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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 204 187

51 Int. Cl. : A61K 9/10

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A61K 47/00 A61K 47/26 A61K 47/12 A61K 47/44 A61K 47/10

ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud: 99968164 .6

86 Fecha de presentación: 20.12.1999

87 Número de presentación de la solicitud: 1140018

87 Fecha de publicación de la solicitud: 10.10.2001

54 Título: Suspensiones poliol/aceite para la liberación sostenida de proteínas.

30 Prioridad: 23.12.1998 US 221181

23.11.1999 US 448205

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

16.04.2004

73 Titular/es: Amgen Inc.

One Amgen Center Drive Thousand Oaks, California 91320-1799, US

72 Inventor/es: Goldenberg, Merrill, Seymour;

Shan, Daxian y Beekman, Alice C.

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Tavira Montes-Jovellar, Antonio

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16.04.2004

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 204 187 T3 DESCRIPCIÓN Suspensiones poliol/aceite para la liberación sostenida de proteínas. 5

Campo de la invención La presente invención se refiere a la preparación de suspensiones de aceite espesado/polialcohol que contienen un agente biológicamente activo, para el suministro sostenido del agente biológicamente activo.

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Antecedentes de la invención Debido a los recientes avances en las tecnologías de ingeniería genética y celular, proteínas que se sabe que exhiben distintas acciones farmacológicas in vivo son capaces de ser producidas en grandes cantidades para aplicaciones farmacéuticas. Tales proteínas farmacéuticas incluyen eritropoyetina (EPO), nueva proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP), factor estimulante de la colonia de granulocitos (G-CSF), interferones (alfa, beta, gamma, consensus), proteína que se liga al factor de necrosis tumoral (TNFbp), antagonista del receptor de interleuquina-1 (IL-1ra), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), factor de crecimiento de queratinocitos (FGF), factor de las células madre (SCF), factor de diferenciación del crecimiento de megacariocitos (MGDF), osteoprotegerina (OPG), factor neurotrófico derivado de línea celular glial (GDNF), somatotrofinas y proteína de la obesidad (proteína OB). La proteína OB se puede denominar aquí también leptina. Muchas enfermedades o estados tratados con proteínas farmacéuticas requieren concentraciones de proteína sostenidas para conseguir el más efectivo resultado terapéutico. Sin embargo, como con la mayoría de los productos farmacéuticos de proteínas la generalmente corta semivida biológica requiere una administración frecuente. Estas inyecciones repetidas se administran a diferentes intervalos lo que da como resultado concentraciones de medicación fluctuantes con un significativo inconveniente físico y económico para los pacientes. Dado que muchos estados responden mejor a concentraciones controladas de un producto farmacéutico, existe una necesidad de un desprendimiento controlado de un medicamento para proporcionar períodos más largos de desprendimiento consistente. Tales medicamentos de desprendimiento sostenido proporcionarían un medio de controlar las concentraciones en sangre del ingrediente activo, proporcionado de este modo al paciente efectos profilácticos, terapéuticos o de diagnóstico mejorados, además de mayor seguridad, conveniencia para el paciente y aceptación del paciente. También tales composiciones de desprendimiento sostenido pueden conducir al ahorro de dosis y de este modo rebajar el coste de la producción de proteína. Desgraciadamente, la inestabilidad de la mayoría de las proteínas (por ejemplo, desnaturalización y pérdida de la bioactividad al exponerlas al calor, disolventes orgánicos, etc.) ha limitado enormemente el desarrollo y evaluación de formulaciones de desprendimiento sostenido. Los intentos de desarrollar formulaciones de desprendimiento sostenido han incluido el uso de varias micropartículas de polímero biodegradable y no biodegradable (por ejemplo, poli(láctido-co-glicólico) que contienen el ingrediente activo (véase, por ejemplo, Wise et al., Contraception, 8, 227-234 (1973); y Hutchinson et al., Biochem. Soc. Trans., 13: 520-523 (1985), y se conocen varias técnicas por las que agentes activos, por ejemplo, proteínas, se pueden incorporar en microesferas poliméricas (véase, por ejemplo, patente de EE.UU. No. 4.675.189 y las referencias citadas en ella). Desgraciadamente, algunos de los dispositivos de desprendimiento sostenido que utilizan micropartículas todavía sufren tales cosas como: baja eficiencia de atrapamiento; formación de agregación del agente activo; altos picos iniciales de agente activo con mínimo desprendimiento a continuación; y desprendimiento incompleto del agente activo. También se han investigado otros dispositivos poliméricos cargados de fármaco para el tratamiento terapéutico de larga duración de varias enfermedades, estando dirigida de nuevo mucha atención a polímeros derivados de ácidos alfahidroxicarboxílicos, especialmente ácido láctico tanto en forma de su racémico como en forma ópticamente activa, y ácido glicólico, y sus copolímeros. Estos polímeros están disponibles comercialmente y han sido utilizados en sistemas aprobados por la FDA, por ejemplo, el Lupron DepotTM , que consiste en micropartículas inyectables que desprenden acetato de leuprolida durante alrededor de 30 días para el tratamiento de cáncer de próstata. Varios problemas identificados con el uso de tales polímeros incluyen: la incapacidad de ciertas moléculas de difundirse a través de la matriz; el deterioro y descomposición del fármaco (por ejemplo, desnaturalización causada por el uso de disolventes orgánicos); la irritación para el organismo (por ejemplo, efectos secundarios debidos al uso de disolventes orgánicos); la baja biodegradabilidad (tal como la que ocurre con la policondensación de un polímero con un alcohol multifuncional o ácido carboxílico multifuncional, es decir, pomadas); y las bajas velocidades de degradación.

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Se han descrito varias formulaciones basadas en aceite. Welch en la patente de EE.UU. No. 2.491.537 describe el uso de suspensiones de aceite (aceite vegetal gelificado) para proporcionar un desprendimiento durante 24 horas de penicilina. Buckwalter en la patente de EE.UU. No. 2.507.193 describe un desprendimiento en conejos hasta de 11 once días usando procaína penicilina suspendida en aceite de cacahuete gelificado con 5% de monoestearato de aluminio (AIMS). Anschel en la patente de EE.UU: No. 2.964.448 describe suspensiones de relaxina en un aceite vegetal gelificado con AIMS. Anschel cita 4-7 días de relajación y describe un efecto más largo (hasta de 23 días) tratando térmicamente la suspensión que contiene AIMS. Yamahira et al. en la patente de EE.UU. No. 4.855.134 describe preparaciones de desprendimiento sostenido de yodometacina o interferón mezclados con un vehículo bio2

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degradable farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, gelatina. Mitchell en el documento U.S. 5.411.951 describe composiciones en las que somatotropina asociada a un metal está presente en un aceite biocompatible y se demuestra que las composiciones se pueden administrar parenteralmente para el desprendimiento prolongado de somatotropina en animales. Ferguson et al. en el documento U.S. 4.977.140 describe formulaciones de desprendimiento sostenido que comprenden somatotropina bovina, una cera, y un aceite. Reichert et al. en el documento WO 96/18417 describe composiciones farmacéuticas que comprenden mezclas de G-CSF cristalino y aceites vegetales.

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También ha habido varias publicaciones que discuten los esfuerzos para desarrollar sistemas de suministro de fármacos que utilizan proteínas que son propensas a la agregación. Por ejemplo, Grodsky et al., patente de EE.UU. No. 4.371.523, describe el uso de agentes anti-agregación, por ejemplo, ácido glutámico y/o ácido aspártico, para desarrollar formulaciones de insulina. Blackshear et al., patente de EE.UU. 4.493.181, describe la mezcla de glicerina u otro polialcohol con una disolución de hormona-proteína acuosa previamente a la introducción de la disolución en el sistema de suministro de fármaco. Wigness et al., Publicación PCT WO 85/02118 describe el uso de glicerina para prevenir la precipitación de las proteínas dentro de los sistemas de suministro de fármaco; y Azain et al., Publicación EP 0 374 120 A2 describe composiciones estables de somatotropina que utilizan, entre otros, un polialcohol estabilizante.

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A pesar de los avances realizados en los procedimientos descritos anteriormente, todavía hay una necesidad de desarrollar formulaciones farmacéuticas que consigan un medio más versátil y efectivo de desprendimiento sostenido para aplicaciones clínicas. Numerosas proteínas recombinantes o naturales se podrían beneficiar del desprendimiento constante durante largo plazo y proporcionar con ello resultados clínicos más efectivos.

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El G-CSF recombinante humano estimula selectivamente a los neutrófilos, un tipo de célula blanca sanguínea usada para luchar contra la infección. Actualmente, Filgrastim®, un G-CSF recombinante, está disponible para uso terapéutico. La estructura del G-CSF en varias condiciones ha sido estudiada extensamente; Lu et al., J. Biol. Chem. vol. 267, 8770-8777 (1992).

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El G-CSF es lábil y muy susceptible a los factores del medio tales como temperatura, humedad, oxígeno y rayos ultravioleta. Y, debido a sus características hidrófobas, el G-CSF es difícil de formular debido a la formación de dímeros y agregados de orden más alto (macro rango) durante el almacenamiento de largo plazo. Se ha mostrado que el G-CSF es muy propenso a la agregación, especialmente a pH neutro, temperaturas y sal elevadas (es decir, condiciones de suero fisiológico). Esta inestabilidad convierte en muy problemático el desprendimiento sostenido (de un período de una semana o mayor) por sistemas de suministro convencional, y de hecho, tales sistemas generalmente proporcionan solo unos pocos días de desprendimiento como mucho. Es un objetivo de la presente invención producir una preparación que contiene G-CSF que proporcionaría el desprendimiento sostenido de G-CSF. La producción de tales preparaciones se consigue usando suspensiones glicerina/aceite que contienen G-CSF, y, importantemente, las composiciones farmacéuticas que usan estas suspensiones de G-CSF/glicerina/aceite son capaces de proporcionar biodisponibilidad incrementada, protección de la proteína, degradación disminuida y desprendimiento lento con estabilidad y potencia de la proteína aumentadas. Importantemente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención proporcionan un medio simple, rápido y barato de controlar el desprendimiento controlado de proteína recombinante para resultados profilácticos, terapéuticos o de diagnóstico efectivos. Sumario de la invención

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La presente invención se refiere de este modo a la preparación de una suspensión estabilizada inyectable de desprendimiento prolongado que contiene un agente biológicamente activo. La presente invención se basa en la observación de que el polvo de G-CSF se estabiliza cuando se suspende en glicerina y permanece estabilizado cuando la suspensión se suspende adicionalmente en un aceite espesado tal como aceite de sésamo que contiene un bajo porcentaje de monoestearato de aluminio, o cera, proporcionando de este modo una preparación estabilizada inyectable de desprendimiento prolongado. Importantemente, los métodos descritos aquí son ampliamente aplicables a otras proteínas (o sus análogos), además de al G-CSF. En una realización, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad efectiva de un agente biológicamente activo (BAA) incorporado en una suspensión de polialcohol/aceite espesado, a dicho agente biológicamente activo en forma de un polvo o de disolución acuosa, y a dicha suspensión capaz de proporcionar el desprendimiento sostenido del agente biológicamente activo. En otra realización, la presente invención se refiere a un método para la administración parenteral de una suspensión de BAA/glicerina/aceite a un animal de sangre caliente, en el que dicha suspensión se administra subcutáneamente, o intramuscularmente y el agente biológicamente activo se desprende de la suspensión a una velocidad controlada durante una semana o más. La presente invención se refiere adicionalmente a procedimientos para preparar composiciones farmacéuticas inyectables de desprendimiento sostenido de BAA/polialcohol/aceite como anteriormente. La realización principal comprende: (a) suspender un BAA en un polialcohol para formar una suspensión de BAA/polialcohol; y (b) suspender dicha suspensión de BAA/polialcohol en una mezcla que comprende un aceite espesado, o cera, para formar una suspensión de BAA/polialcohol/aceite. 3

ES 2 204 187 T3 La presente invención se refiere adicionalmente a una jeringuilla cargada que comprende dicha formulación. La presente invención se refiere también a métodos de tratamiento de individuos usando las preparaciones estabilizadas inyectables de desprendimiento prolongado descritas aquí. 5

Según un aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un agente biológicamente activo (BAA) incorporado en una suspensión biocompatible de polialcohol/aceite, en el que dicha suspensión contiene un espesante, y en el que dicho agente biológicamente activo es una proteína. 10

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Según otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento para preparar composiciones farmacéuticas de suspensiones de desprendimiento sostenido de BAA/polialcohol/aceite que comprende (a) suspender un BAA en un polialcohol para formar una mezcla BAA/polialcohol; (b) suspender dicha mezcla BAA/polialcohol en una mezcla que comprende un aceite espesado para formar una suspensión de BAA/polialcohol/aceite, en el que dicho agente biológicamente activo es una proteína.

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Proporcionada también por la presente invención está una composición de la invención para su uso en una aplicación de profilaxis, terapéutica o de diagnóstico, una jeringuilla cargada que contiene una composición farmacéutica de la invención, y el uso de una composición de la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o mejora de un estado tratable por dicho agente biológicamente activo. Descripción detallada de la invención Tal como se usan aquí, los siguientes térmicos tendrán el siguiente significado:

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Se define que “Biodegradable” significa que el vehículo polialcohol/aceite se erosionará o degradará o absorberá o metabolizará in vivo para formar componentes más pequeños no tóxicos. 30

Se define que “Biocompatible” significa que el aceite y sus espesantes y otros excipientes no tendrán efecto adverso intolerable sobre el polipéptido, o el ser humano tratado. Se define que “Administración parenteral” significa cualquier ruta de administración distinta del canal alimentario, que incluye, por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intratecal, intraorbital, intraarticular, pulmonar, nasal, rectal y óptica.

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Tal como se usa aquí, los agentes biológicamente activos se refieren a proteínas recombinantes o naturales, humanas o animales, útiles para la aplicación profiláctica, terapéutica o de diagnóstico. El agente biológicamente activo puede ser natural, sintético, semisintético o sus derivados. Además, los agentes biológicamente activos de la presente invención se pueden PEGilar o conjugar con aductos solubles en agua tales como carbohidratos, por ejemplo, dextran. Se contemplan una amplia variedad de agentes biológicamente activos. Estos incluyen pero no están limitados a hormonas, citoquinas, factores hematopoyéticos, factores de crecimiento, factores antibobesidad, factores tróficos, factores anti-inflamatorios, y enzimas (véase también la patente de EE.UU. No. 4.695.463 para ejemplos adicionales de agentes biológicamente activos útiles). Un experto en la técnica será capaz rápidamente de adaptar un agente biológicamente activo deseado a las composiciones de la presente invención que pueden incluir también pequeños compuestos orgánicos u organometálicos. Tales proteínas incluirían pero no están limitadas a factores estimulantes de colonias de granulocitos (G-CSF’s) (véase las patentes de EE.UU. Nos. 4.810.643, 4.999.291, 5.581.476, 5.582.823, y Publicación PCT No. 94/17185), interferones (véase, patentes de EE:UU. Nos. 5.372.808, 5.541.293, 4,897,471, y 4.695.623), interleuquinas (véase, patente de EE.UU. No. 5.075.222), eritropoyetinas (véase, patentes de EE.UU. Nos. 4.703.008, 5.441.868, 5.618.698, 5.547.933, y 5.621.080), factor de células madre (Publicaciones PCT Nos. 91/05795, 92/17505 y 95/17206), osteoprotegerina (Publicación PCT No. 97/23614), nueva proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP) (Publicación PCT No. 94/09257) y leptina (proteína OB). Se proporciona a continuación un ejemplo de trabajo que usa G-CSF, que, como se describe anteriormente, es una proteína terapéutica usada para tratar trastornos hematopoyéticos. En general, el G-CSF útil en la práctica de esta invención puede ser una forma aislada de organismos mamíferos o, alternativamente, un producto de procedimientos de síntesis química o de expresión de hospedante procariota o eucariota de secuencias de ADN exógeno obtenido por genómica o clonación de cADN o por síntesis de ADN. Los hospedantes procarioticos apropiados incluyen varias bacterias (por ejemplo, E. coli); los hospedantes eucarioticos apropiados incluyen levaduras (por ejemplo, S. cerevisiae) y células de mamíferos (por ejemplo, células de ovario de hámster chino, células de mono). Dependiendo del hospedante empleado, el producto de expresión G-CSF se puede glicosilar con carbohidratos de mamífero u de otros eucariotas, o puede ser sin glicosilar. El producto de expresión G-CSF puede incluir también un resto de aminoácido metionina inicial (en la posición 1). La presente invención contempla el uso de cualquiera de todas las formas de GCSF, aunque se prefiere el G-CSF recombinante, especialmente derivado de E. coli, para, entre otras cosas, mayor practicabilidad comercial.

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Se ha publicado que ciertos análogos de G-CSF son biológicamente funcionales, y estos pueden también ser modificados químicamente, por ejemplo, por la adición de una o más moléculas de polietilenglicol. Los análogos de G-CSF se publican en la patente de EE.UU: No. 4.810.643. Los ejemplos de otros análogos de G-CSF que se ha publicado que tienen actividad biológica son aquellos descritos en los documentos AU-A-76380/91, EP 0 459 630, EP 0 272 703, EP 0 473 268 y EP 0 335 423, aunque no se hace ninguna representación con respecto a la actividad de cada análogo supuestamente descrito. Véase también los documentos AU-A-10948/92, PCT 94/00913 y EP 0 243 153. Por supuesto, si uno así lo desea cuando se trata a mamíferos no humanos, uno puede usar G-CFS’s no humanos recombinantes, tal como recombinante murino, bovino, canino, etc. Véase PCT WO 9105798 y PCT 8910932, por ejemplo.

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El tipo de G-CSF usado para las presentes preparaciones se puede seleccionar de los descritos en la Publicación PCT No. 94/17185, como se cita anteriormente. La secuencia de 174 aminoácidos para el metionil-G-CSF humano maduro se presenta aquí como SEQ ID NO:1, en la que el primer aminoácido de la proteína madura es treonina (T) (en la posición 1) y un resto metionilo está situado en la posición -1 (no incluido en la secuencia a continuación). 15

SEQ ID NO: 1

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Sin embargo, como con cualquiera de los presentes restos de G-CSF, el resto metionilo en la posición -1 puede estar ausente. 40

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También están incluidas las proteínas tal como se describen anteriormente con substituciones de aminoácido que son “conservativas” según la acidez, carga, hidrofobicidad, polaridad, tamaño o cualquier otra característica conocida por los expertos en la técnica. Estas se describen en la Tabla 1, a continuación. Véase generalmente, Creighton, Proteins, passim (W.H. Freeman and Company, N.Y., 1984); Ford et al., Protein Expression and Purification 2:95-107 (1991). TABLA 1 Substituciones de aminoácido conservativas

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Básica:

arginina lisina histidina

Acida:

ácido glutámico ácido aspártico

Polar:

glutamina asparagina

Hidrófoba

leucina isoleucina valina

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ES 2 204 187 T3 TABLA 1 (continuación) Aromática:

fenilalanina triftófano tirosina

Pequeña:

glicina alanina serina treonina metionina

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Además, los agentes biológicamente activos pueden incluir también pero no están limitados a insulina, gastrina, prolactina, hormona adrenocorticotrópica (ACTH), hormona estimulante del tiroides (TSH), hormona luteinizante (LH), hormona estimulante del folículo (FSH), gonatropina coriónica humana (HCG), motilina, interferones (alfa, beta, gamma), interleuquinas (de IL-1 a IL-12), factor de necrosis tumoral (TNF), proteína que se liga al factor de necrosis tumoral (TNF-bp), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), factor neurotrófico derivado del glial (GDNF), factor neurotrófico 3 (NT3), factores de crecimiento de fibroblastos (FGF), factor de crecimiento neurotrófico (NGF), factores de crecimiento del tipo insulina (IGFs), factor estimulante de la colonia de macrófagos (M-CSF), factor estimulante de la colonia granulocito macrófago (GM-CSF), factor de crecimiento derivado de megacariocitos (MGDF), factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), trombopoyetina, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PGDF), factores de crecimiento que estimulan las colonias (CSFs), proteína morfogénica ósea (BMP), superóxido dismutasa (SOD), activador de plasminógeno tisular (TPA), uroquinasa, somatotropinas, estreptoquinasa y calicreína. El término proteínas, tal como se usa aquí, incluye péptidos, polipéptidos, moléculas de consenso, análogos, derivados o sus combinaciones. El BAA usado para preparar las composiciones de desprendimiento sostenido de la presente invención puede estar en disolución o en forma de polvo y se mezcla primero con un polialcohol, por ejemplo, glicerina. El BAA puede estar en la forma de un polvo en glicerina o disuelto o suspendido en una disolución acuosa de glicerina. El polialcohol se añade en una cantidad suficiente para estabilizar (por ejemplo, prevenir la agregación) el BAA durante el almacenamiento de largo plazo del BAA en la suspensión. Otros polialcoholes de C-4 a C-19 contemplados para su uso aquí incluyen pero no están limitados a, C-4: eritritol; C-5: arabinosa, xilosa, ribosa; C-6: inositol, fructosa, galactosa, glucosa, manosa; C-12: maltosa y sacarosa: Si el polialcohol usado está en forma de sólido, se preparará primero en forma de una disolución acuosa u orgánica o fluidizado por medio de calor o presión, y se mezclará con el BAA. La concentración de polialcohol usado puede variar preferentemente de 5%-90%, más preferentemente de 10%-50%, y lo más preferentemente de 10%-30% en peso. En una realización preferida en la que el G-CSF es el agente biológicamente activo preferido y la glicerina es el polialcohol, se usa glicerina acuosa al 20%. En otras realizaciones preferidas, en las que está presente poco o nada agua, el 20% de glicerina es con respecto al volumen total de la formulación. Los aceites usados en la presente invención son biocompatibles, de baja acidez y esencialmente libres de ranciedad. Tales aceites se seleccionan del grupo que consiste en, por ejemplo, semilla de sésamo, canola, azafrán, ricino, semilla de algodón, oliva, cacahuete, semilla de girasol, oleato de etilo, vitamina E que incluye α-tocoferol y sus derivados, y Migliol 812. Las suspensiones de glicerina/aceite contendrán también un “espesante” o “agente gelificante” que sirve para retrasar la hidratación de la suspensión, dar al cuerpo del aceite mayor viscosidad o viscoelasticidad, y con ello disminuir la velocidad de desprendimiento del BAA de la suspensión después de la administración y también incrementa la estabilización del BAA, e incrementar la estabilidad física de la suspensión como un todo (es decir, evitar la separación de fases). Tales agentes incluyen sales de metal polivalente de ácidos orgánicos, por ejemplo, sales de aluminio, cinc, magnesio o calcio de ácido láurico, ácido palmítico, ácido esteárico y similares, y materiales oleaginosos tales como ceras y aceites de alta viscosidad y cargas orgánicas o inorgánicas tales como polímeros y sales. El monoestearato y diestearato de aluminio y la cera blanca son agentes particularmente preferidos. Dichos agentes están usualmente presentes a concentraciones (basadas en el peso de aceite) entre alrededor de 0,1% y alrededor de 99%, más típicamente entre alrededor de 0,5% y alrededor de 90% y para sales de metal incluso más típicamente de 0,5% a 20%. Esta relación es importante para los propósitos de asegurar que el agente no incrementa la viscosidad de la suspensión hasta el punto en el que la suspensión ya no es útil para inyección por medio de una jeringuilla. Para formulaciones altamente viscosas también se contemplan los implantes. Las suspensiones de glicerina/aceite pueden comprender adicionalmente agentes tensioactivos o emulsionantes para estabilizar la suspensión de glicerina/aceite y evitar que se separe. Este agente tensioactivo o emulsionante puede ser iónico o no iónico y se puede seleccionar del grupo que consiste en, por ejemplo, Span 40, Span 80, Pluronics®, y lecitina de huevo, o sus mezclas, preferentemente con un HLB (balance hidrófilo-lipófilo) de 1-10, más preferentemente 2-8, e incluso más preferentemente 4-8. El tensioactivo puede también ayudar a disipar el aceite en el medio 6

ES 2 204 187 T3 biológico. El tensioactivo está usualmente presente de 0,1% a 50%, preferentemente de 0,2% a 20%, y más preferentemente de 0,5% a 10% en peso de aceite. Ciertos materiales, tales como aceite vegetal hidrogenado pueden funcionar como espesante tanto como estabilizante de la suspensión de glicerina. 5

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Las suspensiones de BAA/glicerina/aceite de la presente invención se pueden preparar suspendiendo un agente biológicamente activo (en forma de polvo) en disolución de glicerina sustancialmente pura para formar una suspensión de BAA/glicerina, y a continuación suspendiendo dicha suspensión de BAA/glicerina en una disolución que comprende solo aceite o aceite que contiene un “agente gelificante” suspendido o disuelto en el aceite. El aceite (que contiene agente gelificante) puede que primero necesite ser calentado (con agitación) para asegurar que el agente gelificante se disuelve completamente en el aceite. La formulación de BAA puede ser preparada también disolviendo o suspendiendo el BAA en disolución acuosa de glicerina (que contiene preferentemente un tensioactivo) y mezclando la disolución en un aceite (que contiene preferentemente un tensioactivo), y en la que la glicerina acuosa está preferentemente tamponada a un pH estable (por ejemplo, ácido para el G-CSF). La fase acuosa preferentemente contiene de moderado a alto HLB y la fase aceitosa preferentemente contiene un tensioactivo de bajo HLB. En la presente invención, de moderado a alto HLB es mayor de alrededor de 8, y bajo HLB es más bajo de alrededor de 8. En general, abarcadas por la invención están las composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades efectivas de agente biológicamente activo, o productos derivados (por ejemplo, precipitados), junto con diluyentes farmacéuticamente aceptables, conservantes, solubilizantes, emulsionantes, antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico y Vitamina E), adyuvantes y/o vehículos necesarios para la administración. (Véase el documento PCT 97/01331 incorporado aquí como referencia). La formulación farmacéutica óptima para un agente biológicamente activo deseado será determinada por un experto en la técnica dependiendo de la ruta de administración, dosificación deseada y duración del desprendimiento. Las composiciones farmacéuticas ejemplares se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., 18th Ed., Easton, PA, pag. 1435-1712 (1990)). Las composiciones farmacéuticas de la presente invención son particularmente atractivas para la administración parenteral, por ejemplo, por inyección intramuscularmente, subcutáneamente, o intraperitonealmente. Los usos terapéuticos de las composiciones de la presente invención dependen del agente biológicamente activo usado. Un experto en la técnica será rápidamente capaz de adaptar un agente biológicamente activo deseado a la presente invención para sus usos terapéuticos deseados. Los usos terapéuticos para tales agentes se describen con mayor detalle en las siguientes publicaciones incorporadas aquí como referencia incluyendo los dibujos. Los usos terapéuticos incluyen, pero no están limitados a, usos para proteínas como los factores estimulantes de la colonia de granulocitos (véase, patentes de EE.UU. Nos. 4.999.291, 5.581.476, 5.582.823, 4.810.643 y publicación PCT No 94/17185), interferones (véase, patentes de EE.UU. Nos. 5.372.808, 5.541.293), interleuquinas (véase, patente de EE.UU. No. 5.075.222), eritropoyetinas (véase, patentes de EE.UU. Nos. 4.703.008, 5.441.868, 5.618.698, 5.547.933, y 5.621.080I), factor de células madre (publicaciones PCT Nos. 91/05795, 92/17505 y 95/17206), proteína OB (véase, publicaciones PCT Nos. 96/40912, 96/05309, 97/00128, 97/01010 y 97/06916), nueva proteína estimulante de la eritropoyesis (publicación PCT No. 94/09257), y fármacos de molécula pequeña. Además, las presentes composiciones se pueden usar también para la fabricación de uno o más medicamentos para el tratamiento o mejora de los estados que se desea que trate el agente biológicamente activo. Como específicamente se refiere al G-CSF, se ha mostrado que el agente terapéutico es efectivo para tratar la enfermedad inflamatoria del intestino. Por ejemplo, se ha publicado que un niño adolescente con enfermedad de Crohn y fístulas enterocutáneas tuvo una respuesta al tratamiento con G-CSF (filgastrin) después de que fallaran todos los tratamientos estándar; Vaughn and Drumm, New England Journal of Medicine, 340(3): 239-240 (1999). También se ha publicado que la terapia prolongada de altas dosis con G-CSF puede tener efectos anti-inflamatorios en la colitis; Hommes et al., Clin Exp. Immunol., 106: 529-533 (1996). De este modo se prevé que las suspensiones que contienen G-CSF serán también efectivas en el tratamiento de enfermedades inflamatorias del intestino.

50

55

60

65

Un experto en la técnica será capaz de asegurar las dosificaciones efectivas por la administración y observación del efecto terapéutico deseado. Preferentemente, para G-CSF, la formulación de la suspensión será tal que entre alrededor de 0,01 µg de resto de G-CSF/kg de peso corporal/día y 10 mg de resto de G-CSF/kg de peso corporal/día producirán el deseado efecto terapéutico. Las dosificaciones efectivas deseadas se pueden determinar usando herramientas de diagnóstico durante un tiempo. Por ejemplo, se puede usar primero un diagnóstico para medir la cantidad de G-CSF en sangre (o plasma o suero) para determinar las concentraciones endógenas de la proteína G-CSF. Tal herramienta de diagnóstico puede ser en la forma de un ensayo de anticuerpos, tal como un ensayo de sándwich de anticuerpo. La cantidad de proteína G-CSF endógena se cuantifica inicialmente, y se determina una línea base. Las dosificaciones terapéuticas se determinan a medida que la cuantificación de resto de proteína G-CSF endógeno y exógeno (es decir, proteína, análogo o derivado encontrado en el cuerpo, producido por él o administrado) continua durante el transcurso de la terapia. Las dosificaciones, por lo tanto, pueden variar durante el transcurso de la terapia, por ejemplo, siendo usada inicialmente una dosificación relativamente alta, hasta que se ve beneficio terapéutico, y dosificaciones más bajas usadas para mantener los beneficios terapéuticos. Alternativamente, las concentraciones de neutrófilos se determinan y controlan durante el transcurso de la terapia. La dosificación se ajusta para mantener el nivel requerido de cuentas de neutrófilos con la más baja frecuencia de inyecciones. Se ofrecen los siguientes ejemplos para ilustrar más completamente la invención, pero no se debe considerar que limitan su alcance. 7

ES 2 204 187 T3 Ejemplo 1 Este ejemplo describe la preparación de polvo de G-CSF por secado por pulverización. 5

10

15

Una disolución de G-CSF (∼ 2,75 mg/ml, con sorbitol al 5%, en HCl 0,58 mM) se colocó en tubos de diálisis (Spectrum Lab Inc., anchura plano 18±2 mm, diámetro 11,5 mm, 1,0 ml/cm), y se dializó contra agua (pH 3,25) a 4ºC durante 24 horas. Durante la diálisis, el agua se cambia cuatro veces. La disolución de G-CSF dializada (∼ 1100 ml) se colocó a continuación en una celda de ultrafiltración y se aplicó aire a presión sobre la disolución. Después de dos horas, se recogieron alrededor de 300 ml de disolución de G-CSF concentrado y se filtraron a través de una unidad de filtro de 0,2 mm. La concentración de la disolución final de G-CSF es 9,134 mg/ml. El secado por pulverización se realizó en un BUCHI 190 Mini Spray Dryer (Brinkmann Institute), y todo el material de vidrio del secador de pulverización se lavó primero con agua desionizada, seguido de agua estéril, seguido de etanol. El secado por pulverización se realizó con un flujo de aire en la entrada de 450 litros normales/hora, y el caudal de alimentación de la disolución de G-CSF era de 1,0 ml/min. Se obtuvo polvo de G-CSF (2,640 gramos, 82,7% de G-CSF) de los 290 ml de disolución de G-CSF de partida. Ejemplo 2

20

Este ejemplo describe la preparación de suspensiones de G-CSF/glicerina y el uso de las suspensiones de GCSF/glicerina para preparar formulaciones de G-CSF/glicerina/aceite. Etapa 1

25

Se preparó primero una suspensión de G-CSF/glicerina colocando 105,4 miligramos de polvo de G-CSF secado por pulverización (preparado como se describe en el Ejemplo 1) y 2,401 ml de glicerina en un mortero y moliendo la mezcla hasta que no se veían partículas gruesas. Etapa 2

30

Se preparó a continuación una suspensión de aceite espesado colocando 45,67 gramos de aceite de sésamo (Croda, Inc.) y 1,91 gramos de monoestearato de aluminio (AIMS) (Fluka) en un matraz erlenmeyer y mezclando con un agitador magnético a temperatura ambiente durante 20 minutos, seguido de calentamiento a 165ºC-170ºC en atmósfera de nitrógeno con agitación. La agitación se continua durante dos horas, y la mezcla se enfría a continuación hasta temperatura ambiente, dando como resultado un aceite espesado del tipo gel opalescente (3% AIMS).

35

Etapa 3

40

Se colocaron 1 ml de una suspensión de G-CSF/glicerina y 4 ml de aceite espesado en un mortero y se molieron conjuntamente hasta que estuvieron bien mezclados. La suspensión (G-CSF/20% glicerina/3% AIMS/aceite) se almacenó en un vial de muestra estéril a 4ºC hasta que se necesite. Ejemplo 3

45

Este ejemplo describe la preparación de una suspensión de G-CSF/glicerina que contiene aceite viscoso que contiene adicionalmente ácido L-ascórbico y tensioactivo. Se disolvió ácido L-ascórbico (50 mg) en una disolución de 1 ml de glicerina calentando y disolviendo la mezcla. Después de ser enfriada hasta temperatura ambiente, la disolución de ácido ascórbico/glicerina se mezcló con polvo de GCSF (45,3 mg) y Span 80 (250 ml).

50

Se añadieron 3,75 ml de aceite espesado (AIMS al 3%) preparado como se describe anteriormente a la mezcla de G-CSF/ácido ascórbico/glicerina y se molieron conjuntamente para dar un suspensión aceitosa viscosa (G-CSF/20% glicerina+ácido ascórbico/Span 80/3% AIMS/aceite). 55

Ejemplo 4 Este ejemplo muestra la preparación de un aceite espesado con 7% de cera blanca.

60

El aceite espesado con 7% de cera se produjo (usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 2, Etapa 2) calentando una mezcla de cera blanca (4,49 gramos) y aceite de sésamo (59,65 gramos) a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Ejemplo 5

65

Este ejemplo muestra la preparación de varias formulaciones de aceite que contiene G-CSF usando 7% de cera como espesante y con diferentes concentraciones de glicerina.

8

ES 2 204 187 T3 Preparación 1

5

Se mezcló polvo de G-CSF (27,6 mg) y glicerina (600 µl) en un mortero y se molieron hasta que no se vieron partículas gruesas observables. A continuación se añadieron 2,4 ml del aceite espesado con 7% de cera preparado como se describe en el Ejemplo 4 a la suspensión de GCSF/glicerina. La mezcla se molió conjuntamente con mortero y mano de mortero para dar una formulación de aceite viscoso (G-CSF/20% glicerina/7% cera). Preparación 2

10

15

20

Se mezcló polvo de GCSF (45,3 mg) con 1,00 ml de disolución de ácido ascórbico/glicerina (preparada como se describe en el Ejemplo 3), y a continuación se añadieron 4,0 ml de aceite espesado con 7% de cera. La mezcla resultante se molió conjuntamente para dar una formulación de aceite viscoso (G-CSF/20% glicerina-ácido ascórbico/7% cera). Preparación 3 Se mezcló polvo de G-CSF (27,3 mg) y glicerina (450 µl) en un mortero y se molieron hasta que no se veían partículas gruesas observables. a continuación se añadieron 2,55 ml del aceite espesado con 7% de cera preparado como se describe en el Ejemplo 4 a la suspensión de GCSF/glicerina. La mezcla se molió conjuntamente con mortero y mano de mortero para dar una formulación de aceite viscoso (G-CSF/15% glicerina/7% cera). Preparación 4

25

Se mezcló polvo de G-CSF (27,5 mg) y glicerina (750 µl) en un mortero y se molieron hasta que no se veían partículas gruesas observables. A continuación se añadieron 2,25 ml del aceite espesado con 7% de cera preparado como se describe en el Ejemplo 4 a la suspensión de GCSF/glicerina. La mezcla se molió conjuntamente con mortero y mano de mortero para dar una formulación de aceite viscoso (G-CSF/25% glicerina/7% cera). Ejemplo 6

30

Este ejemplo muestra la preparación de un aceite de G-CSF/glicerina espesado con 10% de cera blanca.

35

El aceite espesado con 10% de cera blanca se produjo (usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 2, Etapa 2) calentando una mezcla de cera blanca (6,5 gramos) y aceite de sésamo (58,5 gramos) a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. El polvo de GCSF (27,4 mg) y la glicerina (600 µl) se mezclaron conjuntamente y a continuación se añadieron 2,40 ml del aceite espesado (10% de cera) a la suspensión de GCSF/glicerina. La mezcla se molió para dar una formulación de aceite viscoso (G-CSF/20% glicerina/10% cera).

40

Ejemplo 7 Este ejemplo describe el ensayo in vivo de las suspensiones preparadas en los Ejemplos 2-6. 45

A ratones sin bazo (BDF1) se les inyectó una vez (subcutáneamente) 30 mg/kg de varias suspensiones que contienen G-CSF, y varios controles. Se analizó la sangre de los ratones durante varios días. Se usaron como controles polvo de G-CSF(-glicerina) en 3% de AIMS en aceite (30 mg/kg); polvo de G-CSF en glicerina (30 mg/kg); polvo de GCSF disuelto en agua (30 mg/kg); y 1 x PBS. Los datos se resumen en la Tabla 1 a continuación.

50

TABLA 1 Cuentas de neutrófilo (106 /ml)

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Formulación

Día 3

Día 5

Día 7

60

1 x PBS G-CSF en agua pH 3,25 (+5% sorbitol) G-CSF en glicerina G-CSF (-glicerina) en 3% AIMS/aceite G-CSF/20% glicerina, 3% AIMS/aceite G-CSF/20% glicerina, ácido ascórbico/Span 80, 3% AIMS/aceite

2,0 2,0 3,5 1,5 24

2,0 2,0 2,0 1,5 33

2,0 2,0 2,0 1,5 19

18,1

23,8

8,7

65

9

ES 2 204 187 T3 TABLA 1 (continuación) Cuentas de neutrófilo (106 /ml) 5

10

15

Formulación

Día 3

Día 5

Día 7

G-CSF/20% glicerina, 7% cera/aceite G-CSF/15% glicerina,7% cera/aceite G-CSF/25% glicerina, 7% cera/aceite G-CSF/20% glicerina,10% cera/aceite

27 32,4 24,6 33,6

40,2 36 38,2 56,9

10,3 8,1 13,9 25,6

Como es evidente de los datos en la Tabla 1, las suspensiones de polialcohol/aceite espesado son capaces de proporcionar el desprendimiento sostenido del G-CSF durante periodos por lo menos de una semana. Importantemente, se debe advertir que el G-CSF no se podría suministrar en los aceites sin la adición del polialcohol. Ejemplo 8

20

Este ejemplo muestra la preparación de unos aceites espesados con estearato de glicerina. Preparación 1

25

Se colocó triestearato de glicerina (1,00 gramos), monoestearato de glicerina (4,00 gramos, y aceite de sésamo (45,00 gramos en una botella y se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla se enfrió a continuación hasta temperatura ambiente mientras se sometía a vórtice. Se obtuvo un aceite blanco espesado. Preparación 2

30

35

Se colocó monoestearato de glicerina (0,80 gramos) y aceite de sésamo (9,20 gramos) en una botella y se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La mezcla se enfrió a continuación hasta temperatura ambiente mientras se sometía a vórtice. Se obtuvo un aceite blanco espesado. Ejemplo 9 Este ejemplo describe la preparación de aceite espeso usando una mezcla de aceite de sésamo y el más viscoso aceite vegetal hidrogenado.

40

Se colocó aceite de sésamo (6,00 ml) y aceite vegetal hidrogenado (34,00 ml) en una botella y la mezcla se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Después de que la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se obtuvo un aceite espesado. Ejemplo 10

45

Este ejemplo muestra la preparación de G-CSF/glicerina en suspensiones de aceite en las que el aceite contiene una mezcla de aceite de sésamo y aceite vegetal hidrogenado y en las que el aceite vegetal hidrogenado espesa la mezcla. Preparación 1

50

55

Se mezcló polvo de GCSF (10,0 mg) y glicerina (0,20 ml) y a continuación se añadió una mezcla de aceite (aceite hidrogenado/aceite de sésamo = 5/3, 0,80 ml). La mezcla se molió conjuntamente con un mortero y mano de mortero para dar una formulación de suspensión viscosa. Con esta formulación se llenó una jeringuilla y era inyectable Preparación 2 Se mezcló polvo de GCSF (10,3 mg) y glicerina (0,20 ml) y a continuación se añadió una mezcla de aceite (aceite hidrogenado/aceite de sésamo = 3/17, 0,8 ml). La mezcla se molió conjuntamente con un mortero y mano de mortero para dar una formulación de suspensión viscosa. Con esta formulación se llenó una jeringuilla y era inyectable

60

Ejemplo 11 Este ejemplo muestra la preparación de unos aceites espesados usando ácido esteárico, alcohol estearílico, y sus combinaciones, como espesantes ± G-CSF/glicerina.

65

10

ES 2 204 187 T3 Preparación 1

5

Se colocó ácido esteárico (1,0 gramos) y aceite de sésamo (9,00 gramos) en una botella y la mezcla se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente con agitación la mezcla se convirtió en un aceite espesado viscoso. Preparación 2

10

Se colocó alcohol estearílico (1,00 gramos) y aceite de sésamo (9,00 gramos) en una botella y la mezcla se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente con agitación la mezcla se convirtió en un aceite espesado viscoso. Preparación 3

15

Se colocó alcohol estearílico (0,50 gramos), ácido esteárico (0,50 gramos), y aceite de sésamo (9,00 gramos) en una botella y la mezcla se calentó a 160ºC en atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente con agitación la mezcla se convirtió en un aceite espesado viscoso. Preparación 4

20

Se mezcló polvo de G-CSF (9,8 mg) y glicerina (0,20 ml) y a continuación se añadieron 0,80 ml de aceite espesado (alcohol estearílico al 10%). La mezcla se molió durante 10 minutos para dar una formulación de aceite con la que se rellenó una jeringuilla de 1 ml y era inyectable. 25

Preparación 5 Se mezcló polvo de G-CSF (10,3 mg) y glicerina (0,20 ml) y a continuación se añadieron 0,80 ml de aceite espesado (10% espesante, alcohol estearílico/ácido esteárico = 3/1). La mezcla se molió durante 10 minutos para dar una formulación de aceite con la que se llenó una jeringuilla de 1 ml y era inyectable.

30

Ejemplo 12 Este ejemplo muestra la preparación de glicerina acuosa que contiene G-CSF en formulaciones de emulsión de aceite en las que el G-CSF se mezcla en la fase acuosa de glicerina. 35

La fase acuosa consistía en 1,27 mg/ml de G-CSF, 50% de glicerina, 1% peso/v de Pluronic F68, acetato 10 mM (pH 4,0) y HCl 0,44 mM. Una mezcla de Pluronic L101 al 1% en aceite de maíz formaba la fase aceitosa. Unas mezclas 50:50 y 70:30 de las dos fases se homogeneizaron con un homegeneizador Virtis Handishear durante 45 segundos para formar las respectivas formulaciones de emulsión. 40

Ejemplo 13 Este ejemplo se prepara de una manera similar al Ejemplo 2 excepto que la dosis de G-CSF es aproximadamente 10 mg/kg. Después de una única inyección los neutrófilosse elevaron por lo menos durante una semana. 45

50

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60

65

11

ES 2 204 187 T3 REIVINDICACIONES

5

1. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un agente biológicamente activo (BAA) incorporado en una suspensión de polialcohol biocompatible/aceite, en la que dicha suspensión contiene un espesante, y en la que dicho agente biológicamente activo es una proteína. 2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicho polialcohol biocompatible se selecciona del grupo que consiste en glicerina, eritritol, arabinosa, xilosa, ribosa, inositol, fructosa, galactosa, maltosa y sacarosa.

10

15

3. La composición de la reivindicación 1 ó 2, en la que el espesante se selecciona del grupo que consiste en sales de metal polivalente de ácidos orgánicos, materiales oleaginosos tales como ceras y aceites de alta viscosidad, y cargas orgánicas o inorgánicas tales como polímeros y sales. 4. La composición de la reivindicación 3, en la que el espesante es monoestearato de aluminio. 5. La composición de la reivindicación 3, en la que el espesante es cera blanca.

20

25

30

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho aceite se selecciona del grupo que consiste en aceite de sésamo, ricino, semilla de algodón, canola, azafrán, oliva, cacahuete, semilla de girasol, α-tocoferol, y oleato de etilo. 7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho agente biológicamente activo es una proteína seleccionada del grupo que consiste en interferón consensus, eritropoyetina, factor estimulante de la colonia de granulocitos (GCSF), factor de células madre (CSF), leptina (proteína OB), proteína que se liga al factor de necrosis tumoral (TNF-bp), antagonista del receptor de interleuquina-1 (IL-1ra), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), factor neurotrófico derivado de glial (GDNF), factor neurotrófico 3 (NT3), osteoprotegerina (OPG), factor estimulante de la colonia de granulocito macrófago (GM-CSF), factor de crecimiento derivado de megacariocitos (MGDF), factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), trombopoyetina, y nueva proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP). 8. La composición de la reivindicación 7, en la que dicho agente biológicamente activo es el factor estimulante de la colonia de granulocitos (G-CSF).

35

9. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la concentración de dicho polialcohol en dicha suspensión está en el intervalo de 10% a 30% en peso. 10. Una composición según la reivindicación 9, en la que la concentración de dicho polialcohol en dicha suspensión está en el intervalo de 15% a 30% en peso.

40

45

11. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, siendo dicha composición capaz de proporcionar el desprendimiento sostenido del agente biológicamente activo. 12. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso en una aplicación profiláctica, terapéutica o de diagnóstico. 13. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la forma de una suspensión inyectable.

50

55

14. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la administración a un animal de sangre caliente subcutáneamente o intramuscularmente, en la que el agente biológicamente activo se desprende de la suspensión a una velocidad controlada durante hasta una semana o más. 15. Una jeringuilla cargada que contiene la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes. 16. El uso de una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o mejora de un estado tratable por dicho agente biológicamente activo.

60

17. Un procedimiento para preparar composiciones farmacéuticas de suspensiones de desprendimiento sostenido de BAA/polialcohol/aceite que comprende: (a) suspender un BAA en un polialcohol para formar una mezcla de BAA/polialcohol.

65

(b) suspender dicha mezcla de BAA/polialcohol en una mezcla que comprende un aceite espesado para formar una suspensión de BAA/polialcohol/aceite, en el que dicho agente biológicamente activo es una proteína. 12

ES 2 204 187 T3 18. Un procedimiento para preparar composiciones farmacéuticas de suspensiones de desprendimiento sostenido de G-CSF/polialcohol/aceite según la reivindicación 17, procedimiento que comprende: (a) suspender polvo de G-CSF en un polialcohol para formar una mezcla de G-CSF/polialcohol. 5

(b) suspender dicha mezcla de G-CSF/polialcohol en una mezcla que comprende un aceite espesado para formar una suspensión de G-CSF/polialcohol/aceite. 10

19. Un procedimiento según la reivindicación 17 ó 18, en el que la concentración de dicho polialcohol en dicha suspensión está en el intervalo de 10% a 30% en peso. 20. Un procedimiento según la reivindicación 19, en el que la concentración de dicho polialcohol en dicha suspensión está en el intervalo de 15% a 30% en peso. 21. Una composición farmacéutica de la composición 1 preparada según el procedimiento de la reivindicación 17.

15

22. Una composición farmacéutica de la reivindicación 8 preparada según el procedimiento de la reivindicación 18. 20

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del 7-10-1992, no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluida en la mencionada reserva. 13