Re p u b l i co fEc u a d o r ≠ EDI CTOFGOVERNMENT± I no r d e rt op r o mo t ep u b l i ce d u c a t i o na n dp u b l i cs a f e t y ,e q u a lj u s t i c ef o ra l l , ab e t t e ri n f o r me dc i t i z e n r y ,t h er u l eo fl a w,wo r l dt r a d ea n dwo r l dp e a c e , t h i sl e g a ld o c u me n ti sh e r e b yma d ea v a i l a b l eo nan o n c o mme r c i a lb a s i s ,a si t i st h er i g h to fa l lh u ma n st ok n o wa n ds p e a kt h el a wst h a tg o v e r nt h e m.

NTE INEN 0763 (1985) (Spanish): Carne y productos cárnicos. Determinación del arsénico

1. OBJETO

1.1 Esta norma establece el método para determinar el contenido de arsénico en carne y productos cárnicos.

2 . TERMINOLOGIA 2.1 Contenido de arsénico. ES la cantidad de arsénico, determinada bajo condiciones establecidas en la presente norma.

3. FUNDAMENTO °

3.1 Calcinar la muestra en presencia de nitrato de magnesio a 600 C. Disolver la ceniza en ácido clorhídrico diluido, adicionar zinc para generar arsénico trihidrogenado, (As H3) el cual es retenido en una solución de yodo en una celda; el color es desarrollado con solución de molibdato de amonio y sulfato de hidrazina y leído a una longitud de onda de 840 mm en la misma celda.

3.1.1 Los errores que generalmente pueden presentarse son debidos a contaminación.

4. INSTRUMENTAL 4.1 Picadora mecánica de carne. (molino). Tipo de laboratorio, provisto de una placa cribada, con orificios de diámetro no mayor a 4 mm, u otro equipo que produzca una masa homogénea. 4.2 Gradilla metálica, para 8 celdas, de 19 mm x 150 mm, que se pueda introducir en un vaso de precipitación de 600 cm 3. 4.3 Aparato de destilación kingsley-Schaffert. Consistente de un matraz Erlenmeyer de 125 cm 3, un embudo con filtro de vidrio poroso y un tubo de descarga doblado en U (ver figura 1). 4.4 Equipo de laboratorio. El equipo de vidrio no debe estar sujeto al lavado rutinario con jabón o detergente, porque es fuente de contaminación de arsénico. Cuando ocasionalmente se use jabón o detergente, deberá lavarse el equipo, con agua regia, antes de usar , y desaguarlo perfectamente bien con abundante agua; en el caso de tubo de descarga, el desaguado debe hacerse tanto interior como exteriormente, empleando un fuerte chorro de agua proveniente de una jeringuilla de vidrio sin aguja. El embudo debe enjuagarse alternativamente en cada dirección, llenándolo por el extremo de arriba y, luego, colocándolo a través de un tapón de caucho perforado, sobre un frasco de vacío para pasar agua a través del filtro de vidrio poroso. (Continúa) -1-

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FIGURA A.1 Aparato para determinar arsénico

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4.5 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg. 4.6 Crisol de Vycor, de 50 cm 3.

5. REACTIVOS 5.1 Nitrato de magnesio, Mg (NO3)2. 6H20, en cristales.

5.2 Solución (1 + 4) de ácido nítrico.

5.3 Solvente orgánico. Mezclar una parte de cloroformo o benceno, con una parte de acetona y con dos partes de alcohol absoluto. 3

3

5.4 Solución de ácido clorhídrico. Mezclar 175 cm de ácido clorhídrico y 280 cm de agua.

5.5 Solución al 150/o de yoduro de potasio. Guardar en un lugar oscuro y descartar cuando desarrolle color amarillo. 0

5.6 Solución al 40 /o de cloruro estañoso, en ácido clorhídrico (ver 5.4). Guardar en contacto con estaño metálico.

5.7 Zinc en granallas. Grado análisis. De tamaño y forma uniforme, el peso de cada granalla debe ser aproximadamente 0,5 g. 5.8 Solución de acetato de plomo. Preparar una solución acuosa saturada de acetato de plomo neutro, Pb (C 2H302)2.3H20, en un frasco cuenta gotas. Preparar solución fresca semanalmente o cuando la solución esté turbia. 5.9 Solución 0,02N de yodo. Disolver 8 g de yoduro de potasio, (Kl.) y 2,54 g de yodo en una pequeña cantidad de agua y luego diluir a un litro. Guardar en frasco color ambar.

5.10 Solución 0,001N de yodo. Diluir con agua 5 cm 3 de la solución 0,02N de yodo en 100 cm3; se debe preparar el mismo día que se va a usar. 5.11 Solución de molibdato de amonio. Disolver 7,0 g de molibdato de amonio (NH4)6 M07 024.4H20, en una mezcla caliente de 70 cm 3 de ácido sulfúrico y 300 cm 3 de agua, enfriar a temperatura ambiente y diluir a 500 cm 3 con agua. 5.12 Solución de sulfato de hidrazina.. Disolver 0,3 g de sulfato de hidrazina (N2H4.H2SO4) en agua y 3

diluir a 200 cm . (Esta sustancia debe, utilizarse con mucho cuidado ya que se considera como agente cancerígeno). (Continúa) -3-

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5.13 Solución estándar o patrón de ácido arsonílico. Disolver en agua 0,2897 g de ácido arsonílico (basado en el grado de pureza indicado en la etiqueta) y diluir a 100 cm 3 con agua. Esta solución contiene 1 mg de arsénico por centímetro cúbico.

5.14 Solución patrón de trabajo. Transferir con pipeta 1 cm 3 de la solución estándar o patrón 5,13 a matraces aforados de 100, 200 y 500 cm 3 y diluir con agua hasta la marca; obteniéndose soluciones que contengan 10; 5; y 2 µg de arsénico por centímetro cúbico, respectivamente. (ver nota 1). 5.15 Solución estándar o patrón de ácido arsenioso. Disolver 0,1320 g de oxido arsenioso, (As 03), en 50 cm 3 de agua que contiene 0,7 cm 3 de solución de hidróxido de sodio al 500/o, neutralizar con 0

3

ácido sulfúrico al 50 /o y diluir a 100 cm . Esta solución contiene 1 mg de arsénico por centímetro cúbico. 5.16 Solución patrón de trabajo. Transferir con pipeta 1 cm 3 de la solución preparada en 5.15, a 3

matraces aforados de 100, 200 y 500 cm y diluir con agua hasta la marca, obteniéndose soluciones que contienen 10, 5 y 2 µg de arsénico por centímetro cubico respectivamente. 5.17 Elaboración de la curva patrón. En un vaso de licuadora previamente pesada, se colocan 60 g de hígado libre de arsénico, 24 g de nitrato de magnesio (4g por cada 10 g de hígado), y una cantidad suficiente de la mezcla solvente de tejido, para ayudar ,a mezclar; pesar y mezclar durante un minuto (debe usarse un mezclador o licuadora a prueba de explosiones).

5.17.1 Pesar 5 alícuotas equivalentes a 10g de hígado cada una en 5 crisoles Vycor de 50 cm 3 . 5.17.2 Con una pipeta colocar en cada crisol el volumen correspondiente de la solución patrón de trabajo más apropiada, para tener escala adecuada de contenido de arsénico, como por ejemplo: 2, 4 6, 8 y 10 µg de As.

5.17.3 Cuidadosamente evaporar el exceso de solvente y agua del tejido sobre un baño de vapor a en una °

estufa a 95 C. 5.17.4 Continuar el procedimiento como se anota en el capítulo 7, párrafos 7.3 hasta 7.19. 5.17.5 Este procedimiento se realiza como mínimo tres veces, obteniéndose así por lo menos tres valores de absorbancia para cada contenido de arsénico. 5.17.6 Promediar los valores de absorbancia obtenidos para cada punto de la curva y, con dichos promedios, trazar la curva contra las correspondientes cantidades específicas de arsénico, expresadas en microgramos.

5.17.7 La curva puede también trazarse siguiendo el método de los mínimos cuadrados.

______________ NOTA 1. En lugar deI ácido arsonílico, puede usarse la de óxido arsonílico (ver 5.15).

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5.18 Algodón absorbente, libre de metal. Si existiera metal, remover por digestión deI algodón en ácido clorhídrico 0,2 N, durante varias horas, luego filtrar al vacío sobre un embudo Buchner y lavar con abundante agua redestilada hasta que el filtrado no presente reacción ácida.

6. PREPARACION DE LA MUESTRA 6.1 La preparación de la muestra, se realizará de acuerdo al Anexo A. de la Norma INEN 776.

7. PROCEDIMIENTO 7.1 La determinación debe efectuarse por duplicado sobre la misma muestra preparada. 7.2 Pesar, 10 g de muestra preparada, con aproximación al 0,1 mg (cuando la muestra sea hígado, se 3

debe licuar o moler de una sola vez) y colocarlo sobre un crisol Vycor de 50 cm . Adicionar 4 g de nitrito de magnesio (Mg (NO3)2.6H20) y mezclar usando una espátula de acero inoxidable o una varilla de vidrio, hasta que el nitrato de magnesio este disuelto. (ver nota 2). 7.2.1 Cuando se use una mezcla benceno-acetona-alcohol, como solvente de tejidos, se puede usar un mezclador a prueba de explosiones. 7.2.2 Es aconsejable realizar un ensayo preliminar a fin de calcular la cantidad de muestra que se desea tomar para que el resultado final caiga dentro de los límites de la curva patrón. 7.3 Colocar el crisol, con la muestra preparada, en la mufla fría y gradualmente ir calentándolo hasta ob°

tener una temperatura de 600 C. 7.4 Calcinar la muestra a 600°C, hasta que el carbono se haya quemado, y luego dejar enfriar la mufla hasta 100 °C y retirar el crisol con su contenido. 7.5 Humedecer las cenizas con agua y añadir 3 cm3 de la solución (1+4) de ácido nítrico, colocar nueva°

°

mente el crisol y su contenido en la mufla a 100 C y calentar gradualmente hasta 600 C, manteniéndolo a esta temperatura por un tiempo aproximado de una hora, hasta que los vapores nitrosos hayan desaparecido (Si es necesario, repetir el tratamiento con ácido nítrico, para obtener cenizas blancas). 3

7.6 Retirar el crisol de la mufla, dejar enfriar, humedecerlo con agua y disolver en 10 cm de ácido clorhídrico diluido, proveniente de una jeringa hipodérmica de vidrio sin aguja.

_______________ NOTA 2. Se adiciona al crisol 4 g de nitrato de magnesio por cada 10 g de muestra.

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7.7 Transferir la solución al matraz Erlenmeyer de 125 cm del aparato destilador (ver figura 1), con ayuda de dos porciones' de 10 cm 3 de ácido clorhídrico diluido y luego lavar las paredes del matraz con cuatro 3

porciones de 10 cm cada una, de ácido clorhídrico diluido. 7.7.1 Se debe usar volúmenes iguales de líquido para cada muestra, ya que el volumen de aire sobre el líquido afecta la eficiencia de destilación del hidrógeno y del arsénico trihidrogenado (AsH3). 3

0

7.8 Dejar enfriar a temperatura ambiente y añadir 2 cm de solución al 15 /o de yoduro de potasio, mezclando completamente el contenido del matraz con movimientos rotatorios. 7.9 añadir 1 cm 3 de solución al 400/o de cloruro estañoso, mezclar con movimientos rotatorios y dejar en reposo por un tiempo no inferior a 15 min ni superior a 30 min. 7.10 Colocar 7 cm 3 de la solución 0,001 N de yodo en una celda. 7.11 Colocar una pequeña bola de algodón absorbente sobre el filtro de vidrio poroso del embudo y humedecer con la solución saturada de acetato de plomo. 7.12 Lubricar la unión esmerilada con agua y empalmar firmemente el tubo de salida al embudo. Esta unión debe ser lo suficientemente firme, como para soportar el peso del embudo, el matraz y su contenido, y no dificultar el posterior desarme del aparato destilador. 7.12.1 El material de vidrio no debe secarse mediante calor antes de usarse. Igualmente , no usar empaques ni tubos de teflón. 7.13 El vaso de precipitación de 600 cm 3, conteniendo en su interior la gradilla para las celdas, llenar con hielo finamente triturado, el cual debe distribuirse en capas entre los niveles de la gradilla; luego, agregar agua muy fría, de modo que ocupe aproximadamente 2/3 de la altura total del vaso y colocar la celda en la gradilla, perforando el hielo, si fuese necesario, para introducir la celda. 7.14 Lubricar con agua la unión esmerilada inferior del embudo, agregar aproximadamente 12,5 g de zinc en el matraz Erlenmeyer, unir firmemente al embudo, colocar el tubo de descarga en la celda tan pronto como sea posible y dejar destilar en forma continua durante una hora, sin adicionar calor. 7.15 Retirar de la celda cuidadosa y lentamente el tubo de descarga, dejando que el líquido drene mientras que el tubo es retirado; agregar 0,5 cm 3 de la solución de molibdato de amonio y mezclar completamente el contenido. 3

7.16 agregar 0,3 cm de la solución de sulfato de hidrazina, mezclar completamente y colocar durante 10 min la gradilla con la celda en un baño de vapor moderado ó de agua hirviendo moderadamente. 7.17 Retirar la celda del baño, secar con un material suave, que no deje pelusa y colocar en un lugar frío y oscuro durante una hora, para asegurar que la solución alcance cierta temperatura y un completo desarrollo del color. (Co ntinúa) -6-

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7.18 Leer la absorbancia en el espectrofotómetro o en un calorímetro, precalibrados a una longitud de onda de 840 mm, contra agua libre de anhídrido carbónico. 7.19 Realizar un ensayo en blanco con los reactivos y realizar una determinación con la muestra patrón preparada según se indica en el numeral 5.17.

7.20 Con el resultado del blanco efectuar la corrección de la absorbancia leída para la muestra.

8. CALCULOS 8.1 Con la absorbancia leída en el numeral 7.18 y la curva patrón, se encuentra el contenido de arsénico en microgramos en la cantidad de muestra empleada. Para expresar el resultado en miligramos de As por kg de muestra empleada se aplica la ecuación siguiente:

9. ERRORES DE METODO 9.1 La diferencia entre los resultados de dos determinaciones realizadas simultáneamente o en rápida sucesión por el mismo analista, no debería ser mayor del 100/o del valor medio. 9.2 El resultado final será la media aritmética de las dos determinaciones,, siempre que el requisito de repetibilidad se haya cumplido. 10. INFORME DE RESULTADOS 10.1 Como resultado final, debe reportarse el método usado y el resultado obtenido en cada determinación o serie de determinaciones, así como la media aritmética de las determinaciones. 10.2 En el informe de resultados debe mencionarse, además, cualquier condición como opcional, así como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado. 10.3 Deben incluirse todos los detalles para la completa identificación de la muestra.

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APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR INEN 776. Carne y productos cárnicos. Muestreo.

Z.2 BASES DE ESTUDIO Norma Centroamericana ICAITI 34125 h 15. Carne y productos cárnicos. Determinación del contenido de arsénico. Instituto Centroamericano de Investigación y Tecnología Industrial. Guatemala, 1978.

Methods of analysis of the association of Official analytical Chemists. 25 metals and other elements as residues in foods. Arsenic. Washington, DC 20044,1975. Norma sanitaria de alimentos OFSANPAN-IALUTZ A 015. Norma Técnica de métodos físicos y químicos para determinación de metales. Arsénico. OPS/OMS. Oficina Sanitaria Panamericana. Washington, 1968.

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INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA Documento: NTE INEN 763

TITULO: CARNE Y PRODUCTOS CARNICOS. DETERMINACION DEL ESTADO

ORIGINAL: Fecha de iniciación del estudio:

Código: AL 03.02-325

REVISIÓN: Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo Oficiali zación con el Carácter de por Acuerdo No. de publicado en el Registro Oficial No,

de

Fecha de iniciación del estudio: Fechas de consulta pública: de a La Dirección General, atendiendo a la necesidad de contar con normas que regulen la calidad de la carne y productos cárnicos dispuso la elaboración de esta norma. Por tratarse de la homologación de una norma internacional de métodos de ensayo el proyecto no fue sometido a consulta pública ni discutido por el Subcomité Técnico, Subcomité Técnico: Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: Integrantes del Subcomité Técnico: NOMBRES:

INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Otros trámites: El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1985-04-19 Oficializada corto: OPCIONAL Registro Oficial No. 265 de 1985-09-05

Por Acuerdo Ministerial No, 571 de 1985-07-31

Instituto E cuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre C asilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815 Dirección G eneral: E-Mail:furresta @ inen.gov.ec Área Técnica de Normalización: E-Mail:normalizacion @ inen.gov.ec Área Técnica de C ertificación: E-Mail:certificacion @ inen.gov.ec Área Técnica de Verificación: E-Mail:verificacion@ inen.gov.ec Área Técnica de Servicios Tecnológicos: E-Mail:inencati @ inen.gov.ec Regional Guayas: E-Mail:inenguayas @ inen.gov.ec Regional Azuay: E-Mail:inencuenca @ inen.gov.ec Regional Chimborazo: E-Mail:inenriobamba @ inen.gov.ec URL:www.inen.gov.ec