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OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

11 Número de publicación: 2 247 372

51 Int. Cl. : A61K 9/00

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A61K 31/195 A61K 47/36 A61P 27/04

ESPAÑA

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TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA

T3

86 Número de solicitud europea: 02765328 .6

86 Fecha de presentación : 22.07.2002

87 Número de publicación de la solicitud: 1408929

87 Fecha de publicación de la solicitud: 21.04.2004

54 Título: Composición oftálmica que contiene N-acetilcisteína para el tratamiento del síndrome de ojos secos.

30 Prioridad: 23.07.2001 IT RM20010438

73 Titular/es: FARMIGEA S.p.A.

Via G.B. Oliva, 6/8 56121 Pisa, IT

45 Fecha de publicación de la mención BOPI:

01.03.2006

72 Inventor/es: Boldrini, Enrico;

Saettone, Marco, Fabrizio; Chetoni, Patrizia; Burgalassi, Susi y Giannaccini, Boris

45 Fecha de la publicación del folleto de la patente:

74 Agente: Durán Moya, Carlos

ES 2 247 372 T3

01.03.2006

Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid

ES 2 247 372 T3 DESCRIPCIÓN Composición oftálmica que contiene N-acetilcisteína para el tratamiento del síndrome de ojos secos. 5

La presente invención se refiere a un compuesto oftálmico que contiene N-acetil-cisteína para el tratamiento de ojos secos o síndrome de queratoconjuntivitis seca. Más particularmente, la invención se refiere a composiciones que contienen N-acetil-cisteína como ingrediente activo, que son adecuadas para administración tópica en forma de gotas oculares porque son isotónicas con el fluido lacrimal gracias a la presencia de un agente neutralizante de la N-acetilcisteína que no tiene efectos adversos en la osmolaridad de la composición.

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Tal como es conocido, la película preocular de lágrimas es una estructura de líquido organizada que cubre la conjuntiva y la superficie expuesta del globo ocular. En condiciones normales, la película lacrimal aparece como estructura compleja de tres capas, consistente en: 15

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• una capa mucosa interna, compuesta por una mezcla de glicoproteínas (mucina) producida por células especializadas (células goblete) presentes en el epitelio conjuntivo, cuya capa se adhiere al epitelio corneoconjuntivo formando una superficie hidrofílica. • una capa acuosa intermedia abundante, superpuesta a dicha superficie hidrofílica, rica en oxígeno y compuesta esencialmente de agua, electrólitos, proteínas, encimas y mucina, que tiene función trófica, de defensa, vehicular y óptica. • una delgada capa externa de lípido que actúa principalmente para regular la velocidad de evaporación del agua de la película lacrimal.

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La mencionada estructura de tres capas constituye una compleja estructura fisiológica, cuyas funciones principales son las de proteger la superficie del ojo, manteniendo la hidratación, lubrificación y limpieza de la superficie córnea, y cooperando en la producción de la apropiada visión ocular. El perfecto equilibrio y continua renovación de este sistema fisiológico es una condición necesaria para que cumpla sus funciones. Para que ello tenga lugar, debe existir, en primer lugar, una constante pero no excesiva evaporación de agua del fluido lacrimal, de manera que mantiene la osmolaridad alrededor de un valor fisiológico de 300 mOsm/kg, y la película lacrimal debe ser redistribuida de manera continua sobre la superficie de la córnea por el parpadeo. Varias situaciones patológicas o anómalas en el ojo aparecen por la discontinuidad o las alteraciones de la película lacrimal, como resultado, por ejemplo, de un ritmo inadecuado de parpadeo, utilización prolongada de lentes de contacto, utilización de ciertos medicamentos farmacéuticos sistémicos o por hiposecreción senil. En este contexto, el término “síndrome de ojos secos”, se considera que significa un conjunto de manifestaciones patológicas del área ocular, caracterizado por la reducción y/o composición alterada de la película lacrimal, si bien de manera más apropiada las alteraciones características de la superficie córnea que son producidas de esta manera se identifican con el término queratoconjuntivitis seca. Tal como puede demostrarse evidente, el síndrome de ojos secos es un desorden clínico difícil de definir en lo que respecta a su frecuencia, porque no siempre es identificado debido a su sintomatología y objetividad frecuentemente blanda y no específica. (Lemp M.A., Recent developments in dry eye management, Ophthalmology 10, 1299-304 (1997); Lemp M.A., Dry eye syndromes: treatment and clinical trials. Adv. Exp’. Med. Biol., 350 553-9 (1994); Lemp M.A., Epidemiology and classification of dry eye, Adv. Exp. Med. Biol., 438, 791-803 (1998)). Un paciente con síndrome de ojos secos presenta desórdenes tales como enrojecimiento conjuntivo, dificultad en abrir los párpados al despertarse, sensación ardiente, punzante y arenosa, sensación de cuerpos extraños y también de fotofobia. Las posibles complicaciones están comprendidas entre queratopatía con disepitelización superficial hasta queratitis infecciosa, e incluso serias patologías degenerativas infecciosas de la córnea. Desde el punto de vista del diagnóstico, además de una evaluación de sus propios tipos de síntomas, el síndrome de ojos secos se puede identificar y controlar por procesos consolidados, siendo los más habituales la medición de la producción de lágrimas (prueba Shirmer), tiempo de rotura de la película laminar (BUT) después de parpadeo y evaluación del manchado de la superficie del ojo utilizando rosa bengala o fluoresceína. Además, se puede tomar el valor de la osmolaridad de las lágrimas como parámetro objetivo del estado patológico sometido a examen, habiéndose demostrado que en condiciones patológicas, este valor aumenta en 340-40 mOsm/kg como promedio. Los posibles factores etiológicos son muchos. En algunos casos, no es posible, incluso con investigaciones de laboratorio y equipos sofisticados, identificar la causa de este síndrome; en este caso, se habla en términos de “forma esencial”, que es tratable exclusivamente como síntoma. En vista del hecho de que las alteraciones de la película lacrimal pueden tener diferentes interpretaciones patológicas y enfoques terapéuticos dependiendo del tipo del componente lacrimal que se encuentra alterado, una fase fundamental consiste en evaluar si la anomalía está situada en el componente de la superficie de lípido, en la capa acuosa o en la interior mucínica (Miglior M., Troiano P., Lacrimal fil pathologies; classification and rationale of the therapy, In Symposium on the Lacrimal System, Toronto, 25 de junio de 1994, editado por Hurwitz J. y otros, Kugler & Ghedini Publ., (1995)), para sacar conclusiones más apropiadas desde el punto de vista terapéutico. La alteración del componente lípido externo, que en sí mismo no es un caso muy frecuente, se debe usualmente a blefaritis, y se debe tratar como tal. En el caso más frecuente de que la capa acuosa intermedia está alterada, esta 2

ES 2 247 372 T3 alteración consiste siempre en una reducción cuantitativa de este componente, asociado a evaporación excesiva, que conduce al incremento antes mencionado de osmolaridad lacrimal. En este caso, son indicadas las composiciones específicas de gotas oculares, conocidas como “lágrimas artificiales”, en formulaciones ricas en agua y con pocos o ningún agente mucomimético, posiblemente asociadas con lentes de contacto con baja hidratación corneal. 5

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Cuando la alteración tiene lugar en la capa interna de mucina, entonces el caso es especialmente delicado. Es sabido que la integridad de la capa de mucina es uno de los factores esenciales en el mantenimiento de la estabilidad de la película lacrimal porque la mucina mejora la humectabilidad de la superficie corneal, permite que la película acuosa se adhiera de manera continuada y homogénea a la superficie expuesta, asegurando la estabilidad, incrementa la viscosidad de la fase fluida, impidiendo un flujo demasiado rápido desde el saco conjuntivo. En lo que respecta en las alteraciones de la capa de mucina, se ha informado (Miglior M. y otros, loc. cit.) que pueden aparecer con un déficit de mucus o un exceso. Cuando la mucina se encuentra ausente o es insuficiente, la córnea resulta no humectable y, debido al desequilibrio entre los electrólitos y las glicoproteínas presentes, la película lacrimal resulta inestable y puede romperse, produciendo áreas secas. En el segundo caso, un exceso de mucina se coagula en forma de hilos que dificultan la humectabilidad superficial ocular y conducen a la formación de áreas secas y a daños en el epitelio corneal. También, en esta situación, es posible intervenir a nivel ocular tópico utilizando las “lágrimas artificiales” adecuadamente formuladas, con la adición de integradores apropiados del componente de mucina y de agentes mucomiméticos (es decir, varios derivados de la celulosa, polivinil derivados tales como polivinilpirrolidona y alcohol polivinílico, varios polisacáridos y sus derivados, tales como dextrano, ácido hialurónico, sulfato de condroitina, etc.) o, en caso de un exceso del componente de mucina, utilizando agentes mucolíticos tal como N-acetil-cisteína. De manera más específica, para la reducción de la mucosa lacrimal y su fluidificación, se prescribe principalmente N-acetil-cisteína tanto para administración tópica como sistémica. De manera alternativa, se pueden utilizar otros mucolíticos, tales como carboximetil cisteína, bromexina y ambroxol (estos dos últimos con una acción estimuladora de la secreción poco definida) para administración sistémica. Los primeros de los ingredientes activos antes mencionados, que tienen la siguiente fórmula estructural, NHCOCH3 | HSH2 C — HC — COOH | H son un derivado del aminoacido natural L-cisteína que se demuestra clínicamente útil como agente mucolítico en patologías broncopulmonares agudas y crónicas, y por lo tanto se prescribe principalmente para estos desórdenes, utilizando principalmente una administración sistémica. Esta molécula se considera que ejerce su actividad al “romper” los enlaces de disulfuro (S-S) del mucus, reduciendo por lo tanto su viscosidad. En el ojo, la soluciones de N-acetilcisteína pueden disolver los hilos de mucus, reduciendo de esta manera la viscosidad lacrimal. La N-acetil-cisteína (a la que también se hará referencia a continuación como N-AC) es un ácido relativamente fuerte y no puede ser aplicada directamente a la superficie ocular propiamente dicha, sino solamente después de haber sido adecuadamente neutralizado. Por ejemplo, una solución acuosa al 4% de N-AC tiene un pH de 1,90, y antes de que pueda ser utilizada es gotas para los ojos, la forma ácida debe ser neutralizada, por ejemplo con NaOH, a efectos de proporcionar la correspondiente sal sódica y llevar el pH dentro de una gama fisiológicamente tolerada por el ojo humano. No obstante, la necesaria neutralización tiene el inconveniente de incrementar la osmolaridad de la solución resultante que pasa de un valor original de 241 mOsm/kg a valores que corresponde a elevada hipertonicidad. A este respecto, la Patente italiana Nº1 151 755 (Bruschettini s.r.l.) describe una composición de gotas para los ojos que contiene N-AC, en la que el ingrediente activo es suplementado con un fostato disódico tampón y una cantidad de bicarbonato sódico suficiente para llevar la solución a un pH en una gama de 6,6-7,0. Aunque el documento no destaca ningún inconveniente resultante en cuanto a tolerancia, representa la hipertonicidad como característica fundamental de la formulación propuesta. Otra formulación basada en N-acetil-cisteína para utilización oftálmica tópica es la que se describe en la Patente EP-A-0 551 848 (Zambon Group S.p.A.), en la que la solución N-AC, preferentemente al 4% en peso, es asociada con alcohol polivinílico a efectos de obtener un producto de actividad mejorada para el tratamiento de la queratoconjuntivitis seca. En este caso, el documento no informa sobre valores de osmolaridad presentados por las formulaciones propuestas, pero es evidente de las composiciones correspondientes que son formulaciones fuertemente hipertónicas.

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En la actualidad, las gotas oculares disponibles comercialmente basadas en N-AC presentan valores de osmolaridad mucho más elevados que el valor “fisiológico” de 300 mOsm/kg. Estos valores son >1000 mOsm/kg para el producto comercializado con el nombre comercial Brunac® (Bruschettini s.r.l., que contiene 5% N-AC), y alrededor de 900 mOsm/kg para el producto Tirocular® (ACRAF S.p.A, conteniendo 4% de N-AC). Tal como se ha indicado anteriormente en lo que respecta a la importancia de evitar una excesiva hipertonicidad de la película lacrimal, es evidente que las formulaciones antes mencionadas pueden ser irritantes y potencialmente perjudiciales para la superficie de la córnea. Esto es más acentuado si se considera que el fluido lacrimal de pacientes con síndrome de ojos secos es ya hipertónico y, por lo tanto, el tratamiento correspondiente no debe agravar este estado administrando preparados hiper3

ES 2 247 372 T3 tónicos. Es por estas mismas consideraciones que las lágrimas artificiales son producidas en formulaciones isotónicas o, preferentemente, hipotónicas (Holly F. J., Lamberts D.W., Effect of nonisotonic solutions on tear filmosmolality. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 20, 236 (1981)). 5

Considerando asimismo la posibilidad de neutralizar la acetilcisteína con bases orgánicas distintas de la base inorgánicas NaOH, se obtienen soluciones fuertemente hipertónicas, tales como se muestran en los siguientes ejemplos. Neutralización con hidrato sódico

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N-AC

5,00 g

Polímero incrementador de la viscosidad

1,00 g

NaOH

1,18 g

H2 O destilada estéril

cantidad hasta 100 ml

pH=7,00

Osmolaridad= 644 mOsm/kg

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Neutralización con L-lisina 25

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N-AC

5,00 g

L-lisina

4,50 g

Acetato sódico

0,10 g

Polímero para aumento de viscosidad

2,00 g

H2 O destilada estéril

cantidad hasta 100 ml

pH=7,00

Osmolaridad= 620 mOsm/kg

Neutralización L-arginina 40

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N-AC

5,00 g

L-arginina

6,20 g

Acetato sódico

0,10 g

Polímero para aumento de viscosidad

2,00 g

H2 O estéril

cantidad hasta 100 ml

pH=7,00

Osmolaridad= 656 mOsm/kg

Neutralización L-istidina 55

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N-AC

4,00 g

L-istidina

8,00 g

H2 O estéril

cantidad hasta 100 ml

pH= 6,50

Osmolaridad= 409 mOsm/kg

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4

ES 2 247 372 T3 Neutralización L-metilglucamina

5

10

N-AC

4,00 g

L-metilglucamina

3,40 g

H2 O estéril

cantidad hasta 100 ml

pH= 7,30

Osmolaridad= 490 mOsm/kg

Neutralización con carbonato sódico de L-glicina 15

N-AC

4,00 g

carbonato sódico de L-glicina

3,60 g

H2 O estéril

cantidad hasta 100 ml

20

pH= 7,20

25

Osmolaridad= 1636 mOsm/kg

Neutralización con L-glucamina N-AC

4,00 g

L-glucamina

4,80 g

H2 O estéril

cantidad hasta 100 ml

30

pH= 7,30

Osmolaridad= 631 mOsm/kg

35

Los ejemplos anteriores muestran que los neutralizadores farmacéuticos habitualmente utilizados llevan a formulaciones considerablemente hipertónicas en casos de 5% ó 4% de N-acetil-cisteína, y ambos en presencia o ausencia de un polímero que aumenta la viscosidad. 40

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Teniendo en cuenta lo anterior, es un objetivo de la presente invención dar a conocer un compuesto farmacéutico basado en acetilcisteína para utilización oftámilca tópica, que se puede utilizar ventajosamente en preparados mucolíticos activos para el tratamiento del síndrome de ojos secos sin presentar los inconvenientes de poca tolerancia o toxicidad para tejidos oculares que se asocian normalmente a valores bajos de pH y, sobre todo, a valores de osmolaridad mucho más elevados que los fisiológicos. De manera más específica, el preparado oftálmico, si bien explotando las propiedades mucolíticas de la acetilcisteína, debe ser químicamente próximo a estado neutro y, al mismo tiempo, debe ser isotónico o preferentemente hipotónico. Con este objetivo, la presente invención propone la neutralización de la acetilcisteína con un agente de base que aunque contribuya positivamente al comportamiento global de la formulación como lágrimas artificiales, contribuye poco a la tonicidad, permitiendo, por lo tanto, obtener soluciones de N-AC que son isotónicas, o incluso hipotónicas, con el fluido lacrimal.

60

Dentro del ámbito de los estudios que han conducido a la presente invención, se ha descubierto que un derivado policatiónico de dextrano, el dietilaminoetil-dextrano (DEAE-dextrano), que contiene grupos dietilaminoetilo enlazados con fracciones de glucosa del esqueleto de dextrano con intermedio de enlaces éter que son excepcionalmente estables a la hidrólisis de ácidos, es sorprendentemente eficaz en la neutralización de la acidez de N-acetil-cisteína, formando su correspondiente sal, sin contribuir de manera apreciable a la tonicidad de la solución resultante. Al mismo tiempo, la formulación obtenida neutralizando N-AC con el derivado policatiónico de dextrano incorpora ya un polímero de aumento de la viscosidad, cuya presencia, tal como se ha indicado, es ventajosa en muchos desórdenes relacionados con el síndrome de ojos secos.

65

El DEAE-dextrano, que ya es conocido y utilizado en medicina para el tratamiento de la hipercolesteralemia y en general como antilipérmico (Patentes USA 3.627.872 y 4.160.826), se obtiene haciendo reaccionar la 2-cloroetildietilamina, en solución alcalina, con dextrano, un polisacárido cuya fórmula estructural se puede mostrar, tal como sigue:

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ES 2 247 372 T3

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Como polisacárido inicial, el derivado de dietilaminoetilo se compone de unidades de glucopironosa enlazadas principalmente por enlaces 1→6, mientras que un número pequeño de enlaces 1→3 (y, en mejor medida, enlaces 1→2 y 1→4) son responsables de la ramificación lateral. El peso molecular promedio es aproximadamente de 500.000 y el contenido de nitrógeno es aproximadamente de 3,2%, lo que corresponde a un grupo catiónico para cada tres unidades de glucosa. De manera similar al sulfato de dextrano, el DEAE-dextrano es un polielectrólito y sus propiedades difieren considerablemente del polímero-dextrano inicial. Al ser un producto policatiónico, el DEAE-dextrano se encuentra normalmente a disposición comercial en forma salificada del correspondiente cloruro o sulfato. La forma de base libre, necesaria como reactivo inicial para neutralizar la N-acetil-cisteína tal como se ha propuesto según la presente invención, se puede preparar, por ejemplo, a partir de cloruro de DEAE-dextrano (o sulfato) por tratamiento mediante resinas de intercambio iónico, de acuerdo con el método siguiente. Se coloca una resina de intercambio iónico (DOWEX 1x8,30 ml)en una columna y se trata con 0,1 N NaOH a efectos de hidratarlo y activarlo. A continuación, se hace pasar 1 N NaOH por la resina. La resina es lavada a continuación de manera prolongada en agua para eliminar el exceso de NaOH y se introduce en la columna 5% de solución en HCL de DEAE-dextrano. La solución de la columna, que contiene la base de DEAE-dextrano, es concentrada por evaporación a presión reducida y a continuación es secada. Para determinar la capacidad de neutralización de la N-acetil-cisteína con la cual se debe formular, el producto en forma de base libre tal como es obtenido, en caso necesario, a partir de la operación anterior es titulado con 0,1 N HCl. Esta operación, que permite una determinación preventiva del número de equivalentes químicos contenidos en la unidad de masa del agente neutralizante, se puede llevar a cabo, por ejemplo, por “titulación de retorno” en la que a una cierta cantidad de la base de DEAE-dextrano disuelta en agua destilada se añade, en primer lugar, un exceso de ácido fuerte (HCl) y a continuación el exceso de ácido fuerte es titulado con una base fuerte (NaOH). Los valores de pH, medido por vía potenciométrica, obtenidos con esta operación, se indican en uno de los diagramas adjuntos. A título de ejemplo y con referencia a ciertas realizaciones específicas de la invención, la figura 1 muestra una curva de titulación de la base DEAE-dextrano utilizada en el compuesto de la presente invención; la figura 2 muestra los resultados de la prueba Schírmer en una evaluación de la actividad del compuesto en un modelo experimental de síndrome de ojos secos en el conejo; y la figura 3 muestra los resultados de la observación con lámpara ranurada de la córnea después de manchado con fluoresceína sódica en el mismo modelo experimental en conejos.

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Dejando temporalmente aparte las dos figuras referentes a la experimentación de aplicación de los compuestos de la invención, que serán tratadas más adelante, y haciendo referencia nuevamente a la titulación de la base DEAEdextrano, la figura 1 muestra la curva potenciométrica obtenida cuando se utiliza el proceso antes mencionado para tratar 0,08 g de la base DEAE-dextrano disuelta en 5 ml de agua destilada, a la cual se añadió 5,0 ml de N/10 HCl. La titulación potenciométrica del HCl en exceso con NaOH en la que los valores de pH progresivamente obtenidos están indicados en el diagrama, mostró que el punto de inflexión en pH 7,0 es alcanzado después de añadir 3,6 ml de solución básica. Por lo tanto, 1,4 ml (5,0-3,6) de N/10 Hcl, es decir, 0,14 mEq neutralizaron 0,08 g de base de DEAE-dextrano. Esto permite la evaluación del peso equivalente del reactivo policatiónico sometido a estudio como 0,14/0,08=1,75 mEq/g. 6

ES 2 247 372 T3 Teniendo en cuenta lo anterior, resulta por lo tanto posible realizar fácilmente una formulación basada en N-AC en la que este ingrediente activo es neutralizado por una proporción adecuada de base de DEAE-dextrano que, tal como se preverá más claramente en los siguientes ejemplos, no penaliza la osmolaridad del compuesto sino que permite la obtención de soluciones oftálmicas que son también ventajosamente isotónicas. 5

10

Por lo tanto, la presente invención proporciona de manera específica un compuesto oftálmico basado en acetilcisteína para administración en forma de gotas oculares, conteniendo N-acetil-cisteína neutralizada con base de DEAEdextrano y poseyendo una osmolaridad fisiológicamente aceptable. De manera más específica, tal como es sabido, dicha osmolaridad es menor de 320 mOsm/kg, y preferentemente menor de 300 mOsm/kg, mientras que el pH del compuesto está comprendido entre 6,0 y 7,5, y se encuentran preferentemente en una gama de 6,2-7,0. Las características antes mencionadas permiten conseguir soluciones que pueden ser administradas en forma de gotas oculares adecuadas para el tratamiento del síndrome de ojos secos, conteniendo preferentemente las soluciones de 3 a 5% en peso de N-acetil-cisteína neutralizada con una cantidad comprendida entre 9% y 15% en peso de la base DEAEdextrano.

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Las formulaciones según la presente invención son preparadas de modo conveniente como solución o como suspensión acuosa en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable, y pueden contener uno o varios de los otros ingredientes posibles conocidos en tecnología farmacéutica para este tipo de preparados. En particular, además de Nacetil-cisteína y DEAE-dextrano, las formulaciones pueden contener también cantidades menores de otros polímeros que aumentan la viscosidad, tales como los citados como referencias a la técnica anterior y alguno de los cuales se han informado en las formulaciones que se adjuntan más adelante a título de ejemplo. Tal como es habitual, los compuestos pueden contener otros adyuvantes entre los que se pueden indicar los agentes quelatantes, antimicrobianos y conservantes, si bien estos últimos se evitan normalmente en las gotas oculares, si es posible, utilizando envases con dosis unitarias sin conservantes.

25

Algunas realizaciones específicas de los compuestos oftálmicos según la presente invención, así como algunos datos experimentales referentes al comportamiento de estos compuestos y comparación con la técnica anterior, se indican en los ejemplos siguientes. 30

Ejemplo 1 Teniendo en cuenta las proporciones equivalentes ya determinadas tal como se ha descrito anteriormente, se produce un preparado hipotónico basado en N-acetil-cisteína y en DEAE-dextrano con la siguiente formulación:

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N-AC Base DEAE-dextrano Agua Destilada Estéril H2 O

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pH = 6,18;

4,0 g 12,0 g Hasta 100 ml

Osmolaridad = 245 mOsm/Kg

Para la preparación, se disuelven 4 g de NAC aproximadamente a la mitad de agua disponible y se disuelve en el agua restante 12 g de la base DEAE-dextrano. Las dos soluciones son combinadas a continuación y filtradas utilizando un filtro esterilizante de 0,2 µm. Además del valor de osmolaridad antes mencionado, el compuesto muestra una viscosidad de 21 mPa.s y un flujo de tipo Newtoniano.

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Ejemplo 2 El compuesto hipotónico según la invención contiene, en este caso, un conservante de acuerdo con la formulación siguiente:

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N-AC Base DEAE-dextrano Cloruro de Benzalkonio Agua Destilada Estéril H2 O pH = 8,23;

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4,0 g 12,0 g 0,01 g Hasta 100 ml

Osmolaridad = 245 mOsm/Kg

Para la preparación, se disuelven separadamente N-AC, DEAE-dextrano y cloruro de benzalkonio en agua destilada. A continuación, las soluciones son combinadas y filtradas utilizando un filtro esterilizante de 0,2 µm. En caso necesario, la osmolaridad puede ser llevada a un valor fisiológico de 300 mOsm/kg por añadidura de NaCl. 7

ES 2 247 372 T3 Ejemplo 3

5

Teniendo en cuenta las proporciones equivalentes ya determinadas tal como se ha descrito anteriormente, y procediendo para la preparación de manera similar a los ejemplos ilustrados anteriormente, se produce un preparado hipotónico basado en N-acetil-cisteína y DEAE-dextrano de acuerdo con la siguiente formulación: N-AC Base DEAE-dextrano Agua Destilada Estéril H2 O

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pH = 6,2; 15

3,0 g 9,0 g Hasta 100 ml

Osmolaridad = 185 mOsm/Kg

Ejemplo 4 Se obtiene un preparado hipotónico más concentrado, con un proceso de preparación similar, pero con las siguientes cantidades

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N-AC Base DEAE-dextrano Agua Destilada Estéril H2 O 25

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pH = 6,5;

5,0 g 15,0 g Hasta 100 ml

Osmolaridad = 307 mOsm/Kg

Se indican a continuación otros ejemplos de formulaciones que muestran la presencia opcional de otros incrementadores de la viscosidad, cuyas concentraciones están comprendidas en general entre 0,5 y 3% en peso. En todos los casos, el procedimiento para la preparación es similar a los que se han indicado en los ejemplos anteriores y se obtienen en todos los casos productos hipotónicos. Ejemplo 5

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N-AC Base DEAE-dextrano Alcohol Polivinílico* Agua Destilada Estéril

40

4,0 g 12,0 g 0,5 Hasta 100 ml

*Poliviol W 48/20, Wacker Chernie

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Ejemplo 6 N-AC Base DEAE-dextrano Hidroxipropil Celulosa* Agua Destilada Estéril

50

4,0 g 12,0 g 0,4 Hasta 100 ml

*Klucel MF, Aqualon Co. 55

60

Ejemplo 7 N-AC Base DEAE-dextrano Ácido Hialurónico* Agua Destilada Estéril

4,0 g 12,0 g 0,2 Hasta 100 ml

*Hialastine, Fidia S.p.A. 65

8

ES 2 247 372 T3 Ejemplo 8 N-AC Base DEAE-dextrano Polivinilpirrolidona* Agua Destilada Estéril

5

4,0 g 12,0 g 0,4 Hasta 100 ml

*Kollidon PF 12, BASF 10

A efectos de valorar el comportamiento de los compuestos según la presente invención, se llevarán a cabo varios experimentos y algunos de los resultados se reproducen a continuación. 15

Estudios de biocompatibilidad Se llevaron a cabo estudios de biocompatibilidad en vivo en ojos de conejo administrando 50 µl de la formulación descrita en el ejemplo 2, a intervalos próximos. No se observaron signos primarios de irritación. 20

Estudios de estabilidad

25

Las formulaciones fueron sometidas a autoclave (120ºC, 20 min): tal como se ha destacado en la técnica anterior, se degrada la N-acetil-cisteína aproximadamente al 30% (tanto en presencia como en ausencia de cloruro de benzalkonio). No obstante, es posible llevar a cabo la esterilización por filtrado a través de una membrana de 0,2 µm, tal como se llevó a cabo en los ejemplos anteriores. Método analítico utilizado para determinar N-AC en presencia de DEAE-dextrano.

30

A efectos de evaluar la estabilidad de N-AC en el vehículo, no es posible utilizar el método HPLC o espectrofotometría ultravioleta. El siguiente método colorimétrico fue utilizado por lo tanto (Raggi M.A., Cavrini V. y Di Pletra A.M., Colorimetric determination of acetylcysteine, penicillamine and mercaptopropionylglycine in pharmaceutical dosage forms, J. Pharm. Sci., 71, 1384-1386 (1982)).

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Reactivos utilizados • 1.10-fenantrolina 0,25% (100 ml) • Solución férrica 4x10−3 M (1000 ml)

40

• Acetato tampón pH 4 (100 ml) • Acetato sódico 0,2 M (100 ml) 45

Preparación de reactivos t O-fenantrolina 0,25%

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Se disuelve 0,25 gramos del compuesto en H2 O destilada y después de ligero calentamiento, es llevada al volumen requerido con H2 O destilada. La solución es almacenada durante tres días en un contenedor de vidrio oscuro alejado de la luz. t Solución férrica

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Se disuelven 1,92 g de FeNH4 SO4 x 12 H2 O en H2 O destilada y a continuación se trata con 10 ml de HCl concentrado. Se lleva al volumen requerido con agua destilada. La solución es almacenada durante tres días en un contenedor de vidrio oscuro alejado de la luz. t Tampón pH4

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Se obtiene mezclando 75 ml de 0,1 M CH3 COOH con 25 ml de 0,1 M CH3 COONa. En caso necesario, el pH puede ser ajustado con la solución de 0,2 M CH3 COONa. Preparación de estándares 65

Se disuelven 0,163 g de acetilcisteína en 500 ml de H2 O destilada. Diluyendo en una proporción 1:5, se obtiene la concentración requerida. 9

ES 2 247 372 T3 Volúmenes crecientes de esta solución (1-5 ml)son colocados en un recipiente de 25 ml y, a continuación, se añade lo siguiente de manera sucesiva: • 6 ml de solución férrica 5

• 2,5 ml de o-fenantrolina 0,25% • 3,5 ml de 0,2 M NaOAc 10

• 4,5 ml de pH 4 tampón Después de 20 minutos la absorbencia, se mide a 515 nm utilizando como referencia un control preparado al mismo tiempo que la muestra.

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El procedimiento descrito anteriormente fue aplicado también para llevar a cabo la calibración de N-AC en presencia de DEAE-dextrano. Para estas muestras, la medición fue llevada a cabo utilizando como referencia un control que contenía el polímero y también un control sin DEAE-dextrano. Los espectros son comparables. Comparando el espectro obtenido con N-AC con el obtenido por las muestras que contienen también el polímero, se puede confirmar que DEAE-dextrano no interfiere con la absorción, sino que modifica su intensidad. Estudios de actividad en el modelo experimental de síndrome de ojos secos en conejos.

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Las pruebas fueron llevadas a cabo en un grupo de 10 conejos de Nueva Zelanda, machos, albinos con un peso de 2-2,5 kg mantenidos en condiciones estándar. La formulación del ejemplo 2 (llamada DEAEN-AC) fue comparada no solamente con controles que solamente recibían solución fisiológica, sino también con una formulación disponible comercialmente (hipertónica) conteniendo 4% N-AC. Una gota de solución de sulfato de atropina (AS) a 1,0% fue administrada en ambos ojos de los animales tres veces al día durante cinco veces consecutivos a efectos de provocar un estado experimental de ojos secos (Burgalassi S., Panichi L., Chetoni P., Saettone M. F., y Boldrini E., Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes, Ophthalmic Res. 31, 229-235 (1999)). Después de cinco minutos de administración de AS, se instilaron solamente en el ojo derecho 50 µl (correspondiendo a una gota) de una de las formulaciones bajo estudio o de una solución fisiológica (grupo de control).

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A intervalos de tiempo apropiados (2,3,4 y 5 días desde el inicio del tratamiento) los animales fueron sometidos a la prueba Schirmer y a la observación de la superficie ocular, después de manchado con fluoresceina sódica por lámpara ranurada con un filtro azul de cobalto. 40

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La prueba Schirmer prevé la introducción de una tira de papel secante de dimensiones y material estándar en el tercio externo del fórnix conjuntivo inferior. Dicha tira se deja en su lugar durante un periodo de tiempo fijo (3 min). El tiempo necesario para que el fluido lacrimal suba y la longitud en milímetros de la parte de papel humedecida por las lágrimas proporcionan la medición de la secreción lacrimal. Los resultados de pruebas obtenidas en los diferentes estados de tratamiento se indican en la figura 2. El eje vertical del gráfico indica los milímetros de tira humedecida en tres minutos. La línea no interrumpida (línea base) corresponde al valor fisiológico promedio, observado en los animales sin tratar (21,2 mm). Se podrá observar que en, los ojos tratados con solución fisiológica (grupo de control), existe una clara disminución de las secreciones lacrimales, que continúa durante los cinco días de la observación. Las puntuaciones de la prueba Schirmer para la formulación comercial no difieren notablemente de las de grupo de control, excepto en el segundo día de observación. La formulación según la presente invención (DEAE/N-AC) produce, por el contrario, mejores puntuaciones desde, el tercer día, que las de la línea base. La formulación parece por lo tanto capaz de contrastar de manera efectiva los efectos de la producción lacrimal disminuida provocada por la atropina. La figura 3 muestra los resultados obtenidos por la observación, mediante una lámpara de ranura, de la córnea de los animales después de manchado con fluoresceina sódica. Esta coloración destaca las alteraciones (lesiones cornianas) producidas por tratamiento AS, del tipo que se encuentra normalmente en ojos con síndrome de ojos secos. Para cada tratamiento, los valores se expresan en forma de porcentaje de ojos en los que se observaron puntos intensamente colorados (correspondiendo a alteraciones epiteliales de la córnea) con respecto al número total de ojos examinados desde el tercer al quinto día de tratamiento. Tal como se ha podido observar, a diferencia de la formulación comercial, la formulación del ejemplo 2 según la presente invención reduce el número total de alteraciones observadas prácticamente a cero.

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ES 2 247 372 T3 REIVINDICACIONES

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1. Compuesto oftálmico basado en acetilcisteína para la administración en forma de gotas oculares, conteniendo N-acetil-cisteína neutralizada con base DEAE-dextrano y que tiene una osmolaridad fisiológicamente aceptable. 2. Compuesto oftálmico, según la reivindicación 1, en el que dicha osmolaridad es menor de 320 mOsm/kg.

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3. Compuesto oftálmico, según la reivindicación 2, que tiene una osmolaridad inferior a 300 mOsm/kg y un pH comprendido entre 6,0 y 7,5. 4. Compuesto oftálmico, según la reivindicación 3, en el que dicho pH está comprendido entre 6,2 y 7,0.

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5. Compuesto oftálmico, según las reivindicaciones 1 a 4, que contiene, en agua, de 3 a 5% en peso de N-acetilcisteína y de 9 a 15% en peso de DEAE-dextrano. 6. Compuesto oftálmico, según las reivindicaciones 1 a 5, en forma de una solución o suspensión acuosa en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable.

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7. Compuesto oftálmico, según la reivindicación 6, que contiene también otros polímeros incrementadores de la viscosidad. 8. Compuesto oftálmico, según la reivindicación 7, en el que dichos polímeros incrementadores de la viscosidad son seleccionados entre el grupo que consiste en : alcohol polivinílico, hidroxipropil celulosa, ácido hialurónico, polivinilpirrolidona, sulfato de condoitrina. 9. Compuesto oftálmico, según las reivindicaciones 6 ó 7, que contiene también conservantes, antimicrobianos y/o agentes quelatantes.

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10. Compuesto oftálmico, según las reivindicaciones 1 a 9, que contiene 4% en peso de N-acetil-cisteína 12% del peso de DEAE-dextrano con un pH comprendido entre 6,2 y 7 y una osmolaridad comprendida entre 240 y 300 mOsm/kg.

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