45

50

55

60

65

10

ES 2 248 100 T3 REIVINDICACIONES 1. Una composición tópica que comprende: 5

(a) ácido petroselínico y/o derivados del mismo; (b) un compuesto fenólico y/o mezclas del mismo; y

10

15

20

(c) un vehículo dermatológica y/o cosméticamente aceptable. 2. Una composición tópica según la reivindicación 1, en la que el compuesto fenólico se selecciona entre fenoles simples (C6 ), benzoquinonas (C6 ), ácidos fenólicos (C6 -C1 ), acetofenonas (C6 -C2 ), ácidos fenilacéticos (C6 -C2 ), ácidos hidroxicinámicos (C6 -C3 ), fenilpropenos (C6 -C3 ), cumarinas, isocumarinas (C6 -C3 ), cromonas (C6 -C3 ), naftoquinonas (C6 -C4 ), xantonas (C6 -C1 -C6 ), estilbenos (C6 -C2 -C6 ), flavonoides (C6 -C3 -C6 ), lignanos, neolignanos (C6 -C3 )2 y ligninos (C6 -C3 )n . 3. Una composición tópica según la reivindicación 1 o reivindicación 2, en la que el compuesto fenólico se selecciona entre el grupo constituido por ácidos fenólicos, flavonoides o isoflavonoides, o derivados de los mismos o mezclas de los mismos. 4. Una composición tópica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el compuesto fenólico es galato de epigalocatequina, naringenina, quercitina, catequina, daidzeína, genisteína, licetina, ácido gálico o un fenol del té verde.

25

30

35

40

45

50

5. Una composición tópica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el compuesto fenólico está presente a un nivel del 0,01 al 10% en peso de la composición. 6. Una composición tópica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición es una composición que no necesita aclarado. 7. Un procedimiento cosmético para suministrar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado entre: tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, sequedad, piel envejecida y/o fotodañada; estimulación/mantenimiento de los niveles de colágeno en la piel, estimulación/mantenimiento de los niveles de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo; comprendiendo el procedimiento la aplicación sobre la piel de una composición tópica como la reivindicada en cualquier reivindicación anterior. 8. Uso no terapéutico de una composición cosmética como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado entre tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, piel envejecida, seca y/o fotodañada; estimulación/mantenimiento de los niveles de colágeno en la piel, estimulación/mantenimiento de los niveles de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo. 9. Uso no terapéutico de ácido petroselínico y/o derivados del mismo en combinación con un compuesto fenólico y/o mezclas de los mismos en una composición tópica cosmética para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado entre tratamiento/prevención de arrugas, flacidez, piel envejecida y/o fotodañada; estimulación de la deposición de colágeno en la piel, estimulación de la producción de decorina en la piel, mejora de la reparación tisular; alivio de la piel irritada, enrojecida y/o sensible; mejora de la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclaramiento de la piel; control de la secreción de grasa/sebo.

55

60

65

11