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˜ OFICINA ESPANOLA DE PATENTES Y MARCAS

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TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

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kN´umero de solicitud europea: 95904215.1 kFecha de presentaci´on: 02.12.1994 kN´umero de publicaci´on de la solicitud: 0 732 916 kFecha de publicaci´on de la solicitud: 25.09.1996

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54 T´ıtulo: Supositorio vaginal virucida, bactericida y espermicida.

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30 Prioridad: 03.12.1993 US 161659

07.09.1994 US 301966

15615 Alton Parkway, Suite 245 Irvine, California 92618, US

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72 Inventor/es: Ford, Larry C.

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74 Agente: Aguilar Camprub´ı, M. Mireia

45 Fecha de la publicaci´ on de la menci´on BOPI:

01.03.2002

45 Fecha de la publicaci´ on del folleto de patente:

01.03.2002

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73 Titular/es: BIOFEM, INC.

Aviso:

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En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicaci´on en el Bolet´ın europeo de patentes, de la menci´on de concesi´on de la patente europea, cualquier persona podr´a oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposici´on deber´a formularse por escrito y estar motivada; s´olo se considerar´a como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposici´ on (art. 99.1 del Convenio sobre concesi´on de Patentes Europeas). Venta de fasc´ ıculos: Oficina Espa˜ nola de Patentes y Marcas. C/Panam´ a, 1 – 28036 Madrid

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DESCRIPCION Supositorio vaginal virucida, bactericida y espermicida. Campo de la invenci´ on La presente invenci´on pertenece al campo de los materiales bactericidas, virucidas y espermicidas. M´ as particularmente, la presente invenci´ on est´a destinada a un supositorio vaginal que es espermicida y que es altamente eficaz para prevenir el contagio de enfermedades de transmisi´ on sexual en el transcurso de relaciones heterosexuales. Breve descripci´ on de la t´ ecnica anterior Los agentes espermicidas tales como el nonoxinol 9 o el octoxinol 9 han sido ampliamente utilizados en la t´ecnica anterior en supositorios, cremas, espumas por si mismos y tambi´en en combinaci´on con distintos dispositivos anticonceptivos mec´anicos, principalmente con el objetivo de la anticoncepci´on. La t´ecnica anterior tambi´en se ha referido al nonoxinol 9 por tener cierta acci´on bactericida y ser capaz de destruir el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV), por lo menos en ciertos ensayos in vitro. El uso del nonoxinol 9 (o del octoxinol 9) y otros agentes espermicidas y bactericidas en supositorios, cremas, espumas o similares insertados vaginalmente, sin embargo tiene problemas puesto que estos agentes tienden a disminuir o a destruir la salud de la flora bacteriana de la vagina y causan para la mujer una tendencia a desarrollar infecciones por hongos o levaduras (candidasis). A la luz de lo anterior, en la t´ ecnica siempre ha existido la necesidad de un agente anticonceptivo que pueda ser utilizado por una mujer por v´ıa intravaginal antes de iniciar el coito y el que tenga una alta efectividad como contra anticonceptivo y, quiz´ as incluso de forma m´ as importante, como agente para prevenir el contagio de numerosas enfermedades de transmisi´on sexual. Desde la aparici´on y la extensi´on del virus HIV entre la poblaci´ on general heterosexual, la necesidad de tal agente anticonceptivo y profil´ actico se ha incrementado incluso m´as. Adem´ as, en la t´ecnica, existe la necesidad de un agente anticonceptivo y profil´ actico que disminuya para su usuaria femenina la probabilidad de desarrollar infecciones por levaduras. Sin embargo, aunque la t´ecnica anterior ya ha reconocido la necesidad de mantener o restablecer una saludable flora bacteriana intravaginal, la u ´nica soluci´ on proporcionada a este problema en la t´ecnica anterior han sido las duchas u otros tipos de insertos vaginales que contienen una colonia de Lactobacillus acidophilus. Estas duchas u otros insertos son, sin embargo, eficaces en menos del 100 % y adem´as, o bien no contribuyen a la anticoncepci´ on o bien no protegen contra el contagio de enfermedades de transmisi´on sexual en el transcurso de relaciones sexuales. La presente invenci´on proporciona un supositorio vaginal que no s´ olo ayuda a mantener o a restablecer una flora bacteriana intravaginal normal no pat´ ogena sino que adem´as es tambi´en un anticonceptivo y proporciona una protecci´ on substancial contra las enfermedades de transmisi´on sexual.

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Sumario de la invenci´ on Es un objetivo de la presente invenci´on proporcionar un supositorio vaginal que sea altamente eficaz para prevenir el contagio de pr´ acticamente todas las enfermedades de transmisi´ on sexual y que tambi´en act´ ue como agente anticonceptivo. Es otro objetivo de la presente invenci´ on proporcionar un supositorio vaginal que re´ una los objetivos antes mencionados y cuya usuaria no quede expuesta a infecciones por levaduras. Los objetivos antes mencionados y otros objetivos y ventajas se alcanzan con el supositorio vaginal, u otro tipo de pesario vaginal, tal como crema, espuma o ung¨ uento, que contiene como ingredientes activos: por lo menos, un agente antimicrobiano farmac´euticamente aceptable y t´opicamente seguro, tal como un agente elegido del grupo del cloruro de benzalconio, cloruro de cetilpiridinio, gluconato de clorhexidina y de povidona yodada, urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo; y una colonia viable de bacterias de lactobacilos microencapsuladas.

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Los lactobacilos viables est´an contenidos en los supositorios de forma microencapsulada, lo cual protege a las bacterias durante la vida misma del supositorio de la acci´ on del agente antimicrobiano. El recubrimiento o sustancia que encapsula las bacterias, por otro lado, es de un material tal que libera las bacterias en el medio vaginal, principalmente debido al efecto de la humedad. Las bacterias lactobacilos liberadas previenen a mantener o restablecer una saludable flora basada en lactobacilos en la pared vaginal y excretan per´ oxido de hidr´ ogeno y otras bactericidinas que evitan las condiciones anormales de la flora que favorecen las infecciones. Las realizaciones preferidas de la invenci´on comprenden, adem´ as de las bacterias lactobacilos microencapsuladas, una combinaci´ on de agentes antimicrobianos (bactericidas) tales como por lo menos un agente seleccionado del grupo del cloruro de benzalconio, el cloruro de cetilpiridinio, el gluconato de clorhexidina y la povidona yodada (BETADINET M ) y adicionalmente urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo; y tambi´en un agente espermicida seleccionado entre el nonoxinol 9 o el octoxinol 9, y todav´ıa adem´ as un tamp´ on que utiliza un ´acido d´ebil, tal como ´acido b´ orico, o un a´cido org´ anico, tal como a´cido l´actico, ´acido c´ıtrico o ´acido ac´etico, para alcanzar en el supositorio, crema, espuma o ung¨ uento y en la pared vaginal, despu´es del uso, un pH a´cido d´ebil en la franja de 3,0 a 5,5. In vitro y en muchos casos tambi´en in vivo, los ensayos pertenecientes a varios pat´ogenos de transmisi´on sexual, incluyendo Candida albicans y especies relacionadas de levaduras, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, Herpes simplex y el Virus de inmunodeficiencia humana, han de-

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mostrado que el supositorio vaginal de la presente invenci´on es altamente eficaz para destruir a los pat´ ogenos de transmisi´ on sexual, ayuda a mantener o a restablecer una saludable flora bacteriana no pat´ ogena en la vagina y evita la vaginitis y las infecciones por levaduras. El supositorio vaginal de la presente invenci´ on est´a tambi´en substancialmente libre de efectos secundarios adversos (tales como ardor, picor u otras sensaciones desagradables) y, en los ensayos realizados, fue generalmente bien aceptado por su usuaria femenina y su pareja. A continuaci´ on se hace una descripci´on detallada de la invenci´on, y un resumen de varios ensayos y resultados que demostraron la efectividad de la invenci´ on. Descripci´ on detallada de la invenci´ on Seg´ un la presente invenci´ on, se prev´e un supositorio, crema, espuma o ung¨ uento vaginal que contiene una u ´ nica combinaci´ on de un agente antimicrobiano combinado con bacterias viables de Lactobacillus acidophilus microencapsuladas. Las bacterias est´an microencapsuladas para ser protegidas de la acci´on del agente antimicrobiano. Hablando en general, el objetivo de la presente invenci´on puede alcanzarse por medio de una crema, espuma o ung¨ uento vaginal, pero la realizaci´on preferida es en forma de un supositorio, y la invenci´on se describe adem´ as con referencia a un supositorio. Sin embargo, deber´ıa entenderse que los principios gen´ericos de la presente invenci´on pueden tambi´en realizarse e incorporarse a las cremas, espumas o ung¨ uentos antes mencionados que, conjuntamente con el supositorio, pueden ser referidos de forma com´ un como “pesario vaginal” o “pesarios”. Seg´ un la presente invenci´ on, el agente antimicrobiano (bactericida) incorporado en el supositorio puede ser cualquier agente antimicrobiano farmac´euticamente aceptable y t´ opicamente seguro conocido en la t´ecnica. Son ejemplos los agentes antimicrobianos (bactericidas) del tipo surfactante cati´ onico, tales como el cloruro de benzalconio, el cloruro de metilbencetonio, el cloruro de cetilpiridinio y la cetrimida (bromuros de alquiltrimetilamonio mezclados). Alternativamente, el agente bactericida puede ser gluconato de clorhexidina o yodo que contenga un agente bactericida, tal como povidona yodada (com´ unmente conocida bajo el nombre de marca BETADINET M ). Seg´ un la invenci´ on, aproximadamente de 12 a 3000 mg de cloruro de benzalconio o cloruro de metilbencetonio, se hallan presentes en cada supositorio vaginal, siendo la cantidad preferida aproximadamente de 120 mg de cloruro de benzalconio por supositorio. Debe entenderse a este respecto que, seg´ un la presente invenci´ on, una usuaria femenina de la invenci´ on se aplica un supositorio intravaginalmente de unos pocos minutos a algunas horas antes del coito. En la realizaci´on preferida, el peso total del supositorio es aproximadamente de 1,2 gramos (1200 mg), sin embargo esto no deber´ıa significar una limitaci´ on, puesto que el peso y el volumen total del supositorio no dependen u ´nicamente de la cantidad de ingredientes activos sino que tambi´en dependen de la cantidad de ingredientes inactivos que est´ an contenidos en el supositorio (agentes de relleno,

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excipientes farmac´euticos). En la siguiente descripci´on, cuando se indica una cantidad preferida de un ingrediente o componente, deber´ıa entenderse utilizada “para un supositorio” que en la realizaci´on preferida pesa aproximadamente unos 1,2 gramos. Seg´ un la invenci´ on, el cloruro de cetilpiridino es utilizado en la franja de 25 a 4000 mg por supositorio, estando la cantidad preferida en la franja de 50 a 1000 mg. El gluconato de clorhexidina es utilizado en la franja de 10 a 2000 mg, siendo preferida la franja de 25 a 1200 mg. La povidona yodada (BETADINET M ) es utilizada en la franja de 25 a 5000 mg, siendo la cantidad preferida de unos 120 mg por supositorio. En las realizaciones preferidas, uno de los agentes antimicrobianos mencionados es seleccionado en las cantidades antes mencionadas, sin embargo, una combinaci´on de estos agentes en cantidades equivalentes, tambi´en puede ser utilizada. Los agentes de tipo surfactante cati´ onico tales como el cloruro de benzalconio, adem´ as de ser agentes bactericidas, tienen tambi´en efecto espermicida. Todav´ıa otro agente bactericida que puede ser utilizado en la presente invenci´on es la urea de imidiazolidinilo, que es utilizada en la franja de 10 a 1000 mg por supositorio, siendo la cantidad preferida aproximadamente de unos 100 mg. La urea de diazolidinilo, puede ser utilizada en la franja de 10 a 1000 mg por supositorio, siendo la cantidad preferida aproximadamente de unos 100 mg. Todav´ıa otros ejemplos de agentes antimicrobianos que pueden ser utilizados en la presente invenci´on son la hexilresorcina (25 a 1000 mg), la cetrimida (100 a 400 mg) el hexaclorofeno (25 a 3000 mg), el triclocarb´ an (3,4’4’triclorocarbanilida 50 a 1000 mg), el cloroxilenol (25 a 1000 mg) y el bromuro de hexadeciltrimetilamonio (25 a 400 mg). Entre los agentes antimicrobianos antes mencionados, el cloruro de benzalconio es el m´as preferido, particularmente en realizaciones donde es utilizado un u ´ nico agente antimicrobiano. En las realizaciones preferidas de la invenci´ on, sin embargo, no es utilizada una u ´nica combinaci´on de agentes antimicrobianos, sino varias. Un tipo particularmente preferido de realizaci´on contiene un agente antimicrobiano seleccionado del grupo que se compone de cloruro de benzalconio, cloruro de metilbencetonio, cloruro de cetilpiridinio, gluconato de clorhexidina y povidona yodada (BETADINET M ). Este tipo de realizaci´on preferida tambi´en contiene urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo. Otro componente esencial del supositorio vaginal de la presente invenci´on es una colonia viable de bacterias de Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus, que deber´ıan estar presentes en la franja de 103 a 107 bacterias viables por supositorio, siendo una franja m´ as preumero prefeferida de 105 a 107 , y siendo el n´ rido de bacterias viables aproximadamente de 1 an mill´ on (106 ) por supositorio. Las bacterias est´ contenidas en el supositorio de forma microencapsulada. En la realizaci´ on preferida las bacterias son de la especie Lactobacillus rhamnosus, y cada supositorio contiene, por lo menos aproxi3

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madamente 106 bacterias viables. Sin embargo, algunos bacteri´ ologos pueden considerar la Lactobacillus rhamnosus como una especie separada pero relacionada con la Lactobacillus acidophilus, la rhamnosus es m´as propiamente considerada una simple variante de la especie acidophilus. Como es conocido en la t´ecnica, tanto la Lactobacillus acidophilus como la Lactobacillus rhamnosus son bacterias “inocuas” y forman una saludable flora bacteriana intravaginal. Ambas bacterias son conocidas por producir ciertas bactericidinas y per´ oxido de hidr´ ogeno, lo que ayuda a suprimir las bacterias pat´ogenas. La ventaja de la Lactobacillus rhamnosus sobre la variante acidophilus, en la presente invenci´on, est´ a en el hecho de que la variante rhamnosus es m´as prol´ıfica (unas 8 a 10 veces), que es capaz de fermentar m´as hidratos de carbono (23 comparados con los 12 de la variante acidophilus) y que la variante rhamnosus produce a´cido l´ actico L+ en vez de la mezcla rac´emica de ´acido l´ actico producido por la variante acidophilus. Lo anterior es ventajoso porque la capacidad de la variante rhamnosus para fermentar m´ as tipos de hidratos de carbono la hace m´as fuerte, bacterias propensas a sobrevivir. La producci´on de a´cido l´ actico L+ es ventajosa porque es el enanti´omero L+ que tiene una acci´on antif´ ungica substancial. Tanto las bacterias variantes de Lactobacillus acidophilus como de Lactobacillus rhamnosus, utilizadas en la presente invenci´ on, pueden ser adquiridas de fuentes comerciales, o pueden obtenerse por esfuerzos de laboratorio. La variante Lactobacillus rhamnosus utilizada en la realizaci´on preferida, descrita a continuaci´ on, es obtenida del Institute Rosell Montreal, Quebec, Canad´ a. La variante Lactobacillus est´a microencapsulada seg´ un la presente invenci´ on y est´a incorporada con el agente o los agentes antimicrobianos y otros componentes de la invenci´on de forma microencapsulada. Se describen a continuaci´on varios m´etodos o procedimientos para la microencapsulaci´on de estas bacterias. La finalidad de la microencapsulaci´ on de las bacterias es protegerlas de la acci´on del agente (o agentes) antimicrobiano antes de que el supositorio sea utilizado. Seg´ un la presente invenci´ on, el material o revestimiento que encapsula las bacterias est´a elegido de manera tal que el material pierda su integridad estructural, como una pel´ıcula, en el ambiente vaginal (principalmente debido a la humedad) y libere las bacterias lactobacilos. Adem´ as del agente o de los agentes bactericidas y las bacterias lactobacilos microencapsuladas, el supositorio de la presente invenci´ on contiene tambi´en los siguientes ingredientes o componentes no esenciales. Estos componentes est´an considerados no esenciales porque los objetivos b´ asicos de la invenci´on pueden alcanzarse sin ellos. Sin embargo, las realizaciones de la invenci´on que incluyen estos componentes no esenciales ofrecen ciertas ventajas y por ello se consideran las realizaciones preferidas, y deber´ıan tambi´en considerarse novedosas e inventivas, en su combinaci´on, con las realizaciones b´asicas. As´ı, las realizaciones preferidas del supositorio de la presente invenci´ on contienen un agente espermicida primario seleccionado entre el nono4

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xinol 9 y el octoxinol 9. El u ´ltimo es considerado substancialmente equivalente al nonoxinol 9 para los objetivos de la presente invenci´ on. Cada supositorio contiene nonoxinol 9 en la franja aproximadamente de 50 a 500 mg, siendo la cantidad preferida de 100 mg. La utilizaci´ on de nonoxinol 9, seg´ un la t´ecnica anterior, presenta serias desventajas porque su uso repetido incrementa la probabilidad de vaginitis e infecciones por levaduras, principalmente debido a que el nonoxinol 9 tiende a afectar adversamente a la flora bacteriana normal de la vagina. Sin embargo, el uso de nonoxinol 9 en combinaci´ on con los otros componentes, seg´ un la presente invenci´ on, no presenta estas desventajas. Las realizaciones preferidas del supositorio vaginal de la presente invenci´on tambi´en contienen un agente tamp´ on capaz de tamponar el supositorio y capaz de mantener, durante varias horas despu´es del coito, un pH intravaginal aproximadamente de 3,0 a 5,5, preferentemente un pH de 4,3 a 4,5. Puede ser utilizado cualquier a´cido d´ebil farmac´euticamente aceptable, tal como a´cido b´ orico o a´cidos org´anicos d´ebiles, tales como ´acido l´ actico, ´acido asc´ orbico, a´cido c´ıtrico o ´acido ac´etico, en combinaci´on con la respectiva sal de sodio u otra sal farmac´euticamente aceptable (en el grado necesario para alcanzar el pH deseado). Preferentemente, el pH del supositorio es tamponado en la franja de 4,3 a 4,5 y se utilizan para tamponar, preferentemente, el ´acido l´actico con lactato de sodio o una combinaci´ on de ´acido l´ actico/lactato de sodio y ´acido asc´orbico. Se ha hallado, seg´ un la presente invenci´ on, que el supositorio tamponado de la manera descrita anteriormente, permite de hecho que el pH vaginal permanezca a´cido despu´es del coito, lo cual se sabe que es ventajoso para la anticoncepci´on y tambi´en para mantener una saludable flora bacteriana vaginal. El uso de a´cido asc´orbico como parte del sistema de tamponado es ventajoso por la raz´on adicional de que el a´cido asc´orbico ha demostrado que incrementa la viscosidad del moco cervical y por ello hace m´as dif´ıcil la entrada tanto de los espermas como de los microorganismos en el c´ervix. As´ı, el ´acido asc´orbico contribuye a ambos efectos antimicrobiano y anticonceptivo del supositorio de la presente invenci´ on. El supositorio de la presente invenci´on tambi´en contiene excipientes farmac´euticos tales que hacen posible la formaci´ on del supositorio. Son particularmente ventajosas la hidroxipropilmetilcelulosa (aproximadamente 40 gramos por 100 supositorios) y la celulosa microcristalina (aproximadamente 20 gramos por 100 supositorios) porque estos ingredientes se adhieren bien a la pared vaginal en un ambiente a´cido que es garantizado por la inclusi´ on del sistema de tamp´ on apropiado en el supositorio de la invenci´on. Est´ an tambi´en incluidas en las realizaciones preferidas, excipientes adicionales tales como el estearato de magnesio (2 - 4 gramos por 100 supositorios), el di´oxido de silicio (2 - 4 gramos por 100 supositorios) y la lactosa (2 - 3 gramos por 100 supositorios). Todav´ıa componentes opcionales adicionales o ingredientes que pueden estar incluidos en el supositorio de la presente invenci´ on son aromas; mentol, aceite de eucaliptos, salicilato de metilo

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o salicilatos relacionados como agentes de enfriamiento t´ opico; hidrocortisona o esteroides relacionados antiinflamatorios (de 1 a 500 mg por supositorio) como agentes antiinflamatorios; el EDTA como un agente humectante y antimicrobiano d´ebil; el propilenglicol u otros glicoles farmac´euticamente aceptables, el metilo de parabeno o derivados relacionados de parabeno como agentes humectantes y para “textura”; monolaurato de paradiisobutilfenoxipolietoxietanol o de dodecaetilenglicol como espermicidas y agentes antimicrobianos d´ebiles; tritiones y menfegol como espermicidas, agentes d´ebiles antimicrobianos y humectantes. En la siguiente descripci´ on el solicitante describe, en primer lugar, ejemplos reales de procedimientos para la microencapsulaci´on de bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus y ejemplos reales de las realizaciones preferidas del supositorio de la presente invenci´ on. Ejemplos espec´ıficos M´etodos de encapsulaci´ on Bacterias de lactobacilos liofilizadas viables, que han sido liofilizadas despu´es de la extracci´on del medio, se utilizan para la encapsulaci´on. Las bacterias pueden obtenerse de fuentes comerciales o pueden obtenerse por esfuerzos de laboratorio. En las realizaciones preferidas actualmente las bacterias lactobacillus rhamnosus est´an comercializadas por el Institute Rosell Montreal, Quebec, Canad´ a. Los organismos se desarrollan para crecer hasta la fase log en un medio nutriente. El medio adecuado incluye medio Thayer-Martin, Trypticase Soy, Brain-Heart caldo de infusi´ on, u cualquier otro medio enriquecido adecuado para el cultivo de estos organismos, puesto que ning´ un medio particular es cr´ıtico para el ´exito de este supositorio. Los u ´ nicos factores importantes son la viabilidad y la cantidad de los microorganismos que est´ an siempre determinados por los m´etodos cl´ınicos est´andar de diluci´ on de laboratorio, tales como el platinado la diluci´ on cuantificada de bacterias en placas de agar de sangre u otros medios enriquecidos, incubando a 37 grados C durante 24 - 48 horas en una atm´ osfera de di´ oxido de carbono al 5 - 10 % y entonces realizando un contado de la colonia. La eliminaci´on del medio nutriente se realiza por centrifugaci´on a 14.000 x g a 0 - 4◦ C, y luego se lava con sales est´eriles equilibradas y con una disoluci´ on de glucosa al 5 %, por lo menos tres veces despu´es de la centrifugaci´ on inicial. Las bacterias son entonces “congeladas r´apidamente” con nitr´ ogeno l´ıquido y luego liofilizadas a alto vac´ıo. M´etodo A de encapsulaci´ on Las bacterias liofilizadas lavadas reci´en obtenidas tal como se ha descrito anteriormente, son suspendidas en 10 ml de una disoluci´ on salina de glucosa al 5 %, en un volumen tal que se obtenga una suspensi´on pesada de bacterias que contiene entre uno y diez billones de organismos por ml, a 0 - 4 grados C. Todos estos procedimientos se realizan en la franja de temperaturas de 0 - 4 grados C sin que de otra forma sea anotado, a fin de mantener la viabilidad de las bacterias lactobacilli, que a temperatura ambiente pierden la viabilidad. La suspensi´ on de bacterias es r´apidamente agitada, pero de forma suave, mientras se a˜ nade

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una disoluci´ on de alginato de sodio de 0,2 - 0,4 ml (1,5 % en peso por volumen). La mezcla anterior se traspasa entonces a un frasco de base redonda de 4 litros utilizando una corriente de nitr´ ogeno, a trav´es de una aguja de calibre 14 cubierta. El frasco de base redonda de 4 litros se lav´ o previamente con una disoluci´ on de alb´ umina al 5 %, y despu´es se calent´o por lo menos durante 10 horas a 65 grados C, y la aguja y el conducto utilizados en el proceso tuvieron tambi´en que tratarse de esta manera. A continuaci´ on la mezcla anterior se hace pasar a trav´es de una aguja de calibre 30 multibiselada bajo presi´ on utilizando una jeringuilla grande y una corriente de nitr´ ogeno. Se generan gotas muy peque˜ nas en el extremo de la aguja que se secan por medio de la corriente de nitr´ ogeno y aire alrededor de la aguja de calibre 30, y las gotas se recogen en una disoluci´on acuosa de cloruro de calcio al 1,3 - 2 % con lo que se gelifican. A continuaci´on, son lavadas por lo menos tres veces con una disoluci´ on de a´cido etansulf´ onico 2-(Nciclohexanilamino) (CHES) al 0,08 - 0,13 % y una disoluci´ on de cloruro de calcio al 1,0 a 1,5 %. Las gotas gelificadas o las peque˜ nas esferas son lavadas adicionalmente con por lo menos un exceso de cinco veces de 0,1 % de CHES, 1,1 % de cloruro de calcio y disoluci´ on salina normal. Las esferas resultantes son entonces “congeladas r´ apidamente” en nitr´ ogeno l´ıquido y luego liofilizadas. Despu´es de estas etapas, los organismos encapsulados pueden ser utilizados en las formulaciones de la presente invenci´on. M´etodo B de encapsulaci´ on Como una mejora sobre el m´etodo A de encapsulaci´on, las siguientes etapas adicionales se realizaron para hacer las bacterias m´ as resistentes a los antimicrobianos cati´onicos. Las etapas se realizaron a 0 - 4 grados C. As´ı, despu´es de los lavados descritos en el m´etodo A de encapsulaci´ on, los materiales se hacen reaccionar con esferas de disoluci´ on de poli-L-lisina (Sigma) (0,05 % p/v) durante 10 minutos. Las esferas son entonces lavadas con salina normal tamponada a pH 4,5 con ´acido l´ actico. Las esferas resultantes son entonces “congeladas r´ apidamente” en nitr´ ogeno l´ıquido y luego liofilizadas. Despu´es de estas etapas, los organismos encapsulados pueden ser utilizados en las formulaciones de la presente invenci´ on. M´etodo C de encapsulaci´ on Las bacterias liofilizadas lavadas reci´en obtenidas se mezclan a 0 - 4 grados C con hidroxipropilmetilcelulosa para alcanzar una relaci´on peso a peso de bacterias a hidroxipropilmetilcelulosa de 10/90, sin embargo la franja puede variar de 1/99 a 99/1, respectivamente. Esto afectar´a la masa final y la viabilidad de los organismos encapsulados. Deber´ıa entenderse que relaciones mayores de celulosa tienden a “proteger” las bacterias en el proceso de encapsulaci´on. La mezcla de bacterias liofilizadas y la hidroxipropilmetilcelulosa es encapsulada por medio de un recubrimiento de torta. Esto se realiza utilizando un frasco de base redonda de acero inoxidable que primero se ha “recubierto” con aproximadamente un 1 % de estearato de magnesio, suspensi´ on en agua. Una combinaci´ on de un copol´ımero libre de ´ester de ´acido acr´ılico metacr´ılico permeable 5

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al agua y un copol´ımero de ´ester de ´acido acr´ılico metacr´ılico parcialmente permeable al agua, (EUDRAGIT RLT M y EUDRAGIT RST M , respectivamente (obtenidos de Rohm Parm. Ltd., Alemania)) est´a suspendido a 5 - 10 % de concentraci´on en acetona-isopropanol, 1:1, que contiene un 1 % p/v de aceite de ricino. La relaci´ on de los dos copol´ımeros puede variar de 1:1 a 1:10, con una relaci´on preferida de 1:2. La suspensi´ on est´a contenida en el frasco de base redonda de acero inoxidable. Puesto que la suspensi´ on del copol´ımero destruye r´ apidamente las bacterias, el proceso debe ser realizado r´apidamente, con una alta relaci´ on de hidroxipropilmetilcelulosa a bacterias. As´ı, las mezclas de bacterias y celulosa se a˜ naden al frasco de acero inoxidable en cantidades peque˜ nas, agitando vigorosamente durante 3 - 10 minutos mientras el material se seca en una corriente de nitr´ogeno. M´etodo D de encapsulaci´ on Las bacterias liofilizadas lavadas reci´en obtenidas se a˜ naden, utilizando un agitado r´ apido pero suave, a 0 - 4 grados C, a una suspensi´ on espesa de polivinilpirrolidona (comercialmente disponible de BASF, Alemania) que puede o no estar reticulada, durante 2 a 12 horas, con un uno porciento (1 %) de disoluci´ on de divinilbenceno (Biorad) en una disoluci´ on al 5 % de glucosa equilibrada en sales a un pH de 5,0 (franja 4,5 - 8,0). Los lactobacilos se encapsulan por agitaci´on de esta mezcla durante 1 - 12 horas. El material es entonces “congelado r´apidamente” y liofilizado. M´etodo E de encapsulaci´ on Las bacterias liofilizadas lavadas reci´en obtenidas se a˜ naden, utilizando un agitado r´ apido pero suave, a una suspensi´ on de polivinilpovidona (CrospovidoneT M ). Espec´ıficamente, diez gramos de bacterias liofilizadas se a˜ naden a una suspensi´on de 50 gm de polivinilpovidona (Croson povidoneT M ) a 0 - 4 grados C. La encapsulaci´ se produce por agitaci´ on durante 30 - 60 minutos, aunque puede ser utilizado un tiempo superior. Entonces se elimina la humedad de la mezcla con vac´ıo en un secador, o el material es “congelado r´ apidamente” y liofilizado. M´etodo A de formulaci´ on del supositorio Se a˜ naden lentamente, mientras se agita perfectamente, cloruro de benzalconio o cloruro de metilbencetonio (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios), urea de imidiazolidinilo (11 gramos para una partida de 100 supositorios) y urea de diazolidinilo (1,1 gramos para una partida de 100 supositorios, o alternativamente 1,1 gramos de urea de diazolidinilo y 1,1 gramos de urea de imidiazolidinilo para alcanzar una concentraci´on diez veces menor), a una suspensi´on de hidroxipropilmetilcelulosa (40 gramos para una partida de unos 100 supositorios) y celulosa microcristalina (20 gramos para una partida de unos 100 supositorios) en una disoluci´ on salina normal est´eril (cantidad suficiente para hacer una pasta espesa, normalmente 120 ml) a 35 - 37 grados C. El pH es bajado lentamente a unos 6,0 - 6,3 con a´cido l´ actico de calidad para reactivos. (Esta etapa une los antimicrobianos a los excipientes de “celulosa”). La suspensi´on es agitada durante dos horas, luego se a˜ naden lentamente, con un agi6

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tado suave, 10,0 gramos de a´cido asc´orbico que se hab´ıan disuelto en unos 10 - 15 ml de salina est´eril. El material es, en este momento, una pasta muy espesa. Ahora se a˜ nade espermicida (11 gramos de nonoxinol 9 para una partida de 100 supositorios) y es mezclado perfectamente. Despu´es de esta etapa el proceso se realiza a 0 - 4 grados C. El pH de la mezcla es entonces rebajado a 4,3 - 4,5 con a´cido l´ actico de calidad para reactivos. Las bacterias lactobacilos encapsuladas reci´en obtenidas son luego a˜ nadidas para alcanzar una concentraci´ on final de por lo menos un mill´ on de bacterias viables por supositorio. Puesto que el objetivo es alcanzar una concentraci´on final de por lo menos un mill´ on de bacterias viables por supositorio se a˜ nade normalmente un exceso de 4 - 6 veces de bacterias, porque algunas p´erdidas de viabilidad se producen durante los sucesivos procedimientos de mezclado. Esto significa que unos 500 mg de bacterias encapsuladas se a˜ naden normalmente. Es importante mezclar estos organismos no s´olo perfectamente para asegurar la uniformidad sino que tambi´en de forma r´ apida puesto que la humedad tiene efectos adversos para la viabilidad de los organismos. El mezclado r´ apido y perfecto se puede realizar, por ejemplo, dispersando la pasta en una capa fina sobre una placa de vidrio est´eril y entonces, utilizando un replicador para extender las bacterias uniformemente sobre la pasta. Despu´es, para una partida de 100 supositorios, unos 2 - 4 gramos tanto de estearato de magnesio como de di´ oxido de silicio son a˜ nadidos, con o sin 2 3 gramos de lactosa. Despu´es de que los materiales se han mezclado perfectamente a 0 - 4 grados C son prensados en un molde y secados en una jarra de un secador al vac´ıo a 0 - 4 grados C. (Secando a temperatura ambiente (25 grados) o a temperaturas superiores, disminuye el n´ umero de bacterias viables). Los supositorios son entonces sellados en contenedores resistentes al aire y a la humedad hasta que sean utilizados. Durante el almacenaje deber´ıan estar protegidos de la humedad y de temperaturas extremas, para asegurar la viabilidad de los lactobacilos. Composici´ on B del supositorio El proceso para hacer esta composici´on es realizado como el proceso A para la Formulaci´ on del supositorio, excepto que se utiliza el cloruro de cetilpiridinio (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios) en vez del cloruro de benzalconio. Formulaci´ on C del supositorio Esta formulaci´ on se realiza substancialmente de la misma manera que la Formulaci´ on A del supositorio, excepto que se utiliza gluconato de clorhexidina (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios) en vez de cloruro de benzalconio. Formulaci´ on D del supositorio, que contiene povidona yodada (BETADINET M ), a base de glicerol La composici´on y proceso es similar a la una de las descritas anteriormente para la Formulaci´ on A del supositorio, con las siguientes diferencias: se utiliza povidona yodada (BETADINET M ) (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios) en vez de cloruro de benzalconio. Se a˜ naden lentamente, mientras se agita

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perfectamente, los tres agentes antimicrobianos (urea de imidiazolidinilo 1,1 a 11 gramos, urea de diazolidinilo 11 a 1,1 gramos y povidona yodada) a 1 l de una suspensi´on de glicerol a una concentraci´on de 20 - 80 %, en disoluci´ on salina est´eril (0,85 %) 0,15 normal. El pH se hace descender lentamente a unos 6,0 - 6,3 con ´acido l´ actico calidad para reactivos. Esta etapa espesa ligeramente la mezcla. Despu´es de agitar la suspensi´on durante dos horas, 6,0 - 10 gramos de ´acido asc´ orbico, que fueron disueltos en unos 10 - 15 ml de salina est´eril, son a˜ nadidos lentamente con agitaci´on suave. La mezcla es, en este momento, una suspensi´on muy espesa. El pH de la mezcla total se hace entonces bajar a 4,3 - 4,5 con ´acido l´ actico de calidad para reactivos. El material se enfr´ıa r´ apidamente a 0 - 4 grados C mientras se a˜ naden las bacterias encapsuladas reci´en obtenidas, como en los procesos descritos anteriormente, pero en este proceso se a˜ naden normalmente y se mezclan perfectamente unos 600 - 800 mg de bacterias encapsuladas junto con 4 - 6 gramos de lactosa. A diferencia de la composici´on y los procesos descritos anteriormente no se a˜ nade estearato de magnesio ni di´ oxido de silicio. La formulaci´on, en este momento, es muy firme, parecida a una cera suave a 0 - 4 grados C y puede ser f´ acilmente prensada en un molde. Los supositorios resultantes son entonces sellados en contenedores resistentes al aire y a la humedad hasta que sean utilizados. El supositorio de esta composici´on se funde r´apidamente a 37◦C y, por ello, debe tenerse un cuidado especial en mantenerlo fr´ıo durante el almacenaje y antes de su uso. Formulaci´ on E del supositorio (a base de glicerol) Se a˜ naden lentamente, mientras se agita perfectamente, cloruro de benzalconio (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios), urea de imidiazolidinilo (11 a 1,1 g) y urea de diazolidinilo (11 a 1,1 g) a 1 l de una suspensi´ on de glicerol a una concentraci´ on de 20 - 80 % en disoluci´ on salina est´eril 0,15 normal. El pH se hace descender lentamente a unos 6,0 - 6,3 con ´acido l´ actico de calidad para reactivos. Esta etapa ligeramente la mezcla. Despu´es de agitar la suspensi´on durante dos horas, 6,0 - 10 gramos de a´cido asc´orbico, disueltos en unos 10 - 15 ml de salina est´eril, se a˜ naden lentamente con agitaci´ on suave. La mezcla es, en este momento, una suspensi´on viscosa espesa, (similar a la miel espesa en su consistencia). Se a˜ naden luego 11 gramos de nonoxinol 9, y se mezcla perfectamente. El pH de la mezcla total se hace bajar entonces a 4,3 - 4,5 con ´acido l´ actico de calidad para reactivos. El material se enfr´ıa r´ apidamente a 0 - 4 grados C mientras se a˜ naden las bacterias lactobacilos encapsuladas reci´en obtenidas. Normalmente unos 600 800 mg de las bacterias encapsuladas se a˜ naden y se mezclan perfectamente junto con 4 - 6 gramos de lactosa, para obtener un producto final que contiene por lo menos 106 bacterias viables por supositorio. En esta etapa la formulaci´ on es bastante firme, parecida a una cera blanda a 0 4 grados C y puede ser f´ acilmente prensada en un molde. Los supositorios resultantes son entonces sellados en contenedores resistentes al aire y a la humedad hasta que sean utilizados. Durante el

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almacenaje, deben ser protegidos de la humedad y debe tenerse un cuidado especial en mantenerlos fr´ıos, puesto que los supositorios a base de glicerol funden a unos 37◦ C. Formulaci´ on F del supositorio (a base de glicerol) Esta formulaci´ on se realiza substancialmente con el mismo proceso y tiene substancialmente con los mismos componentes que la Formulaci´ on E, excepto que en vez de cloruro de benzalconio se utiliza cloruro de cetilpiridino (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios). Formulaci´ on H del supositorio (a base de glicerol) Esta formulaci´ on se realiza substancialmente con el mismo proceso y tiene substancialmente los mismos componentes que la Formulaci´ on E, excepto que en vez de cloruro de benzalconio se utiliza gluconato de clorhexidina (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios). Formulaci´ on I del supositorio (a base de glicerol) Esta formulaci´ on se realiza substancialmente con el mismo proceso y tiene substancialmente los mismos componentes que la Formulaci´ on E, excepto que en vez de cloruro de benzalconio se utilizar´a polivinilpirrolidona yodada (BETADINET M ) (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios). Formulaci´ on de grandes partidas (formulaci´ on J) En un proceso alternativo “una partida piloto” aproximadamente de 20.000 supositorios se puede realizar en cada recorrido. Cantidades suficientes de cloruro de benzalconio, de urea de imidiazolidinilo y de urea de diazolidinilo para alcanzar una cantidad final de aproximadamente 120 a 1000 mg, 10 a 100 mg y 10 a 100 mg, respectivamente, por supositorio, como se desea, se mezclan conjuntamente con cantidades suficientes de nonoxinol 9 para alcanzar una concentraci´on final de 90 - 110 mg del u ´ltimo en cada supositorio. Los ingredientes antes mencionados son todos a˜ nadidos al mismo tiempo en una cantidad suficiente de una disoluci´ on salina est´eril para hacer, mezclando perfectamente, una pasta espesa. Se a˜ nade a´cido para hacer bajar pH a 4,5. Despu´es de un mezclado perfecto, los lactobacilos encapsulados se a˜ naden, a temperatura ambiente. Los lactobacilos fueron encapsulados utilizando el m´etodo a gran escala descrito como M´etodo E de encapsulaci´ on. La mezcla resultante se mezcla entonces con estearato de magnesio y di´oxido de silicio adecuados para proporcionar la mezcla moldeable y prensada dentro de moldes con ocho libras de presi´ on h´ umeda a 35 - 38 grados C. Normalmente, la concentraci´on de estearato de magnesio y di´ oxido de silicio en la mezcla para permitir lo antes mencionado es del 0,01 al 0,1 % en peso para cada uno de los agentes. Este m´etodo proporciona supositorios estables, pero la viabilidad de los microorganismos var´ıa de partida a partida. Formulaci´ on K del supositorio, con agente antimicrobiano u ´nico Se a˜ nade lentamente, mientras se agita perfectamente, cloruro de benzalconio (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios) a una suspensi´ on de hidroxipropilmetilcelulosa, (40 gramos para una partida de unos 100 supositorios) y celulosa microcristalina (20 gramos para una partida de unos 100 supositorios) en disoluci´ on salina 7

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est´eril normal (cantidad suficiente para hacer una pasta espesa, que es normalmente de 120 ml) a 35 - 37 grados C, el pH se hace descender lentamente a unos 6,0 - 6,3 con ´acido l´ actico de calidad para reactivos. Esta etapa une el antimicrobiano a la base. La mezcla, es en este momento, una pasta muy espesa en su consistencia. Despu´es de esta etapa todas las operaciones se realizan a 0 - 4 grados C. El pH de la mezcla total se hace bajar entonces a 4,3 - 4,5 con la adici´on de a´cido l´ actico de calidad para reactivos. Las bacterias lactobacilos encapsuladas reci´en obtenidas son entonces a˜ nadidas para alcanzar una concentraci´ on final de por lo menos un mill´on de bacterias viables por supositorio. Normalmente esto requiere la adici´on de 4 - 6 veces de un exceso de bacterias encapsuladas (aproximadamente 500 mg) debido a las p´erdidas que se producen durante el proceso. El mezclado r´apido y perfecto es importante porque la humedad afecta adversamente la viabilidad de los organismos. El mezclado puede realizarse por extensi´on de la pasta en una capa delgada sobre una placa de vidrio est´eril y luego utilizando un replicador para extender las bacterias uniformemente sobre la pasta. La exposici´ on a temperaturas de aproximadamente unos 25 grados o superiores afecta adversamente a la viabilidad de las bacterias en el supositorio. A continuaci´on se a˜ naden unos 2 - 4 gramos tanto de estearato de magnesio como de di´oxido de silicio con o sin 2 - 3 gramos de lactosa. Los materiales son todos mezclados perfectamente a 0 - 4 grados C y luego se hacen pasar a un molde y se secan en una jarra de secado al vac´ıo a 0 - 4 grados C. Los supositorios son entonces sellados en contenedores resistentes al aire y a la humedad hasta que sean utilizados. Durante el almacenaje los supositorios deber´ıan ser protegidos de la humedad y de las temperaturas extremas para asegurar la viabilidad de los lactobacilos. Formulaci´ on L del supositorio con agente antimicrobiano u ´nico y en base al glicerol Se a˜ nade lentamente, mientras se agita perfectamente, cloruro de benzalconio (12,5 gramos para una partida de 100 supositorios) a una suspensi´ on de glicerol a una concentraci´ on de 20 80 % en 1 l de una disoluci´ on salina est´eril 0,15 normal. Esta etapa espesa sensiblemente la mezcla. La mezcla es, en este momento, una suspensi´ on espesa y viscosa de consistencia parecida a la miel espesa. El pH de la mezcla entera se hace entonces bajar a 4,3 - 4,5 con ´acido l´ actico de calidad para reactivos. El material se enfr´ıa r´ apidamente a 0 - 4 grados C y se a˜ naden las bacterias reci´en obtenidas de lactobacilos encapsuladas. Para alcanzar una concentraci´ on final m´ınima de un mill´ on de bacterias viables por supositorio, un exceso de 6-8 veces de bacterias encapsuladas (aproximadamente 600 - 800 mg) se a˜ nade y se mezcla perfectamente junto con 4 - 6 gramos de lactosa. La formulaci´ on en esta etapa es muy firme, parecida a una cera blanda a 0 4 grados C, y puede ser f´ acilmente prensada en un molde. Luego los supositorios son sellados en contenedores resistentes al aire y a la humedad hasta que sean utilizados. Formulaci´ on M de grandes partidas Aproximadamente 300 supositorios por par8

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tida piloto se realizaron de acuerdo con este procedimiento, pero el procedimiento puede ser utilizado para un n´ umero mayor o tambi´en menor. Se mezclan conjuntamente cantidades suficientes de cloruro de benzalconio, urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo para alcanzar una cantidad final de 100 a 1.000 mg, 10 a 100 mg y 10 a 100 mg, respectivamente, por supositorio, como se desee con cantidades suficientes de nonoxinol 9 para alcanzar una concentraci´on final de 90 - 110 mg del u ´ltimo en cada supositorio. Los ingredientes mencionados son todos a˜ nadidos al mismo tiempo en una cantidad suficiente a una disoluci´ on salina est´eril para realizar, mediante un mezclado perfecto, una pasta espesa. En una realizaci´on representativa, se a˜ nadieron 30 gramos de cloruro de benzalconio, 2,5 gramos de urea de imidiazolidinilo y 2,5 gramos de urea de diazolidinilo a aproximadamente 50 ml de disoluci´ on salina est´eril a temperatura ambiente. Se a˜ nadi´ o entonces una cantidad suficiente de ´acido asc´ orbico para 100 mg por supositorio (un total de 30,0 gramos) y a continuaci´ on los siguientes materiales: 140 gramos de lactosa (Fast FlowT M ) metilcelulosa (MethocelT M ) 2,5 gramos, a´cido este´arico 10 gramos, gliconato de almid´ on de sodio (TabcoT M ) 10 gramos, citrato de sodio 1,5 gramos, silicio 20 - 60 gramos. Despu´es de que los materiales mencionados fueran mezclados perfectamente, se a˜ nadieron, a temperatura ambiente, los lactobacilos encapsulados (total de 3,0 gramos). Los lactobacilos fueron encapsulados substancialmente seg´ un el m´etodo B de encapsulaci´ on, descrito anteriormente. La mezcla resultante fue prensada en moldes con presi´on ligera a temperatura ambiente utilizando una m´ aquina de estampaci´on a pilas. Ensayado biol´ ogico in vitro e in vivo La realizaci´on preferida del supositorio vaginal de la presente invenci´on realizada substancialmente de acuerdo con los procedimientos descritos en los m´etodos A o B, fue ensayada en cuanto a sus efectos en los siguientes organismos pat´ ogenos y result´ o ser capaz de destruir a estos organismos en concentraciones que son como las obtenidas in vivo durante el uso normal a que est´ a destinado el supositorio. BACTERIAS: Gardnerella vaginalis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (Toxic Shock Toxin Production), Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pnumoniae, Ureaplasma urealyticum, Mobilluncus curtisii y Chlymadia trachomatiis. VIRUS: Virus de inmunodeficiencia humana, Herpes simplex I, Herpes simplex II, Cytomegalovirus (CMV), Hepatitis A, Hepatitis B. LEVADURAS: Candida albicans, Candida parasolosis, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida psuedotropicalis. TRICHOMONAS: Trichomonas vaginalis. Ensayos in vitro e in vivo son adicionalmente descritos como sigue: En los estudios in vitro se utiliz´o un volumen de aproximadamente 30 ml del medio enriquecido

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apropiado para introducir el pat´ ogeno particular a ser ensayado contra el efecto antimicrobiano de un supositorio. Hablando en general, 106 de organismos pat´ogenos en fase log fueron introducidos en el medio, siendo este n´ umero dos o tres veces de mayor magnitud que el n´ umero estimado razonable de organismos pat´ ogenos (de un tipo) al cual una hembra puede estar expuesta en el transcurso de relaciones sexuales con una pareja macho infectada. El volumen de 30 ml por un supositorio se consider´ o una disoluci´ on que tiene por lo menos como mucho, o considerablemente mayor que la diluci´ on de agentes antimicrobianos de un supositorio en la vagina, despu´es de un coito. De acuerdo con ello, se cree que en cuanto se refiere al n´ umero de pat´ ogenos y a la diluci´ on de los agentes antimicrobianos, estos ensayos fueron por lo menos tan rigurosos o m´ as rigurosos que las condiciones que se producen in vivo, esto es, cuando el supositorio de la invenci´on se utiliza de la manera a la que est´ a destinado. Gardnerella vaginalis En ensayos contra la Gardnerella vaginalis, se a˜ nadieron 106 organismos viables de forma doblada de 300 aislados cl´ınicos (pacientes diagnosticadas con vaginosis bacteriana) a caldo de Mueller-Hinton enriquecido. Los supositorios de la invenci´on, el medio y los organismos fueron agitados suavemente a 37 grados C en un incubador o una de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas se aplac´ al´ıcuota cuantitativamente sobre agar de chocolate y se incub´o, a 37 grados, en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas se leyeron a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los 300 aislados cl´ınicos de Gardnerella vaginalis ensayados bajo las condiciones anteriores contra el supositorio de la invenci´on, no se hallaron organismos viables en los intervalos de muestra de 1, 2, 3 y 4 horas. Se obtuvieron aislados cl´ınicos de Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus y Staphylococcus aureus tox´ıgenos, de pacientes ginecol´ogicos utilizando t´ecnicas de laboratorio est´ andar. Los nadieron en aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) se a˜ fase log a caldo de Mueller-Hinton enriquecido. El supositorio vaginal de la invenci´ on, el medio y los organismos fueron agitados suavemente a 37 grados C en un incubador al 10 %. A 1, 2 y 3 horas se aplac´ o una al´ıcuota cuantitativamente sobre agar de chocolate y se inocul´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas se leyeron a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los aislados cl´ınicos de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyogenes y de los 30 aislados cl´ınicos de Staphylococcus aureus tox´ıgenos, no se hall´ o ninguno viable en los per´ıodos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Bacilos gram negativos (bacteria) Se ensayaron aislados cl´ınicos de Escherichia coli (100 aislados), Klebsiella pneumoniae (100 aislados), Shigella dysenteriae (30 aislados) y Salmonella typhi (30 aislados) contra el supositorio vaginal de la presente invenci´ on. Se a˜ nadieron los aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) a caldo de Mueller-Hinton enriquecido. El supositorio vaginal de la invenci´ on, el medio y

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los organismos fueron agitados suavemente a 37 grados C en un incubador de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas se aplac´ o una al´ıcuota cuantitativamente sobre agar de chocolate y se inocul´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas se leyeron a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los aislados cl´ınicos de Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella dysenteriae y Salmonella typhi ensayados bajo las condiciones anteriores contra el supositorio vaginal de la presente invenci´on, no se hallaron organismos viables a los intervalos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Levaduras Se obtuvieron aislados cl´ınicos de Candida albicans (100 aislados), Candida parasolosis (50 aislados), Candidatropicalis (50 aislados), Candida glabrata (50 aislados) y Candida pseudotropicalis (50 aislados) de pacientes ginecol´ogicas con un diagn´ ostico cl´ınico de vaginitis. Se a˜ nadieron los aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) a caldo de Mueller-Hinton enriquecido. El supositorio vaginal de la presente invenci´ on, el medio y los organismos fueron agitados suavemente, a 37 grados C, en un incubador de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas se aplac´ o una al´ıcuota cuantitativamente sobre agar de chocolate y se inocul´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas fueron le´ıdas a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los aislados cl´ınicos de Candida albicans, Candida parasolosis, Candida tropicalis, Candida glabrata y Candidapseudotropicalis ensayados bajo las condiciones anteriores contra el supositorio de la presente invenci´on, no se hallaron organismos viables en los intervalos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Trichomonas vaginalis Se obtuvieron aislados cl´ınicos de Trichomonas vaginalis de pacientes ginecol´ogicas con un diagn´ ostico cl´ınico de vaginitis. nadieLos aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) se a˜ ron a medio enriquecido de Feinstein-Weiberg. El supositorio de la presente invenci´ on, el medio y los organismos fueron suavemente agitados, a 37 grados C, en un incubador de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas una al´ıcuota se a˜ nadi´ o a un medio adicional de Feinstein-Weiberg cuantitativamente y se incub´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Los tubos se leyeron a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los 30 aislados cl´ınicos de Trichomonas vaginalis ensayados bajo las condiciones anteriores contra el supositorio vaginal de la presente invenci´ on, no se hallaron organismos viables en los intervalos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Hemophilus ducreyii Aislados cl´ınicos (30) de Hemophilus ducreyii se obtuvieron de pacientes diagnosticadas con Hemophilus ducreyii y de stocks de laboratorio. nadieLos aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) se a˜ ron a medio enriquecido de Mueller-Hinton. El supositorio de la presente invenci´ on, el medio y los organismos fueron agitados suavemente, a 37 grados C, en un incubador de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas una al´ıcuota se aplac´ o a agar de chocolate enriquecido con Miller-Hinton adicional cuantitativamente, y se incub´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas fueron 9

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le´ıdas a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los aislados cl´ınicos de Hemophilus ducreyii ensayados bajo las condiciones anteriores contra el supositorio de la presente invenci´on, no se hallaron organismos viables en los intervalos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Neisseria gonorrhoeae Se obtuvieron cien (100) de aislados cl´ınicos de Neisseria gonorrhoeae de pacientes ginecol´ogicas con un diagn´ ostico cl´ınico de vaginitis o cervicitis. nadieLos aislados cl´ınicos 106 /ml (1 ml) se a˜ ron a caldo de Mueller-Hinton enriquecido. El supositorio de la presente invenci´ on, el medio y los organismos fueron agitados suavemente, a 37 grados C, en un incubador de CO2 al 10 %. A 1, 2 y 3 horas una al´ıcuota se aplac´ o cuantitativamente sobre agar de chocolate y se inocul´ o a 37 grados en un incubador de CO2 al 10 %. Las placas se leyeron a las 24, 48 y 72 horas. Resultados: De los aislados cl´ınicos de Neisseria gonorrhoeae ensayados bajo las condiciones anteriores contra los supositorios de la presente invenci´ on, no se hallaron organismos viables en los intervalos de muestra de 1, 2 o 3 horas. Pat´ ogenos intracelulares obligatorios La Chlamydia trachomatis, el Herpes simplex II y, m´ as recientemente, el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (HIV) se encuentran efectivamente entre las enfermedades de transmisi´on sexual, si no son las m´as significativas. Todos estos pat´ ogenos son obligados, par´ asitos intracelulares y por ello no se pueden someter a las t´ecnicas de ensayo in vitro descritas anteriormente para los supositorios de la presente invenci´ on. Adem´ as, los antimicrobianos, los espermicidas y otras substancias de los supositorios afectan los sistemas de cultivo de tejido y este factor debe ser tomado en consideraci´on cuando el supositorio de la presente invenci´on es ensayado contra estos pat´ ogenos. As´ı, los ensayos se realizaron de la siguiente manera. Se dej´ o descomponer un supositorio de la presente invenci´on en 30 ml de medio y luego se a˜ nadi´ o a unidades infectivas o bien de virus o bien de chlamydia (106 ) y se incubaron en un incubador de CO2 al 10 % durante una hora a 37 grados C. Las c´elulas se descompusieron por sonificaci´on y luego la totalidad de 30 c de material se centrifug´ o a 5000 x g. Tanto el sobrenadante como el sedimento se inocularon a cepas de c´elulas susceptibles. El supositorio de la presente invenci´ on esterilizado de herpes simplex II, de chlamydia trachomatis, as´ı como de cultivos de HIV por un intervalo de muestra de una hora. estudios de combinaci´ on in vivo e in vitro Se realiz´ o un ensayo para medir el pH intravaginal y los niveles de agentes antimicrobianos durante algunas horas despu´es de la administraci´ on de un u ´nico supositorio de la presente invenci´ on (preparado substancialmente de acuerdo con el procedimiento descrito en los m´etodos A y B). En los ensayos el pH vaginal se midi´ o a tiempo cero (0) y a intervalos de una hora hasta ocho horas despu´es de la inserci´on del supositorio y se obtuvo una al´ıcuota de fluido vaginal del f´ ornix posterior en el tiempo 0 y a intervalos de una hora. Se a˜ nadi´ o la al´ıcuota de fluido vaginal a un tamiz de pat´ ogenos o pat´ogenos potenciales para determi10

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nar el tiempo en que la actividad antimicrobiana intravaginal persistir´ıa. Las pacientes que no tuvieron signos o s´ıntomas de ninguna enfermedad de transmisi´on sexual como se determin´o con una mancha de Gram, gota h´ umeda y el pH del fluido vaginal se seleccionaron para el estudio. De esta manera trece pacientes voluntarias, veinti´ un (21) de treinta y cinco (35) a˜ nos de edad se evaluaron. Despu´es de algunas experiencias, se hall´ o que 200 - 300 µl de fluido del f´ ornix posterior vaginal pod´ıa eliminarse en serie utilizando atracci´on capilar con una pipeta Pasteur est´eril. Se di´ o a cada voluntaria un supositorio a intervalos semanales. Utilizando esta metodolog´ıa, se pudo obtener material adecuado para estudiar de cinco a siete organismos en cada intervalo. Deber´ıa observarse que durante el per´ıodo de estudio (tres semanas) se solicit´o a las voluntarias que evitaran la actividad sexual, por lo menos los cinco d´ıas anteriores al d´ıa de la inserci´on del supositorio El pH vaginal, se midi´ o por medio de papel pH. Una al´ıcuota de 10 µl de fluido vaginal se aplic´o a las reci´en inoculadas “tamizadas” (hecho con una “varilla de vidrio L”) de cada uno de los siguientes organismos sobre agar de chocolate enriquecido: Gardnerella vaginalis, Streptococcus faecalis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Staphyloccocus aureus* *(shock t´ oxico que produce toxinas), Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Shigella dysenteriae, Salmonella typhi; Candida albicans, Vandida parasolosis, Candida tropicalis, Candida pseudotropicalis y Candida glabrata. Resultados: Se mantuvo el pH a 4,5 durante el per´ıodo de ensayo. Los microorganismos anteriores fueron destruidos por las al´ıcuotas de fluido vaginal durante el per´ıodo completo de estudio. Con el fin de evaluar los efectos prolongados de la actividad antimicrobiana sobre los virus y la Chlamydia trachomatis, se a˜ nadi´ o una al´ıcuota de fluido vaginal obtenido como anteriormente a tubos de 10 cc que conten´ıan c´elulas susceptibles o bien de Chlamydia trachomatis, de Herpes simplex tipo II o de HIV a 104 unidades infectivas. Esta mezcla se incub´o durante 1 hora. Entonces las c´elulas se descompusieron con vibraci´on s´onica y el material sobrenadante siguiente a la centrifugaci´ on a 10.000 X g se a˜ nadi´ o a c´elulas susceptibles e incubadas adecuadamente. Bajo estas condiciones, la Chlamydia trachomatis y los virus fueron destruidos por completo. Evaluaci´ on de la seguridad del supositorio de la presente invenci´ on utilizado diariamente durante 60 d´ıas El objetivo de este estudio fue evaluar la tolerancia y cualquier efecto adverso relacionado con el uso del supositorio de la presente invenci´on en pacientes sanas. En el estudio se insert´o a pacientes un supositorio de la invenci´ on diariamente, durante 60 d´ıas, y se tom´o nota de cualquier efecto adverso del uso del supositorio que pudieran experimentar o la paciente o su pareja sexual. La evaluaci´on cl´ınica y subjetiva de estas pacientes incluy´o la presencia o ausencia de irritaciones en la piel, cualquier efecto adverso, des-

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carga incrementada, cambios en la sensibilidad, etc. y el examen microbiol´ogico correspondiente para la evaluaci´on de la flora vaginal as´ı como la evaluaci´on correspondiente de sus parejas sexuales, cuando fuera apropiado para el estudio. Solamente las pacientes entre dieciocho (18) y cuarenta y cinco (45) a˜ nos de edad, mon´ ogamos, sin problemas ginecol´ ogicos de tipo alguno y utilizando un m´etodo anticonceptivo aceptable, participaron en este estudio. Fueron excluidas las pacientes de este estudio que hab´ıan sufrido cualquier hipersensibilidad a cualquiera de los productos del estudio, si requirieron antimicrobianos t´ opicos o sist´emicos durante el tiempo del estudio, si el paciente hab´ıa tenido signos cl´ınicos o de laboratorio de Candidasis, si la paciente ten´ıa lesiones consistentes en infecciones por Herpes simplex tipo II activo, si la paciente tuvo vaginitis atr´ ofica, si la paciente tuvo cervicitis o si la paciente tuvo signos o s´ıntomas consistentes en vaginosis bacteriana. Resultados De las 102 mujeres que utilizaron el supositorio de la presente invenci´ on diariamente, durante sesenta d´ıas, cuatro sufrieron irritaci´ on leve y tres de ellas interrumpieron el uso del producto. Cuatro pacientes sufrieron quejas de irritaci´on por sus parejas. Ninguna paciente sufri´ o cambios en la sensibilidad, interferencias en sus pr´acticas usuales ni descargas adversas. As´ı, todo el supositorio de la presente invenci´on fue bien tolerado en casi toda la poblaci´ on del estudio. La mayor aceptaci´ on del supositorio de la invenci´on frente a otros tipos de m´etodo de barrera para la anticoncepci´ on y la profilaxis puede atribuirse a varios factores. Estos son: los supositorios de la presente invenci´ on se dispersan muy r´ apidamente. La base de los excipientes del supositorio tiene una afinidad con el epitelio vaginal a franjas de pH a´cido medio natural que mantiene el sistema de tamp´on de a´cido l´ actico de la realizaci´ on preferida. Puesto que la afinidad de la base del supositorio al epitelio vaginal, los antimicrobianos, incluyendo el espermicida, no producen irritaci´ on vaginal. El supositorio de la invenci´on no provoca descarga adversa. En general, en la realizaci´ on preferida el supositorio tiene una masa inferior a 2 gramos en comparaci´ on con los 5 gramos usuales de muchas preparaciones espermicidas. Tambi´en, debido a la r´ apida dispersi´ on y adherencia al epitelio, puede ser r´ apidamente biodegradado. Finalmente, existe una acci´ on de detergente d´ebil del espermicida y algunos de los agentes microbianos que ayuda al descenso de las descargas vaginales. Adicionalmente, los supositorios no contienen l´ıpidos (aceites, grasas, etc.) pero si contienen materiales que se adhieren a la b´ oveda vaginal entera. Adem´ as, no se producen quejas de “des´ ordenes” con su utilizaci´on. Evaluaci´ on de la seguridad del supositorio de la presente invenci´ on utilizado en d´ıas alternos durante 60 d´ıas El prop´ osito de este estudio fue evaluar la tolerancia y cualquier efecto adverso de cualquier tipo relacionado con el uso del supositorio de la presente invenci´on en pacientes sanas. En el estudio se insert´o a las pacientes un supositorio de la invenci´on en d´ıas alternos, durante un per´ıodo de

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60 d´ıas y se tom´o nota de cualquier efecto adverso en ellas mismas o en sus parejas sexuales. La evaluaci´on subjetiva y cl´ınica incluy´ o la presencia o ausencia de irritaciones en la piel, cualquier efecto adverso, descarga incrementada, cambios en las sensaciones, etc. y el examen microbiol´ ogico correspondiente para la evaluaci´on de la flora vaginal, as´ı como la evaluaci´on apropiada de sus parejas sexuales, cuando fuera apropiado para el estudio. Las pacientes entre dieciocho (18) y cuarenta y cinco (45) a˜ nos de edad, mon´ ogamos, sin problemas ginecol´ ogicos de tipo alguno, y que utilizaban m´etodos anticonceptivos aceptables participaron en este estudio. Se excluyeron de este estudio las pacientes por las mismas razones que se hab´ıan excluido en el estudio en el que las pacientes usaron un supositorio cada d´ıa durante un per´ıodo de estudio de 60 d´ıas. Resultados De las 119 mujeres que utilizaron el supositorio de la invenci´ on en d´ıas alternos, tres (3) sufrieron irritaci´ on leve. Ninguna de las parejas sexuales de las participantes mostraron reacciones adversas severas o moderadas con el uso del producto. Solamente seis (6) pacientes se quejaron de irritaci´ on por parte de sus parejas. Ninguna paciente se quej´o de cambios en la sensibilidad, de interferencias con sus pr´acticas usuales, o descargas anormales. Efectos del supositorio de la invenci´ on en las incidencias de enfermedades de transmisi´ on sexual Este estudio se destin´o a evaluar la seguridad y efectividad del supositorio de la invenci´on en la prevenci´on de infecciones vaginales en pacientes no mon´ ogamos. Para formar parte en este estudio se tomaron pacientes que hab´ıan mantenido cuatro o m´ as parejas sexuales distintas por a˜ no. Las pacientes tambi´en hab´ıan utilizado una forma efectiva de anticonceptivo que fue definida para los prop´ ositos de este estudio como un dispositivo intrauterino (IUD), anticonceptivos orales, diafragma vaginal, o capuch´ on cervical. Las pacientes participantes en el estudio estaban entre los dieciocho (18) y los cuarenta y cinco (45) a˜ nos de edad y ten´ıan menstruaciones regulares. En el estudio, las pacientes se insertaron un supositorio vaginal de la presente invenci´ on, preferentemente cinco (5) pero no menos que dos (2) minutos antes de la actividad sexual. Las pacientes participantes fueron evaluadas sobre la base de sus respuestas directas relacionadas con la seguridad y la eficacia. Por ejemplo las pacientes respondieron preguntas tales como: ¿Experiment´o cualquier ardor, o sensaciones de estremecimiento, oy´o cualquier problema similar de su pareja?. Fueron preguntadas sobre cualquier cambio en la sensaci´on, tambi´en cualquier efecto en las propiedades “higi´enicas” tales como la presencia de una descarga adversa despu´es del uso del producto. Adem´ as, las pacientes proporcionaron una evaluaci´ on de sus pr´ acticas normales. Las pacientes fueron instruidas en el momento de la entrada al estudio para evaluar la presencia de levaduras, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Gardnerella vaginalis as´ı como una evaluaci´on cualitativa de su flora bacteriana vaginal predominante. Las pacientes tuvieron un ensayo de HIV y VDRL al principio y a 11

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la finalizaci´ on del estudio. Tambi´en, las pacientes experimentaron coloscopia al principio y al final del estudio para evaluar la presencia de Virus Papilloma Humana (HPV). La duraci´ on del per´ıodo de estudio fue de 6 meses. Resultado Resultados subjetivos: De las 168 mujeres estudiadas, cuatro se quejaron de irritaci´ on vaginal y dos se quejaron de irritaci´on en sus parejas. Resultados cl´ınicos: De las 168 mujeres estudiadas, no se hall´ o ninguna que hubiera contra´ıdo Neisseria gonorrhoeae. Las serolog´ıas de HIV y VDRL permanecieron negativas. Se hall´ o que cuatro pacientes hab´ıan contra´ıdo Trichomonas vaginalis, todo lo cual fue asintom´ atico. Cuatro pacientes fueron diagnosticadas de vaginosis bacteriana. Hubo diecis´eis brotes cl´ınicos con Herpes simplex tipo II, entre las cuarenta y tres pacientes con una historial anterior de infecciones de Herpes simplex tipo II. No hubo casos primarios nuevos de Herpes simplex tipo II en las pacientes del estudio sin historiales anteriores conocidos de Herpes simplex tipo II. Ninguna paciente contrajo Chlamydia trachomatis, linfogranuloma ven´ereo o granuloma inguinal. Todas las pacientes fueron colosc´ opicamente normales en la finalizaci´ on del estudio. Si bien esto no es absolutamente concluyente contra la infecci´on con HPV durante el estudio, por lo menos preconcluye el avance de las manifestaciones de infecci´on de HPV durante la utilizaci´ on del supositorio de la presente invenci´on. En relaci´on con este estudio debe notarse que es obviamente dif´ıcil o imposible de cuantificar el riesgo y el tipo de infecci´on potencial en personas no mon´ ogamas sin instruir al paciente y a su pareja sexual antes de cada exposici´on, esto es, por supuesto, imposible. Por lo tanto, dada los historiales anteriores de las pacientes como un control, est´ a claro que el uso del supositorio de la invenci´on antes de iniciar relaciones sexuales reduce estad´ısticamente y de hecho la incidencia de infecci´on por enfermedades transmitidas sexualmente en la poblaci´on de estudio. Debe notarse adem´as que estas participantes que contrajeron la infecci´on durante el estudio admitieron que ellas “no estaban seguras” de que “siempre” hubieran utilizado los supositorios antes del coito. Los efectos del supositorio de la presente invenci´ on en infecciones por recurrent monilia (levadura) El objetivo de este estudio fue investigar la seguridad y eficacia del supositorio de la presente invenci´on en la prevenci´on de infecciones por levaduras en pacientes con historiales de m´ ultiples infecciones vaginales por levaduras. Pacientes con por lo menos cuatro episodios diferentes de infecciones por monilia trimestralmente durante el a˜ no anterior se incluyeron en este estudio. Para los prop´ ositos del estudio, cada episodio de infecci´ on por levadura tuvo que ser precedida, por lo menos durante una semana, de ser totalmente asintom´atica (no quejarse de puritos, infecci´ on o descarga). Adem´ as, el episodio m´as reciente deb´ıa haber seguido por lo menos una semana de ser asintom´ atica. Las pacientes ten´ıan entre dieciocho (18) y cuarenta y cinco (45) a˜ nos de edad. Las pacientes tambi´en ten´ıan 12

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per´ıodos menstruales regulares. Se excluyeron del estudio las pacientes si era conocida cualquier hipersensibilidad a cualquiera de los ingredientes en el producto del estudio. Tambi´en se excluyeron las pacientes del estudio si en el momento de la admisi´on ten´ıan cualquier s´ıntoma cl´ınico y/o microbiol´ ogico de vulvovaginitis. Las pacientes fueron evaluadas sobre la base de sus respuestas directas a preguntas relacionadas con la seguridad y la eficacia de los ex´amenes cl´ınicos. Por ejemplo se les pregunt´o: ¿Ha experimentado cualquier ardor, sensaciones estremecientes o descargas a partir del uso del supositorio?. La duraci´ on del per´ıodo de estudio fue de 6 meses. Las pacientes fueron instruidas bimensualmente si eran asintom´aticas, y tambi´en en cada episodio de cualquier sintomatolog´ıa vaginal. Resultados: Todas las pacientes toleraron el uso en d´ıas alternos del supositorio de la invenci´ on muy bien. Las u ´nicas quejas de irritaci´ on fueron provocados por infecciones por levaduras y durante los intervalos libres de s´ıntomas no hubo quejas atribuibles al uso del supositorio. De las cuarenta (40) pacientes que participaron en este estudio trece (13) tuvieron cuatro episodios de infecciones por levaduras, doce (12) tuvieron tres episodios de infecciones por levaduras y quince (15) tuvieron dos infecciones durante el per´ıodo de estudio. De las trece (13) pacientes que experimentaron cuatro infecciones, cuatro (4) tomaban f´ armacos citot´ oxicos, dos (2) tomaban f´ armacos citot´ oxicos y glucoc´ orticoesteroides, y cuatro (4) tomaban glucoc´ orticoesteroides. Adicionalmente, cuatro (4) pacientes ten´ıan diabetes y eran dependientes de la insulina. Tres estaban tambi´en excesivamente obesas y exced´ıan en m´ as del 50 % el peso corporal ideal. De las doce (12) pacientes con tres episodios de infecci´on, tres (3) tomaban glucoc´ orticoesteroides, dos (2) tomaban agentes citot´oxicos, tres (3) ten´ıan diabetes y eran dependientes de la insulina, y cuatro (4) eran excesivamente obesas. De las especies de levaduras aisladas de ciento dieciocho episodios de infecciones, sesenta fueron de Candida albicans, dieciocho (18) fueron de Candida globrata, cuatro (4) fueron de Candida tropicalis y tres (3) fueron de Candida parasolosis. El resto tubo infecciones mezcladas con diferencias insignificantes entre los respectivos grupos de r´egimen de infecci´on. Discusi´ on: El uso del supositorio de la presente invenci´ on en d´ıas alternos en pacientes con historiales de m´ ultiples infecciones por levaduras redujo de forma substancial la incidencia de la recurrencia en esta poblaci´on de pacientes. Mientras que no fue posible en este grupo de estudio de pacientes con un historial de infecciones recurrentes para eliminar completamente la ocurrencia de infecciones por levaduras, la mayor´ıa de las pacientes que experimentaron tres o cuatro moniliasis tomaban agentes citot´oxicos y/o glucoc´ orticoesteroides. Adicionalmente, las otras condiciones adversas metab´olicamente, como la diabetes o la obesidad excesiva, sin duda contribuy´ o a la naturaleza recalcitrante de su problema con las infecciones por levaduras. Las pacientes sin des´ordenes metab´ olicos, pero que ten´ıan los llamados factores ambientales tales

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como ser muy atl´etico, vestir muy apretado y vestir muy reducido tuvieron infecciones a un ritmo menor. Fue de inter´es que todas menos cinco de estas pacientes, entre dos semanas despu´es de la interrupci´ on de la administraci´on del supositorio de la invenci´on, no tuvo ya m´ as lactobacilos como flora bacteriana predominante. Estos datos significan

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que hay m´ ultiples factores implicados en pacientes con episodios recurrentes de infecciones por levaduras. Por lo menos uno de estos factores en pacientes con este problema parece ser la inhabilidad de los lactobacilos a restablecerse ellos mismos, como la flora vaginal predominante, y este factor es alta y beneficiosamente influenciado con el supositorio vaginal de la presente invenci´ on.

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REIVINDICACIONES 1. Pesario vaginal que comprende: una cantidad efectiva, de un agente antimicrobiano farmac´euticamente aceptable y utilizable t´ opicamente; por lo menos de aproximadamente 103 bacterias viables de la especie Lactobacillus acidophilus o de su variante Lactobacillus rhamnosus, estando dichas bacterias microencapsuladas por lo que las bacterias permanecen viables durante el almacenaje de los pesarios a pesar de la presencia del agente antimicrobiano, siendo tal la substancia que proporciona el recubrimiento de encapsulaci´on de las bacterias que libera las bacterias despu´es de una exposici´on prolongada a la humedad en el medio vaginal, y

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10. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento que comprende polivinilpovidona. 11. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1 que comprende adem´ as una cantidad de a´cido asc´orbico efectiva para incrementar la viscosidad del moco cervical. 12. Supositorio vaginal que comprende: una cantidad efectiva, de un agente antimicrobiano farmac´euticamente aceptable y utilizable t´ opicamente;

un excipiente farmac´euticamente aceptable, incorporado perfectamente al agente antimicrobiano y a las bacterias microencapsuladas. 2. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, que comprende adem´ as una cantidad efectiva de agente espermicida. 3. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, que comprende adem´ as una cantidad efectiva de un sistema tamp´ on farmac´euticamente aceptable, que tampona el pH del pesario en la franja de 3,0 a 5,0. 4. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 3, caracterizado porque el sistema de tamponado tampona en la franja de 4,3 a 4,5. 5. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque el agente antimicrobiano est´a seleccionado del grupo que consiste en cloruro de benzalconio, cloruro de metilbencetonio, cloruro de cetilpiridinio, bromuros de alquiltrimetilamonio, gluconato de clorhexidina y povidona yodada. 6. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, que comprende una mezcla de por lo menos tres agentes antimicrobianos, uno de los cuales est´ a seleccionado del grupo que consiste en cloruro de benzalconio, cloruro de metilbencetonio, cloruro de cetilpiridinio, bromuros de alquiltrimetilamonio, gluconato de clorhexidina y povidona yodada, y siendo los otros dos agentes antimicrobianos urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo. 7. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento de alginato de sodio. 8. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento de copol´ımero de a´cido acr´ılico metacr´ılico. 9. Pesario vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 1, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento que comprende polivinilpirrolidona y divinilbenceno.

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por lo menos aproximadamente 103 bacterias viables de las especies Lactobacillus acidophilus o de su variante Lactobacillus rhamnosus, estando dichas bacterias microencapsuladas por lo que las bacterias permanecen viables durante el almacenaje de los supositorios a pesar de la presencia del agente antimicrobiano, siendo tal la substancia que proporciona el recubrimiento de encapsulaci´on de las bacterias que libera las bacterias despu´es de una exposici´on prolongada a la humedad en el medio vaginal, y un excipiente farmac´euticamente aceptable, incorporado perfectamente al agente antimicrobiano y a las bacterias microencapsuladas. 13. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 12, que comprende adem´ as una cantidad efectiva de agente espermicida seleccionado del grupo que consiste en nonoxinol 9 o octoxinol 9. 14. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 13, que comprende adem´ as una cantidad efectiva de sistema tamp´on farmac´euticamente aceptable que tampona el pH del supositorio en la franja de 3,0 a 5,0. 15. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 14, caracterizado porque el sistema de tamponado tampona en la franja de 4,3 a 4,5. 16. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 15, caracterizado porque el agente antimicrobiano est´ a seleccionado del grupo que consiste en cloruro de benzalconio, cloruro de metilbencetonio, cloruro de cetilpiridinio, bromuros de alquiltrimetilamonio, gluconato de clorhexidina y povidona yodada. 17. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 16, que comprende una mezcla de por lo menos tres agentes antimicrobianos, uno de los cuales est´a seleccionado del grupo que consiste en cloruro de benzalconio, cloruro de metilbencetonio, cloruro de cetilpiridinio, bromuros de alquiltrimetilamonio, gluconato de clorhexidina, povidona yodada, y siendo los otros dos agentes antimicrobianos urea de imidiazolidinilo y urea de diazolidinilo. 18. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 17, que comprende por lo menos 106 bacterias viables de las especies Lactobacillus acidophilus o de su variante Lactobacillus rhamnosus. 19. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 18, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an

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encapsuladas dentro de un recubrimiento de alginato de sodio. 20. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 18, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento de copol´ımero de a´cido acr´ılico metacr´ılico. 21. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´on 18, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento que comprende polivinilpirrolidona y divinilbenceno. 22. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´on 18, caracterizado porque las bacterias Lactobacillus acidophilus o Lactobacillus rhamnosus est´an encapsuladas dentro de un recubrimiento que comprende polivinilpovidona. 23. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 12, que comprende de 12 a 3000 mg de cloruro de benzalconio o de cloruro de metilbencetonio, o de 25 a 4000 mg de cloruro de cetilpiridinio o de 10 a 2000 mg de gluconato de clorhexidina, o de 25 a 5000 mg de povidona yodada. 24. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 12, que comprende aproximadamente de 10 a 1000 mg de urea de imidiazolidinilo o de urea de diazolidinilo. 25. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 12, que comprende aproximadamente de 50 a 500 mg de nonoxinol 9 o octoxinol 9. 26. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 12, que comprende adem´ as una cantidad efectiva de ´acido asc´ orbico para incrementar la viscosidad del moco cervical. 27. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 26 que comprende 40-120 mg de ´acido asc´orbico. 28. Supositorio vaginal que comprende: una cantidad efectiva, de un agente antimicrobiano farmac´euticamente aceptable y utilizable t´ opicamente seleccionado del grupo que consiste en cloruro de benzalconio en la cantidad de 12 a 3000 mg, cloruro de metilbencetonio en la cantidad de 12 a 3000 mg, cloruro de cetilpiridinio en la cantidad de 25 a 4000 mg, bromuros de alquiltrimetilamonio en la cantidad de 25 a 4000 mg, gluconato de clorhexidina en la cantidad de 10 a 2000 mg, y povidona yodada en la cantidad de 25 a 5000 mg;

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acidophilus o de su variante Lactobacillus rhamnosus, estando dichas bacterias microencapsuladas por lo que las bacterias permanecen viables durante el almacenaje del supositorio a pesar de la presencia de los agentes antimicrobianos, siendo tal la substancia que proporciona el recubrimiento de encapsulaci´on de las bacterias que libera las bacterias despu´es de una exposici´on prolongada a la humedad en el medio vaginal, y

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un excipiente farmac´euticamente aceptable, incorporado perfectamente al agente antimicrobiano y a las bacterias microencapsuladas.

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29. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 28, caracterizado porque el agente antimicrobiano es cloruro de benzalconio y porque cada supositorio contiene aproximadamente 120 mg de cloruro de benzalconio. 30. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 28, caracterizado porque el agente antimicrobiano es cloruro de cetilpiridinio y porque cada supositorio contiene aproximadamente de 50 a 1000 mg de cloruro de cetilpiridinio. 31. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 28, caracterizado porque el agente antimicrobiano es gluconato de clorhexidina y porque cada supositorio contiene aproximadamente de 25 a 1200 mg de gluconato de clorhexidina. 32. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 28, caracterizado porque el agente antimicrobiano es povidona yodada y porque cada supositorio contiene aproximadamente 120 mg de povidona yodada. 33. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 28, caracterizado porque las bacterias son Lactobacillus rhamnosus y las bacterias est´an encapsuladas en un recubrimiento seleccionado del grupo que consiste en recubrimiento de alginato de sodio, recubrimiento de copol´ımero de a´cido acr´ılico metracr´ılico, recubrimiento de divinilbenceno y recubrimiento de polivinilpovidona. 34. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 30, que tiene una masa total aproximada de aproximadamente 1,2 gramos. 35. Supositorio vaginal seg´ un la reivindicaci´ on 33 que comprende hidroxipropilmetilcelulosa y di´ oxido de silicio como excipientes.

de 10 a 1000 mg de urea de imidiazolidinilo; de 10 a 1000 mg de urea de diazolidinilo;

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de 50 a 500 mg de nonoxinol 9 o octoxinol 9; de 40 a 120 mg de ´acido asc´orbico; una cantidad efectiva de un sistema tamp´ on farmac´euticamente aceptable que tampona el pH del supositorio en la franja de 4,3 a 4,5; por lo menos aproximadamente 103 bacterias viables de la especie Lactobacillus

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici´ on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci´ on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa˜ na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir´ an ning´ un efecto en Espa˜ na en la medida en que confieran protecci´ on a productos qu´ımicos y farmac´euticos como tales.

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Esta informaci´ on no prejuzga que la patente est´e o no inclu´ıda en la mencionada reserva.

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